免疫調(diào)節(jié)范文

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篇1

對于這些疾病我們在一方面要給予抗感染治療，另一方面要提高機(jī)體的免疫力，調(diào)整患兒的免疫狀況，合理應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑，提高患兒的機(jī)體免疫功能，縮短反復(fù)呼吸道感染的病程，減少復(fù)發(fā)率。

免疫調(diào)節(jié)劑：是指一類可通過不同方式促進(jìn)機(jī)體免疫功能的藥物，如果運(yùn)用得好，可以減少抗生素的使用，同時(shí)縮短療程，加上解熱鎮(zhèn)痛藥效果更顯著。

匹多莫德顆粒為一全新的免疫增強(qiáng)劑，該藥無直接抗微生物的作用，其藥效是通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)中免疫因子或免疫細(xì)胞的活性來實(shí)現(xiàn)，對特異性免疫和非特異性免疫均有促進(jìn)作用，通過增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫、體液免疫途徑發(fā)揮抗細(xì)菌、抗病毒、抗真菌作用。且療效可靠，安全性好，不良反應(yīng)小，無蓄積作用，長期使用耐受性好，是一個(gè)既可用于治療又可預(yù)防各種感染的低毒高效免疫調(diào)節(jié)劑。兒童用藥、急性期用藥：開始兩周，每次0.4克，一日二次(早晚各一次)，隨后減為每次0.4克，一日一次(早餐前)連續(xù)60天或遵醫(yī)囑。

篇2

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金 （81171837， 81000023）

作者單位：200032 上海，復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院急診科

通信作者：童朝陽， Email：

膿毒癥（sepsis）是危重病患者死亡的首要原因，在所有引起居民死亡的病因中膿毒癥排在第10位[1]。早期對膿毒癥發(fā)病機(jī)制的研究認(rèn)為，失控的、持續(xù)放大的全身性炎癥反應(yīng)（SIRS）是引起膿毒癥患者死亡的主要原因[2]。但隨著支持治療手段的提高，絕大部分患者能夠度過嚴(yán)重的全身炎癥反應(yīng)階段即免疫亢進(jìn)期，進(jìn)入更加復(fù)雜的免疫抑制（麻痹）期。近年來對死亡的膿毒癥患者進(jìn)行尸檢發(fā)現(xiàn)，膿毒癥后期表現(xiàn)為嚴(yán)重的免疫麻痹，且持續(xù)數(shù)天甚至數(shù)周。免疫麻痹導(dǎo)致后期出現(xiàn)繼發(fā)性感染，大部分感染的病原體是多種耐藥的細(xì)菌或真菌，無法控制的感染最終導(dǎo)致患者死亡。盡管早期液體復(fù)蘇、感染灶的及時(shí)清除、抗生素的早期使用及器官功能支持的“集束化治療”是膿毒癥治療的基石，但膿毒癥的病死率仍居高不下。因此，不斷探討和研究新的治療方法和理念迫在眉睫。近年來已經(jīng)認(rèn)識(shí)到免疫麻痹是嚴(yán)重膿毒癥患者死亡的主要原因，近期有多項(xiàng)研究證實(shí)免疫增強(qiáng)（刺激）治療能夠改善膿毒癥患者的病情和提高生存率。本文將總結(jié)膿毒癥免疫功能紊亂研究的最新認(rèn)識(shí)，探討膿毒癥免疫增強(qiáng)治療的可能性。

1 膿毒癥免疫功能紊亂的傳統(tǒng)認(rèn)識(shí)

當(dāng)病原微生物突破皮膚、黏膜等入侵到人體后，機(jī)體快速啟動(dòng)非特異性（固有）免疫系統(tǒng)識(shí)別和清除致病微生物。固有免疫反應(yīng)不僅是機(jī)體抵御外界微生物感染的第一道防線，其在誘導(dǎo)和激活獲得性免疫中也發(fā)揮著重要作用。宿主細(xì)胞通過表達(dá)幾類病原模式識(shí)別受體（PRRs）來識(shí)別病原體的保守結(jié)構(gòu)即病原相關(guān)分子模式（PAMPs）。常見的PAMPs包括脂多糖、肽聚糖、鞭毛蛋白及微生物的核酸分子等。PRRs主要包括定位于炎癥細(xì)胞膜和內(nèi)體膜上的Toll樣受體（TLRs）和C型凝集素受體（CLRs）、胞漿內(nèi)的NOD樣受體（NLRs）、視黃酸誘導(dǎo)基因I解旋酶（RIG-I）樣受體（RLRs）和HIN200蛋白等。除識(shí)別PAMPs外， 這些受體同時(shí)也可以識(shí)別由于組織損傷和細(xì)胞死亡而釋放的內(nèi)源性物質(zhì)如熱休克蛋白、DNA和RN段等內(nèi)源性的危險(xiǎn)信號。PAMPs被PRRs識(shí)別后啟動(dòng)下游的NF-κB信號通路， 引起炎癥介質(zhì)的生成并介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。適度的炎癥反應(yīng)有利于病原體的清除；但如果NF-κB信號通路持續(xù)激活，則引起炎癥介質(zhì)“瀑布樣”的釋放，過度的炎癥反應(yīng)對機(jī)體造成不利的影響，導(dǎo)致組織和器官功能的損傷。

過去的研究認(rèn)為炎癥介質(zhì)的過量生成是膿毒癥發(fā)病的主要病理過程[3]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究均證實(shí)炎癥介質(zhì)TNF-α和IL-1β等在膿毒癥的發(fā)病過程中發(fā)揮了重要的作用。而且有較多的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)抗炎癥治療、拮抗內(nèi)毒素的治療能夠改善膿毒癥小鼠的預(yù)后。但隨后以“免疫亢進(jìn)”為理論基礎(chǔ)的，一系列（約25項(xiàng)）炎癥介質(zhì)（TNF-α和IL-1β等）單克隆抗體的臨床實(shí)驗(yàn)，均發(fā)現(xiàn)“免疫抑制”治療不能改善膿毒癥患者的預(yù)后[4]。近期被寄予厚望的阻斷LPS與MD2-TLR4受體結(jié)合的拮抗劑（Eritoran， NCT00334828）治療膿毒癥的臨床研究也以失敗而告終[5]。所有這些臨床研究的失敗促使我們要重新認(rèn)識(shí)免疫亢進(jìn)對膿毒癥患者死亡的影響以及膿毒癥患者的免疫狀態(tài)。

2 膿毒癥免疫功能紊亂的再認(rèn)識(shí)

近年來臨床研究和膿毒癥患者的尸檢發(fā)現(xiàn)免疫麻痹是膿毒癥患者死亡的主要原因。隨著支持治療手段的提高，絕大部分患者能夠度過免疫亢進(jìn)期，進(jìn)入更加復(fù)雜的免疫麻痹期[6-7]。Ertel 等[8]發(fā)現(xiàn)用LPS刺激膿毒癥和非膿毒癥患者的靜脈血后，與非膿毒癥患者相比膿毒癥患者分泌的炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-1β和 IL-6量減少10%～20%。Sinistro等也發(fā)現(xiàn)與其他患者相比，膿毒癥患者外周血僅有5%的單核細(xì)胞功能正常[9]。這些研究結(jié)果告訴我們機(jī)體在受到嚴(yán)重的感染后炎癥反應(yīng)和抗炎癥反應(yīng)均參與了膿毒癥的發(fā)病，膿毒癥后期抗炎癥反應(yīng)占明顯的優(yōu)勢、炎癥細(xì)胞功能失調(diào)，機(jī)體處于免疫麻痹狀態(tài)。另外，有研究發(fā)現(xiàn)自身免疫性疾病的患者使用TNF-α拮抗劑治療后膿毒癥的發(fā)病率和病死率明顯增加[10]。

2011年Boomer等[11]在Lancet雜志發(fā)表了膿毒癥患者的尸檢報(bào)告，發(fā)現(xiàn)膿毒癥死亡的患者均表現(xiàn)為嚴(yán)重的免疫抑制。與ICU非膿毒癥患者相比，嚴(yán)重膿毒癥死亡患者的脾細(xì)胞在受到抗CD3和CD28刺激5 h后，炎癥因子TNF-α （5361 pg/mLvs. 418 pg/mL）、 INF-γ （1374 pg/mL vs. 37.5 pg/mL）、 IL-6 （3691 pg/mL vs. 365 pg/mL） 和IL-10 （633 pg/mL vs. 58 pg/mL） 的分泌量明顯減少，不到對照組的10%。與非膿毒癥死亡組相比，膿毒癥死亡組的患者脾細(xì)胞和肺上皮細(xì)胞表面CD4、CD8、協(xié)同刺激分子受體CD28和HLA-DR的表達(dá)明顯減少甚至缺乏，而CD28超家族成員中免疫共抑制分子-細(xì)胞程序性死亡受體-1 （programmed cell death-1， PD-1）和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4 （CTLA-4）的表達(dá)明顯增加。新生兒和兒童膿毒癥患者的尸檢也發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞凋亡、數(shù)量減少和功能失調(diào)介導(dǎo)的免疫麻痹是引起患者死亡的主要原因[12]。持續(xù)的免疫麻痹導(dǎo)致患者對原發(fā)性致病微生物不能有效的清除，而且隨著住院時(shí)間的延長和各種有創(chuàng)操作的增多，患者合并院內(nèi)機(jī)會(huì)性病原菌的感染。2009年Torgersen等對235例死亡的膿毒癥患者進(jìn)行了尸檢，發(fā)現(xiàn)盡管所有的患者均使用了廣譜的抗生素和進(jìn)行了感染灶的清除，但仍有76.6%的患者在死亡時(shí)感染沒有得到有效的控制、感染灶仍存在；且大部分患者出現(xiàn)了新發(fā)部位和致病菌的院內(nèi)感染，42.5%的患者出現(xiàn)2個(gè)以上的部位感染；其主要原因是患者的免疫功能受到了嚴(yán)重的抑制[13]。另外，多項(xiàng)臨床研究發(fā)現(xiàn)大部分膿毒癥患者后期出現(xiàn)了院內(nèi)獲得性的二重感染，金黃色葡萄球菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌和白色念珠菌等條件致病菌是引起患者死亡的主要致病病原體[14]。Luyt等和Limaye等發(fā)現(xiàn)部分膿毒癥患者后期出現(xiàn)了單純皰疹病毒和巨細(xì)胞病毒等潛伏病毒的感染[15-16]。這些臨床研究告訴我們膿毒癥患者隨著病程的延長而出現(xiàn)了免疫麻痹，從而繼發(fā)了機(jī)會(huì)性致病菌的感染，最終導(dǎo)致了患者死亡。

3 免疫增強(qiáng)治療膿毒癥的基礎(chǔ)和臨床研究

隨著對膿毒癥尤其是病程后期免疫麻痹認(rèn)識(shí)的深入，近年來對膿毒癥免疫調(diào)節(jié)的治療也發(fā)生了變化，動(dòng)物試驗(yàn)和臨床研究均顯示免疫增強(qiáng)治療能夠改善患者的免疫狀態(tài)，清除致病微生物，減少獲得性感染的發(fā)生率，降低病死率。目前研究較多的免疫增強(qiáng)藥物有：粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）、干擾素-γ （IFN-γ）、胸腺肽 （Tα1）、白介素-17 （IL-17） 和PD-1拮抗劑等。

GM-CSF是一種多效性細(xì)胞因子，它與GM-CSF受體結(jié)合后促進(jìn)多種造血細(xì)胞的存活、增殖和分化，并通過提高中性粒細(xì)胞/單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等的數(shù)量而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。動(dòng)物研究證實(shí)GM-CSF能夠增加膿毒癥大鼠循環(huán)中免疫細(xì)胞mHLA-DR的表達(dá)和炎癥介質(zhì)的生成[17]。近年來臨床研究發(fā)現(xiàn)GM-CSF對膿毒癥患者具有一定的治療作用。2011年Bo等利用Meta分析對12項(xiàng)RCT研究、共納入2380例膿毒癥患者進(jìn)行了系統(tǒng)的分析，發(fā)現(xiàn)GM-CSF明顯增加了膿毒癥患者感染灶的清除，但對28 d的存活率無明顯的改善，這可能與入組患者膿毒癥發(fā)病時(shí)間不一、免疫狀態(tài)不同相關(guān)[18]。有研究發(fā)現(xiàn)如果選擇免疫患者進(jìn)行GM-CSF刺激治療，則能取得較好的療效。Hall等[19]利用LPS刺激膿毒癥患者外周血提取的單核細(xì)胞，對刺激后TNF-α分泌少于200 pg/mL的患者，診斷為免疫抑制；給予這部分患者GM-CSF治療后TNF-α的分泌增加，院內(nèi)獲得性繼發(fā)感染的可能性明顯減少。2009年，Meisel等[20]采用以mHLA-DR標(biāo)志物為指導(dǎo)，對嚴(yán)重膿毒癥患者進(jìn)行GM-CSF免疫增強(qiáng)治療取得了成功。研究者對嚴(yán)重膿毒癥合并免疫麻痹狀態(tài)的患者（mHLA-DR

IFN-γ由活化的Th細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生，其主要的生物學(xué)功能是通過誘導(dǎo)多種抗原提呈細(xì)胞表達(dá)MHC-Ⅰ/Ⅱ分子，活化單核和巨噬細(xì)胞并增強(qiáng)其溶菌活性、分泌IL-1、IL-6、IL-8和TNF-α等炎癥介質(zhì)發(fā)揮免疫增強(qiáng)作用。IFN-γ還能活化中性粒細(xì)胞、NK細(xì)胞，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞合成黏附分子，促進(jìn)Th1細(xì)胞發(fā)育和抑制Th2細(xì)胞活化與增殖，刺激B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體類型向調(diào)理素方向轉(zhuǎn)變。目前小樣本的臨床研究發(fā)現(xiàn)IFN-γ治療膿毒癥是有效的。Docke等[21]發(fā)現(xiàn)IFN-γ治療單核細(xì)胞表達(dá)HLA-DR和TNF-α分泌減少的膿毒癥患者，增加單核細(xì)胞HLA-DR的表達(dá)、CD4 T細(xì)胞生成 IL-17增加，膿毒癥患者的存活率提高。Nalos等[22]發(fā)現(xiàn)IFN-γ能夠有效的治療持續(xù)性金黃色葡萄球菌感染的患者，IFN-γ治療后患者的免疫抑制等到有效的改善，致病病原體被清除。另外有研究發(fā)現(xiàn)，給予健康成年人，反復(fù)多次注射內(nèi)毒素模擬膿毒癥誘導(dǎo)的免疫模型。研究發(fā)現(xiàn)在第2次注射內(nèi)毒素前給予IFN-γ注射不但能夠增加mHLA-DR的表達(dá)，而且也能夠恢復(fù)炎癥介質(zhì)TNF-α的分泌，抗炎癥介質(zhì)IL-10的分泌也明顯減少[23]。

Tα1是正常人體內(nèi)分泌和合成的物質(zhì)，能夠刺激淋巴細(xì)胞的增殖、分化，激活樹突狀細(xì)胞，從而具有增強(qiáng)人體細(xì)胞免疫功能的作用。管向東教授課題組通過多中心、隨機(jī)對照研究發(fā)現(xiàn)Tα1能夠降低嚴(yán)重膿毒癥患者的病死率，治療組和對照組患者的病死率分別為26.0%和35.0% （P=0.049）。Tα1治療能夠改善患者的免疫抑制狀態(tài)，治療組患者第3天和第7天外周血單核細(xì)胞mHLA-DR的表達(dá)明顯高于對照組[24]。

IL-7是一種多效應(yīng)的細(xì)胞因子，能夠誘導(dǎo)幼稚的記憶性T細(xì)胞增殖。美國腫瘤研究所的臨床研究發(fā)現(xiàn)IL-7治療后循環(huán)中CD4和CD8T細(xì)胞的數(shù)量增加2倍，脾臟和外周的淋巴結(jié)中的T細(xì)胞增加了50%。HIV感染、CD4 T細(xì)胞持續(xù)低下的患者，IL-7治療后CD4和CD8 T細(xì)胞生成細(xì)胞因子的能力增加了2～3倍。膿毒癥時(shí)IL-7通過各種途徑發(fā)揮作用，使T細(xì)胞激活、恢復(fù)低反應(yīng)性或者耗竭的T細(xì)胞的功能，增加細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，這些黏附分子能夠增強(qiáng)T細(xì)胞到感染灶的聚集和黏附，增加T細(xì)胞受體的分化，導(dǎo)致免疫功能的增強(qiáng)，抵抗入侵的病原微生物[25-26]。

負(fù)性共刺激因子PD-1存在于T細(xì)胞上，通過PD-1通路能夠抑制細(xì)胞的增殖、細(xì)胞因子的生成、細(xì)胞毒。慢性持續(xù)性的感染如HIV和肝炎病毒的感染等PD-1的過量生成和T細(xì)胞耗盡。目前已有3項(xiàng)研究證實(shí)阻斷PD-1通路能夠提高慢性細(xì)菌和病毒感染的存活率。有研究發(fā)現(xiàn)膿毒癥患者循環(huán)中T細(xì)胞表面的PD-1明顯增加，動(dòng)物研究發(fā)現(xiàn)阻斷PD-1的信號傳導(dǎo)能夠提高膿毒癥的存活率，提高膿毒癥大鼠對致病微生物的清除率[27-28]。

參考文獻(xiàn)

篇3

依據(jù)課程標(biāo)準(zhǔn)：1、概述人體免疫系統(tǒng)在維持穩(wěn)態(tài)中的作用（理解）2、關(guān)注艾滋病的流行和預(yù)防。（認(rèn)同）和高考的具體要求，確定本節(jié)課的復(fù)習(xí)導(dǎo)引。

四個(gè)考點(diǎn)：1、免疫系統(tǒng)的組成2、體液免疫與細(xì)胞免疫比較3、記憶細(xì)胞與二次免疫4、免疫失調(diào)疾病及免疫學(xué)的應(yīng)用

二、教學(xué)過程 （首先通過典型性例題切入，而后分層次進(jìn)行探究。）

一）、免疫系統(tǒng)的組成

【問題探究】如圖（圖略）為某生物體中的一系列生化反應(yīng)示意圖，描述中不正確的是

A.場所1是人體的重要免疫器官 B.過程a是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果

C.過程b產(chǎn)生的物質(zhì)X可以和Y特異性結(jié)合

D.細(xì)胞C和細(xì)胞E中核酸完全相同

對題目的分析、運(yùn)用：

①請學(xué)生選擇答案并講明理由；②對題目的圖形進(jìn)行分析，利用突破點(diǎn)（物質(zhì)x；場所1，場所2），強(qiáng)化審題的方法；③分析外源異物Y能否直接作用于細(xì)胞A細(xì)胞B，分析一般途徑；④總結(jié)免疫系統(tǒng)組成的三個(gè)層次（可以利用‘免疫細(xì)胞的起源和分化’過程進(jìn)行總結(jié)）。

【問題拓展】？免疫系統(tǒng)的組成

通過對圖形進(jìn)行分析，完成以下內(nèi)容（圖略）

①圖形的進(jìn)一步完善，淋巴因子的作用，免疫系統(tǒng)的構(gòu)成

②補(bǔ)充溶菌酶的來源

③延伸：免疫的三道防線

【體驗(yàn)高考】：（2011?重慶卷，3）

某人因過量注射美容制劑而出現(xiàn)頭昏、站立不穩(wěn)等癥狀。經(jīng)診斷后，醫(yī)生為其注射了肉毒桿菌抗毒素進(jìn)行治療，目的是（ ）

A.中和體內(nèi)的肉毒桿菌毒素

B.中和體內(nèi)的肉毒桿菌凝集素

C.刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體發(fā)揮體液免疫作用

D.刺激機(jī)體釋放出淋巴因子發(fā)揮細(xì)胞免疫作用

二）、特異性免疫的有關(guān)內(nèi)容

問題導(dǎo)引：如圖（圖略）表示人體某種免疫過程，下列關(guān)于此圖的敘述正確的是

A.圖中細(xì)胞A是效應(yīng)淋巴細(xì)胞

B.該過程是人體免疫的第三道防線

C.該過程屬于特異性免疫

D.該防線能防御多種病原體

題目的運(yùn)用：①吞噬細(xì)胞的分布特點(diǎn)，與T、B細(xì)胞分布的區(qū)別；②吞噬細(xì)胞的作用；③免疫調(diào)節(jié)的方式

【過渡】特異性免疫分為體液免疫和細(xì)胞免疫兩種， 對這兩類免疫中的有關(guān)問題咱們做一個(gè)簡單的探究

1、體液免疫與細(xì)胞免疫的比較

【問題探究】

①完成表格的填寫（表格略）

②對照表格和之前的內(nèi)容，請同學(xué)們嘗試寫出體液免疫和細(xì)胞免疫的過程

2、體液免疫和細(xì)胞免疫的過程 【問題拓展、核心突破】

①以學(xué)生為主導(dǎo)，分別寫出體液免疫和細(xì)胞免疫的過程； ②討論、完善免疫過程，并延伸到二次免疫；

③進(jìn)一步探討考試中經(jīng)常出現(xiàn)的問題

【過渡】在這部分內(nèi)容中，抗原與免疫活性物質(zhì)也是高考常考的考點(diǎn)。

3、抗原和抗體比較 【核心突破】

①由抗原的異物性，探討免疫的功能（防衛(wèi)、監(jiān)控、清除）；②抗原大多為蛋白質(zhì)，可以與基因工程聯(lián)系；③由抗毒素和凝集素分析抗體的具體作用；④利用下面的高考題分析做題的方法技巧，對學(xué)生進(jìn)行解題方法的指導(dǎo)，進(jìn)一步介紹淋巴因子的有關(guān)內(nèi)容。

（2011?大綱全國卷，5）研究發(fā)現(xiàn)兩種現(xiàn)象：①動(dòng)物體內(nèi)的B細(xì)胞受到抗原刺激后，在物質(zhì)利用甲的作用下，可增殖、分化為漿細(xì)胞；②給動(dòng)物注射從某種細(xì)菌獲得的物質(zhì)乙后動(dòng)物對這種細(xì)菌具有了免疫能力。則這兩種物質(zhì)中

A.甲是抗體，乙是抗原 B.甲是抗體，乙是淋巴因子

篇4

【摘要】 目的探討淮山藥粗多糖對小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。方法小鼠灌胃給予不同劑量（200，400和800 mg/kg）的淮山藥多糖，1次/d，連續(xù)8 d，進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)（MTT法）、測定血清溶血素測定（半數(shù)溶血值法）、小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)。結(jié)果山藥多糖具有增強(qiáng)小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力的作用，促進(jìn)小鼠抗體生成的作用和增強(qiáng)小鼠碳廓清能力的作用。結(jié)論淮山藥多糖具有一定的免疫功能增強(qiáng)作用。

【關(guān)鍵詞】 淮山藥；多糖；免疫調(diào)節(jié)

Abstract：ObjectiveTo investigate the immunologic enhancement of Dioscorea opposita Thunb.polysaccharide.MethodsDioscorea opposita Thunb.polysaccharide in different dosages(200，400，800 mg/kg)were given by IG for 8 d.A series of tests were carried out，such as the spleen lymph cells transformation of Con A inducing method (MTT method)，hemolytic test of blood serum and hem chrome and mouse carbon test.ResultsThe results showed that Dioscorea opposita Thunb.polysaccharide was significant to Con A induced mice Lymphocyte transformation test；HC50 raised in all three concentrations;ratio of monocyte-macrophage carbon grain elimination has significant changes to the control.ConclusionDioscored opposita Thunb.polysaccharide possesses a potential effect of immune regulation.

Key words：Dioscorea opposita Thunb.; Polysaccharide; Immunity moderation

山藥屬常用中藥，味甘、性平，具有補(bǔ)脾養(yǎng)胃、生津益肺、補(bǔ)腎澀精等作用。山藥多糖Dioscorea opposita Thunb.polysaccharide是從山藥中分離提純的水溶性多糖成分，具有免疫調(diào)節(jié)作用。以往有關(guān)山藥的藥理研究多針對河南省出產(chǎn)的鐵棍山藥和太谷山藥等懷山藥品種。而山藥在全國大部分地區(qū)均有栽培，淮山藥為其在淮河中下游地區(qū)（江蘇、安徽兩省北部）傳統(tǒng)栽培品種。以食用為主，兼作藥用。對淮山藥等山藥地方品種的藥理作用至今仍缺乏研究。為了充分利用淮山藥資源，本實(shí)驗(yàn)研究了江蘇產(chǎn)淮山藥粗多糖對小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。

1 材料

1.1 樣品淮山藥Disoscorea oppostita Thunb.來源：淮山藥采自江蘇省灌南縣花苑鄉(xiāng)。

將淮山藥削皮切片，曬干后粉碎，干燥后稱取粗粉（60目）900.0 g，加入適量蒸餾水在水浴中浸提，其間不斷攪拌，靜置冷卻后離心（3 000 r/min，5 min）除去不溶物，收集上清液，減壓濃縮。在冷卻后的上清液中加入95%乙醇至醇含量在80%以上，不斷攪拌，有大量沉淀生成，離心，收集沉淀，分別用無水甲醇和乙醚洗滌，以除去水分和雜質(zhì)，得到灰白色粉末狀粗多糖38.88 g(1 g粉末相當(dāng)于生藥23.14 g)。粗多糖得率可以達(dá)到4.32%，該粗多糖中含有18.43% 的山藥多糖。

1.2 動(dòng)物和細(xì)胞ICR種小鼠18～22 g，雄性，中國科學(xué)院上海克萊斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號：SCXK（滬）2003-2004。豚鼠，由江寧青龍動(dòng)物養(yǎng)殖場提供，動(dòng)物使用許可證號：（蘇）2002-0057。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均食用全價(jià)顆粒飼料，自由攝食飲水。YAC-1細(xì)胞，由南京中醫(yī)藥大學(xué)海洋中心藥理毒理室提供。

1.3 綿羊紅細(xì)胞（SRBC）與補(bǔ)體制備健康綿羊頸脈取血，將羊血放入有玻璃珠的滅菌錐形瓶中朝一個(gè)方向搖動(dòng)，以脫纖維，用阿氏液保存于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｓ脮r(shí)生理鹽水2000 r/min離心10 min洗滌3遍。

采集豚鼠血，分離出血清（至少5只豚鼠的混合血清），前將1 ml壓積SRBC加入到5 ml豚鼠血清中，放4℃冰箱30 min，經(jīng)常振蕩，離心取上清，分裝小瓶，-70℃保存。用時(shí)以生理鹽水按1∶10稀釋。

2 方法

小鼠隨機(jī)分為對照組（給予蒸餾水）及山藥多糖200，400，800 mg/kg［1］ 3個(gè)劑量組，每組10只。灌胃體積0.1 ml/10 g體重，1次/d，連續(xù)8 d。

2.1 C onA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)1640培養(yǎng)液用微孔濾膜過濾除菌，加入10%小牛血清、1%谷氨酰胺（200 mg/ml）、青霉素（100 mg/ml）、鏈霉素（100 mg/ml）及2-巰基乙醇（5 μmol/ml），用無菌HC1（1 mol/L）或無菌NaOH（1 mol/L）調(diào)pH至7.0～7.2，制成完全培養(yǎng)液；用7.2～7.4的PBS緩沖液作溶劑，現(xiàn)用現(xiàn)配MTT溶液（5 mg/ml）；以3.5%的無菌NaHCO3將無菌Hansks液pH調(diào)至7.2～7.4；用雙蒸水配制成100 μg/ml的ConA液，過濾除菌后，-20℃保存；在96 ml異丙醇中加入4 ml HCl（1 mol/L）制成酸性異丙醇溶液。各組動(dòng)物連續(xù)灌胃至第8天，每鼠頸椎脫臼處死，無菌取脾，于盛有適量無菌Hanks液的小平皿中，用攝子輕輕將脾撕碎，制成單個(gè)細(xì)胞懸液，200目過濾，用Hanks液多次洗滌、離心后懸浮于2 ml完全培養(yǎng)液中，用臺(tái)酚染色計(jì)活細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×106個(gè)/ml，分兩孔放入培養(yǎng)孔中，每孔1 ml，一孔加50 μl ConA液，另一孔作為對照，置5%CO2，37℃培養(yǎng)72 h，培養(yǎng)結(jié)束前4 h，每孔輕輕吸去上清液0.7 ml，加入0.7 ml不含小牛血清的1640培養(yǎng)液，同時(shí)加入50 mlMTT液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。培養(yǎng)結(jié)束，每孔加入1 ml酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解，移入1 ml比色杯中，于分光光度計(jì)，570 nm處測定光密度［2］。

2.2 血清溶血素測定—半數(shù)溶血值（HC50）的測定各組動(dòng)物連續(xù)灌胃至3 d時(shí)，每鼠腹腔注射2%（v/v）綿羊紅細(xì)胞懸液0.2 ml。5 d（期間不停止灌胃）后，小鼠經(jīng)眼眶取血于離心管中，放置1 h，3 500 r/min離心15 min，收集血清，血清用生理鹽水緩沖液稀釋320倍。將稀釋后血清1 ml置試管內(nèi)，依次加入10%（v/v）SRBC 0.5 ml，補(bǔ)體1 ml（用生理鹽水按1∶10稀釋），另設(shè)不加血清的對照管（以生理鹽水代替）。置37℃恒溫水浴中保溫30 min后，冰浴終止反應(yīng)。2 000 r/min離心10 min。取上清液1 ml，都氏試劑3 ml于試管內(nèi)，同時(shí)取10%（v/v）SRBC 0.25 ml加都氏試劑至4 ml，于另一支試管內(nèi)，作為SRBC的半數(shù)溶血值。充分混勻，放置10 min后，于540 nm處以對照管作空白，分別測定各管光密度值［2］。溶血素的量以半數(shù)溶血值（HC50）表示，按下列公式計(jì)算：

各小鼠的半數(shù)溶血值（HC50）=樣品管光密度SRBC半數(shù)溶血時(shí)的光密度×稀釋倍數(shù)

2.3 小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)將印度墨汁用生理鹽水稀釋4倍制成用墨汁，稱取1.0 gNa2CO3加蒸餾水至1 000 ml配置成0.1%Na2CO3溶液。各組動(dòng)物連續(xù)灌胃至8 d時(shí)，每鼠尾靜脈注入注射用墨汁（0.1 ml/10 g·bw），注入后立即計(jì)時(shí)，于注入后0.5 ，6 min分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20 μl，加到2 ml Na2CO3溶液中，用分光光度儀計(jì)在600 nm波長處測光密度值，以Na2CO3溶液作為空白對照。頸椎脫臼處死小鼠，取肝臟、脾臟，用濾紙吸干臟器表面血污，稱重［3］。按下列公式計(jì)算廓清指數(shù)K：

廓清指數(shù)K=（logOD50-logOD6）/(t6-t0.5)

2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)計(jì)量資料用（±s)表示，各組間實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的比較采用兩樣本均數(shù)t 檢驗(yàn)，P＜0.05有顯著差異。

3 結(jié)果

3.1 ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)（MTT法）用加ConA孔的光密度值減去不加ConA孔的光密度值代表淋巴細(xì)胞的增殖能力。結(jié)果如下。表1 淮山藥多糖對小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力的影響(略)

以上結(jié)果表明山藥多糖400，800 mg/kg劑量時(shí)，具有增強(qiáng)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的能力的作用。

3.2 血清溶血素的測定實(shí)驗(yàn)（HC50法）結(jié)果見表3。表3 淮山藥多糖對小鼠血清溶血素的影響(略)

以上結(jié)果表明淮山藥多糖各劑量都具有促進(jìn)小鼠抗體生成的作用。

3.3 小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。表4 淮山藥多糖對小鼠碳廓能力的影響(略)

以上結(jié)果表明淮山藥多糖800 mg/kg劑量時(shí)，具有增強(qiáng)小鼠碳廓清能力的作用。

4 討論

本研究測定了淮山藥粗多糖對小鼠免疫功能的影響。結(jié)果顯示淮山藥粗多糖對能增強(qiáng)小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力、促進(jìn)小鼠抗體生成、增強(qiáng)小鼠碳廓清能力等作用。結(jié)果表明淮山藥多糖對小鼠體液免疫、細(xì)胞免疫功能、非特異性免疫功能都有增強(qiáng)作用，具有一定的開發(fā)價(jià)值。

【參考文獻(xiàn)】

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部.保健食品功能學(xué)評價(jià)程序和檢驗(yàn)方法規(guī)范［S］.2003：22.

篇5

[關(guān)鍵詞] 雷公藤；抗炎；免疫調(diào)節(jié)；毒性；藥代動(dòng)力學(xué)

雷公藤Triptergium wilfordii Hook.f為衛(wèi)矛科一年生藤本植物，廣泛分布在中國南方，為中國的傳統(tǒng)中藥，具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗腫瘤、抗生育、抗菌等藥理作用，臨床用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[1]、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腎炎等自身免疫性疾病[2]。在皮膚科主要用于治療變態(tài)反應(yīng)性皮膚病、結(jié)締組織病、紅斑性皮膚病、丘疹鱗屑性皮膚病、大皰和無菌性膿皰性皮膚病、皮膚血管炎等[3]。并收到預(yù)期的良好效果，亦稱“中藥皮質(zhì)激素”。

1 雷公藤化學(xué)成分

雷公藤的化學(xué)成分復(fù)雜，早在1936年趙承嘏首先從雷公藤根部提取到萜類色素雷公藤紅素（tripterine），至今已從雷公藤屬植物提取380余種成分，主要是生物堿類、二萜類、三萜類、倍半萜，其中大多數(shù)是萜類物質(zhì)和生物堿類活性成分；研究表明，生物堿、二萜類、三萜類等既是有效成分，又是有毒成分[4]。常見單體成分見表1。

目前，已上市的雷公藤片、雷公藤多苷片、昆明山海棠片均為復(fù)方制劑，含有多個(gè)單體藥物，各種制劑來源、工藝、成分、質(zhì)量參差不齊，《中國藥典》2010年版僅對昆明山海棠片制定了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定總生物堿含量不得少于1.0 mg。國家藥典委員會(huì)關(guān)于中藥基本藥物標(biāo)準(zhǔn)草案的公示（第六批）規(guī)定“檢查”雷公藤甲素，每片含雷公藤甲素不得超過10 μg，“含量測定”雷公藤內(nèi)酯甲，每片含雷公藤內(nèi)酯甲不得少于10 μg。因而在藥代動(dòng)力學(xué)研究中，不能準(zhǔn)確定量地界定劑量及體內(nèi)作用活性的實(shí)際效果，容易混淆雷公藤的藥理作用與毒理作用，制約著臨床前研究及臨床研究中有效性和安全性的科學(xué)評價(jià)。最終后果反映在臨床、劑量、療效、不良反應(yīng)方面難以定性和定量分析、比較和判斷。

2 雷公藤中具有免疫調(diào)節(jié)作用的單體成分

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用的雷公藤單體成分有雷公藤內(nèi)酯甲[5]、雷公藤新堿[6]、雷公藤春堿[6-7]、雷公藤吉堿[7]、雷公藤堿戊[7-8]、雷公藤康堿[9]、異雷公藤春堿[9]、雷公藤氯內(nèi)酯醇[10-15]、雷公藤內(nèi)酯酮[16-18]、去甲澤拉木醛[19-21]、雷公藤甲素[22-24]、雷公藤紅素[25-26]、雷醇內(nèi)酯[27-28]。

2.1 雷公藤內(nèi)酯甲 Xue Mei等[5]設(shè)對照組、雷公藤甲素組（60 μg?kg-1）、雷公藤多苷片組（13.8 mg?kg-1）、雷公藤內(nèi)酯甲低劑量組（60 μg?kg-1）、雷公藤內(nèi)酯甲高劑量組（300 μg?kg-1）5組，采用角叉菜膠、棉球肉芽腫和二甲苯致炎，研究雷公藤內(nèi)酯甲的免疫抑制和抗炎作用，采用溶血素生成反應(yīng)、遲發(fā)性超敏反應(yīng)、碳廓清指數(shù)和免疫器官指數(shù)等指標(biāo)觀察其免疫抑制作用。結(jié)果，與對照組比較，雷公藤內(nèi)酯甲具有顯著的抗炎作用，免疫抑制作用較弱；與雷公藤甲素組和雷公藤多苷片組比較，其抗炎作用較弱。

2.2 雷公藤新堿和雷公藤春堿 鄭幼蘭等[6]用5%綿羊紅細(xì)胞（SRBC）致炎小鼠，觀察雷公藤新堿和雷公藤春堿對溶血素生成的影響，環(huán)磷酰胺10 mg?kg-1，雷公藤新堿和雷公藤春堿80 mg?kg-1均使最大溶血稀釋度下降至l∶256；雷公藤新堿和雷公藤春堿（80 mg?kg-1，ip）能夠顯著降低小鼠碳廓清指數(shù)和減低小鼠脾臟的質(zhì)量，且雷公藤春堿與環(huán)磷酰胺（30 mg?kg-1，ip）作用相似，效果優(yōu)于雷公藤新堿；雷公藤新堿80 mg?kg-1和環(huán)磷酰胺20 mg?kg-1對小鼠二硝基氯苯（DNCB）所致遲發(fā)型皮膚超敏反應(yīng)均有明顯的抑制作用；接種親本（親本給予雷公藤春堿160 mg?kg-1，ip）脾細(xì)胞懸液的注脾給藥組乳鼠，與接種親本（親本未給藥）脾細(xì)胞懸液的注脾組乳鼠及對照組乳鼠比較，注脾給藥組脾指數(shù)較注脾組明顯降低（P

2.3 雷公藤吉堿 虞海燕等[7]曾考察雷公藤單體對人外周

表1 雷公藤中常見單體成分及化學(xué)分類

Table 1 The common monomers of Tripterygium wilfordii and their chemical catalogues

分類單體組分

生物堿 雷公藤堿wilfordine、雷公藤次堿wilforine、雷公藤吉堿wilforgine、雷公藤新堿euonine、雷公藤堿戊wilforidine、雷公藤春堿wilfortrine、異雷公藤春堿isowilfortrine、雷公藤康堿wilfordconine

三萜雷公藤紅素tripterine（celastrol）、雷公藤內(nèi)酯甲wilforlide A、雷公藤內(nèi)酯乙wilforlide B 、去甲澤拉木醛（T96）demethylzeylasteral

二萜雷公藤甲素triptolide、雷公藤乙素triptodiolide、雷公藤內(nèi)酯酮triptonide、雷醇內(nèi)酯（T9）triptolidenol

倍半萜雷藤素wilfornide

其他 雷公藤對醌B triptoquinone B、雷公藤對醌H triptoquinone H、雷酚內(nèi)酯triptophenolide、薩拉子酸salaspermic acid、雷公藤氯內(nèi)酯醇（T4）tripchlorolide

血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）增殖反應(yīng)的影響。見5.2項(xiàng)抑制PBMC增殖反應(yīng)的比較。

2.4 雷公藤堿戊 虞海燕等[8]采用系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）病人PBMC體外培養(yǎng)觀察雷公藤堿戊對SLE病人PBMC的B細(xì)胞功能的影響及時(shí)效關(guān)系。發(fā)現(xiàn)，雷公藤堿戊10 mg?L-1能抑制SLE患者PBMC自發(fā)性增殖反應(yīng)以及金葡菌Cowan-I株（SAC）刺激后正常人和SLE患者PBMC增殖反應(yīng)。同時(shí)在細(xì)胞培養(yǎng)的72 h前加入雷公藤堿戊對凝集素美洲商陸（PWM）誘導(dǎo)正常人及SLE病人PBMC產(chǎn)生IgG均有明顯的抑制作用。證實(shí)雷公藤堿戊對B細(xì)胞功能的多個(gè)環(huán)節(jié)具有抑制作用，其抑制B細(xì)胞產(chǎn)生IgG的環(huán)節(jié)可能在細(xì)胞的活化和增殖階段，而不是分化分泌階段。

2.5 雷公藤康堿和異雷公藤春堿 朱惠等[9]發(fā)現(xiàn)，雷公藤康堿和異雷公藤春堿（80 mg?kg-1，ip）均能明顯抑制溶血素抗體的形成；能顯著降低外周血T淋巴細(xì)胞百分比；顯著減輕胸腺、脾臟的質(zhì)量；并且能明顯抑制小鼠碳廓清速率，且異雷公藤春堿的效果更為顯著，與環(huán)磷酰胺（30 mg?kg-1，ip）作用相當(dāng)。異雷公藤春堿（80 mg?kg-1，ip）和環(huán)磷酰胺（20 mg?kg-1，ip）對小鼠DNCB所致遲發(fā)型皮膚超敏反應(yīng)均有明顯的抑制作用。用MTT法檢測雷公藤康堿對K562細(xì)胞（紅白血病細(xì)胞）和HL60細(xì)胞（急性髓性白血病細(xì)胞）的殺傷作用，3.00 mg?L-1時(shí)，對K562和HL60細(xì)胞的抑制率分別為87%，90%，與對照組相比P

2.6 雷公藤氯內(nèi)酯醇（T4）[10-15] 李學(xué)旺等[10]研究表明，T4在50，100 μg?kg-1?d-1時(shí)，明顯延長大鼠異位心臟移植的存活時(shí)間，100 μg?kg-1?d-1顯著減低異位移植心臟的排異反應(yīng)，程度與16 mg?kg-1?d-1環(huán)孢霉素A無顯著性差異，可抑制同種異體抗原刺激的移植宿主免疫活性細(xì)胞IL-2產(chǎn)生及IL-2的表達(dá)，阻斷T淋巴細(xì)胞的激活，影響細(xì)胞毒T細(xì)胞（CTL）、自然殺傷細(xì)胞（NK）、巨噬細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞的功能。要慶平等[11]發(fā)現(xiàn)T4在40 μg?L-1時(shí)顯著抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）患者滑膜單細(xì)胞懸液產(chǎn)生PGE2水平（P

Th1/Th2細(xì)胞亞群兩者的平衡間接反映了機(jī)體促炎/抗炎的平衡，急性肺損傷時(shí)，Th2/Th1升高，說明急性肺損傷時(shí)，促炎/抗炎反應(yīng)失衡，抗炎反應(yīng)增強(qiáng)更為明顯。T4對抗炎反應(yīng)的抑制相對較強(qiáng)，有利于調(diào)節(jié)促炎/抗炎反應(yīng)失衡，而地塞米松以抑制促炎反應(yīng)為主，對抗炎反應(yīng)的作用相對較弱，可加重促炎/抗炎反應(yīng)失衡[14]。

王元偉等[15]發(fā)現(xiàn)，T4具有神經(jīng)元保護(hù)作用。對擬阿爾茨海默病（AD）樣Aβ沉積病理變化的大鼠模型，T4高（20 μg?kg-1）、低（5 μg?kg-1）劑量組海馬組織NF-κB表達(dá)減少，TNF-α，IL-1β水平降低，凋亡神經(jīng)元減少，高劑量組作用更明顯（P

程曉馨等[16]發(fā)現(xiàn)T4在較低劑量下（1 μg?kg-1）能夠改善安非他明誘發(fā)的帕金森病（PD）大鼠異常旋轉(zhuǎn)行為，并能抑制腦內(nèi)TNF-α和IL-2的異常升高，對帕金森大鼠多巴胺神經(jīng)元具有肯定的保護(hù)作用。

2.7 雷公藤內(nèi)酯酮（T7） 何為等[17]在考察T7對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌NO和TNF-α的影響中發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，T7在0.4～3.2 mg?L-1，4～24 h對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌的NO和TNF-α具有顯著抑制作用（P

2.8 去甲澤拉木醛（T96） 林宗明等研究T96的免疫抑制作用發(fā)現(xiàn)，T96 10，20 mg?kg-1?d-1分別延長腎移植大鼠生存期至（14.8±1.0），（18.0±1.5） d，與對照組（6.9±0.6） d比較，差異有非常顯著意義（P

2.9 雷公藤甲素 雷公藤甲素抑制淋巴細(xì)胞增殖：雷公藤甲素對T細(xì)胞的抑制作用具有明顯特征，即對已活化的T細(xì)胞的抑制作用最強(qiáng)，而對處于靜止期的T細(xì)胞抑制作用并不明顯，同時(shí)雷公藤甲素可誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)T雜交瘤細(xì)胞生長抑制和凋亡，誘導(dǎo)外周T細(xì)胞的凋亡，對胸腺T細(xì)胞沒有影響[23]。雷公藤甲素對樹突狀細(xì)胞（DC）的影響：雷公藤甲素抑制體內(nèi)由DC誘導(dǎo)的中性白細(xì)胞和T細(xì)胞化學(xué)趨向性；抑制LPS誘導(dǎo)的CC或CXC趨化因子的產(chǎn)生；抑制DC介導(dǎo)的抗原特異性CD4+T細(xì)胞的激活和增殖；抑制NF-κB的激活和Stat3的磷酸化[24]。Liu H等[25]研究雷公藤甲素對NF-κB的影響發(fā)現(xiàn)：將不同濃度（0.2，10 μg?L-1）雷公藤甲素處理普通狀態(tài)和使用佛波脂酸/植物凝集素（PMA/PHA）激活的Jurkat細(xì)胞，以凝膠遷移率實(shí)驗(yàn)（EMSA）檢測細(xì)胞NF-κB活力的改變，并以RT-PCR檢測處理前后IκBa mRNA水平的改變，在普通培養(yǎng)狀態(tài)下的Jurkat細(xì)胞中存有一定活力的NF-κB，使用PMA/PHA處理可以顯著增加Jurkat細(xì)胞中NF-κB的活力。表明雷公藤甲素可以降低2種狀態(tài)下Jurkat細(xì)胞中NF-κB的活力，但以激活狀態(tài)下更顯著，可以上調(diào)Jurkat細(xì)胞中IκBa的轉(zhuǎn)錄水平。

2.10 雷公藤紅素 Kim Y等[26]發(fā)現(xiàn)，在人外周血單核細(xì)胞中，雷公藤紅素能夠抑制LPS誘導(dǎo)的TNF-α，IL-1β，IL-6和IL-8的產(chǎn)生以及在THP-1細(xì)胞中NF-κB的易位；雷公藤紅素（400 μg?kg-1）能抑制小鼠血清溶血素水平，且與劑量呈依賴關(guān)系；雷公藤紅素0.25 mg?L-1可以明顯抑制PHA誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖。李孟秋等[27]發(fā)現(xiàn)，在小鼠巨噬細(xì)胞RAW2647中，雷公藤紅素能夠抑制LPS誘導(dǎo)的TNF-α，IL-6，NO，PGE2的產(chǎn)生和NF-κB的激活。

2.11 雷醇內(nèi)酯（T9） 顧客顯等[28]研究發(fā)現(xiàn)，T9 0.5，1.0，10 mg?kg-1強(qiáng)的松龍相似，能明顯抑制角叉菜膠引起的大鼠關(guān)節(jié)腫脹；且呈劑量依賴性，作用時(shí)間持續(xù)>7 h，T9 0.45，0.9，1.35 mg?kg-1可明顯抑制巴豆油致小鼠耳腫脹；0.5，1.0 mg?kg-1可明顯抑制大鼠佐劑性關(guān)節(jié)腫脹；0.4，0.8 mg?kg-1可減少大鼠急性胸膜炎滲出，抑制白細(xì)胞游走；0.25，0.5 mg?kg-1可明顯抑制大鼠棉球肉芽腫增生；0.8 mg?kg-1可明顯降低血漿中PGE2含量。鄭家潤等[29]用巴豆油誘發(fā)的小鼠耳炎癥模型及小鼠溶血素抗體生成模型測定從雷公藤中分離的7個(gè)環(huán)氧二萜內(nèi)酯化合物的抗炎及免疫抑制活性，抗炎作用的治療指數(shù)由大到小為：雷公藤甲素17、雷醇內(nèi)酯9.6、雷公藤氯內(nèi)酯醇9.0、雷公藤乙素7.3、雷公藤內(nèi)酯酮5.9；免疫抑制作用的治療指數(shù)由大到小為：雷醇內(nèi)酯30.7、雷公藤氯內(nèi)酯醇16.7、雷公藤甲素13.7、雷公藤乙素8.8、雷公藤內(nèi)酯酮7.5。

3 雷公藤單體成分的毒理學(xué)研究

雷公藤在發(fā)揮良好免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用的同時(shí)，其毒副作用和不良反應(yīng)也日益受到關(guān)注，對消化、泌尿、生殖、心血管、骨髓及血液等系統(tǒng)有較明確的損害[30]。急性毒性實(shí)驗(yàn)顯示，雷公藤甲素小鼠腹腔給藥LD50為0.725 mg?kg-1，經(jīng)口給藥LD50為0.788 mg?kg-1，急性毒性主要以急性肝損傷為主[31]。去甲澤拉木醛急毒實(shí)驗(yàn)的半數(shù)致死量LD50為>30 mg?kg-1[22]。雷公藤甲素灌胃SD大鼠，200 μg?kg-1?d-1，28 d，SD雌性大鼠出現(xiàn)卵巢萎縮[32]。灌胃給予大鼠40 μg?kg-1雷公藤甲素連續(xù)7周，可引起大鼠腎臟毒性[33]。大鼠連續(xù)灌服雷公藤甲素（劑量20 μg?kg-1）7周，出現(xiàn)心臟毒性[34]。雷公藤紅素2，3，4 μmol?L-1可導(dǎo)致斑馬魚胚胎心臟中毒，引起心率下降的EC50（24 h）約1.78 μmol?L-1[35]。

單個(gè)核細(xì)胞與藥物體外孵育48 h后做毒性試驗(yàn)表明，雷公藤堿乙、雷公藤吉堿、雷公藤春堿、雷公藤堿戊、雷公藤甲素、雷公藤內(nèi)酯酮、雷公藤紅素在其最適抑制濃度下對細(xì)胞均無直接的毒性作用，在2倍于最適濃度時(shí)二萜類和三萜類呈現(xiàn)了直接的細(xì)胞毒性。它們的毒性由大至小依次為雷公藤甲素、雷公藤內(nèi)酯酮、雷公藤紅素。雷公藤堿戊在10倍最適抑制濃度下無直接細(xì)胞毒性，對照組細(xì)胞存活率91%，雷公藤堿戊組89%[7]。

4 雷公藤單體成分藥代動(dòng)力學(xué)研究

目前除雷公藤甲素外，尚無其他單體成分在人體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的研究報(bào)道，現(xiàn)有文獻(xiàn)僅報(bào)道了雷公藤紅素、雷公藤內(nèi)酯酮和去甲澤拉木醛動(dòng)物體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)。亦有文獻(xiàn)報(bào)道了雷公藤甲素、雷公藤紅素、雷公藤內(nèi)酯酮、雷公藤內(nèi)酯甲及4種雷公藤生物堿（雷公藤堿、春堿、吉堿、次堿）在人體中的散點(diǎn)血藥濃度。

4.1 雷公藤甲素的藥代動(dòng)力學(xué) 余煒[36]研究大鼠靜脈注射雷公藤甲素后的藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布規(guī)律。結(jié)果表明雷公藤甲素在大鼠體內(nèi)的處置為一級消除二室模型。Shao Feng等[37]對SD雄鼠中雷公藤甲素的藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了研究，單次靜脈給藥，藥代動(dòng)力學(xué)呈一室模型，給藥后10 min達(dá)到Cmax，T1/2為15～21 min。單次口服0.6 mg?kg-1，生物利用度為72.08%，單次口服0.6～2.4 mg?kg-1，藥代動(dòng)力學(xué)呈非線性動(dòng)力學(xué)特征，膽汁中藥物濃度不到1%，腎和肝雙通路排泄。雷公藤甲素在鼠體內(nèi)吸收、分布、消除迅速，尿、便、膽汁中少有原型藥物，推測大部分藥物依賴代謝消除。口服給藥10～24 h后鼠出現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)，然而服藥后4 h已經(jīng)檢測不到雷公藤甲素。

邵鳳等[38]測定雷公藤甲素在Beagle犬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)，Beagle犬分別靜脈注射雷公藤甲素0.05 mg?kg-1，灌胃雷公藤甲素0.05，0.08，0.1 mg?kg-1進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)和絕對生物利用度研究。結(jié)果表明，雷公藤甲素在Beagle體內(nèi)的代謝過程屬于二室模型，靜脈給藥消除半衰期T1/2β為（2.5±0.8） h，3個(gè)劑量灌胃給藥后的平均T1/2β分別為（2.5±0.7），（2.6±0.1），（2.4±1.2） h，Tmax為0.5 h。灌胃給藥的平均絕對生物利用度為（75±17）%。張軍等[39]研究Beagle犬單劑量口服雷公藤片后雷公藤甲素的藥代動(dòng)力學(xué)，雷公藤甲素的體內(nèi)處置屬一室模型，消除半衰期為（2.59±0.60） h，與邵鳳等的報(bào)道一致，AUC和Cmax比口服雷公藤甲素純品低。李穎等[40]測定3個(gè)RA患者雷公藤甲素血清濃度并研究其藥動(dòng)學(xué)，長期口服雷公藤多苷片，20 mg，tid，雷公藤甲素在RA患者體內(nèi)的處置為二室模型，Cmax=（159.97±42.43） μg?L-1，Tmax=（1.33±0.58） h，T1/2α=（6.573±3.05） h，T1/2β=（7.51±2.26） h。

4.2 雷公藤紅素的藥代動(dòng)力學(xué) Zhang Jun等[41]建立了LC-MS/MS研究大鼠體內(nèi)雷公藤紅素的藥代動(dòng)力學(xué)特性，包括雷公藤紅素的口服生物利用度，雷公藤紅素原料藥和雷公藤片（含雷公藤紅素356 μg/片）中雷公藤紅素藥代動(dòng)力學(xué)的比較，雷公藤紅素藥代動(dòng)力學(xué)的性別差異。經(jīng)過劑量校正后，雌鼠中雷公藤紅素原料藥的口服絕對生物利用度為17.06%，雷公藤片的口服絕對生物利用度為94.19%；在不同性別中Cmax，AUC（0-tn），AUC（0-N），CL/F有很大差別，雌鼠的Cmax，AUC為雄鼠的2倍多，說明雷公藤紅素在雌鼠中有更好的吸收。雌鼠口服1 000 μg?kg-1雷公藤紅素原料藥后，Tmax為（3.00±0.89） h，T1/2β為（10.20±2.17） h，口服1.5片/kg雷公藤片（含雷公藤紅素356 μg/片）后，雌鼠和雄鼠Tmax分別為（6.71±4.57），（5.14±3.58） h，T1/2β分別為（10.02±3.36），（8.38±1.98） h。

4.3 雷公藤內(nèi)酯酮的藥代動(dòng)力學(xué) 崗艷云等[42]研究了靜脈給藥雷公藤內(nèi)酯酮原料藥后，雷公藤內(nèi)酯酮在大鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)模型為二室開放模型，T1/2α=（0.167～0.195） h，T1/2β=（4.95～6.49） h，AUC與劑量成正比，清除率與劑量無關(guān)，非房室模型統(tǒng)計(jì)矩計(jì)算的結(jié)果表明MRT為3.26～5.14 h，大鼠靜脈給藥后，分布廣泛，肝肺濃度最高，經(jīng)尿和膽汁排泄的藥物較少，血漿蛋白結(jié)合率約為75%。

4.4 去甲澤拉木醛（T96） 徐文平等[22]研究成年、健康比格犬單劑量口服T96原料藥20，40，80 mg?kg-1和單劑量靜注T96原料藥5 mg?kg-1進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)和絕對生物利用度研究。3個(gè)口服劑量的Tmax分別為（8.7±1.0），（11.0±1.1），（10.7±1.0） h；T1/2分別為（10.75±1.41），（11.70±1.21），（11.20±1.43） h，靜脈給藥后T1/2為（9.85±0.76） h。口服T96原料藥40 mg?kg-1相對于靜注原料藥5 mg?kg-1的絕對生物利用度為（4.20±1.9）%。

5 雷公藤單體成分作用強(qiáng)度比較

5.1 抑制溶血素生成和降低碳廓清指數(shù)的比較 在抑制小鼠血清溶血素水平、降低碳廓清指數(shù)方面，雷公藤春堿、新堿、康堿、異春堿劑量為80 mg?kg-1，雷公藤紅素劑量為400 μg?kg-1，雷公藤甲素劑量為60 μg?kg-1。

5.2 抑制PBMC增殖反應(yīng)的比較 在10 mg?L-1時(shí)，雷公藤堿戊、雷公藤吉堿、雷公藤春堿對PBMC增殖反應(yīng)抑制率分別為89.3%，22.95%，23.58%，在1 mg?L-1時(shí)，雷公藤紅素的抑制率為96.44%，而在0.01 mg?L-1時(shí)，雷公藤內(nèi)酯酮、雷公藤甲素分別為84.67%，97.06%。10～30 μg?L-1雷公藤氯內(nèi)酯醇顯著抑制RA患者PBMC增殖反應(yīng)。

5.3 抵抗移植排斥反應(yīng)比較 去甲澤拉木醛10，20 mg?kg-1?d-1可顯著延長腎移植大鼠和腎移植犬生存率，雷公藤氯內(nèi)酯醇50，100 μg?kg-1?d-1時(shí)明顯延長大鼠異位心臟移植的存活時(shí)間，雷公藤甲素150 μg?kg-1?d-1分別延長同基因和異基因胰島移植存活時(shí)間達(dá)（32.6±18.4），（11.2±1.9） d，對照組分別為（8.8±5.1），（6.2±1.8） d，與對照組比較，具有非常顯著的意義（P

6 雷公藤的雙向免疫調(diào)節(jié)作用

金龍膠囊、玉屏風(fēng)散、黃芪等部分中藥具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用，既可使機(jī)體從亢進(jìn)狀態(tài)向正常轉(zhuǎn)化，也可使機(jī)體從功能低下狀態(tài)向正常轉(zhuǎn)化，因機(jī)體所處病理狀態(tài)不同而產(chǎn)生截然相反的藥理作用，最終使機(jī)體達(dá)到平衡[44]。雷公藤氯內(nèi)酯醇在不同濃度時(shí)對RA患者PBMC增殖及B細(xì)胞的增殖具有雙向調(diào)節(jié)作用。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)雷公藤氯內(nèi)酯醇對小鼠脾細(xì)胞NK細(xì)胞活性呈劑量依賴性雙向調(diào)節(jié)作用，即低劑量（體外0.01 mg?L-1，體內(nèi)60 μg?kg-1）短時(shí)間內(nèi)增強(qiáng)NK細(xì)胞毒百分比，較高劑量（體外0.1～10 mg?L-1，體內(nèi)>60 μg?kg-1）則有抑制作用，劑量越大，抑制作用越明顯[45]。急性肺炎時(shí)，雷公藤氯內(nèi)酯醇可以調(diào)節(jié)抗炎/促炎達(dá)到平衡[14]。

7 小結(jié)

綜上，在免疫抑制活性方面，雷醇內(nèi)酯、雷公藤氯內(nèi)酯醇、雷公藤甲素、雷公藤內(nèi)酯酮、雷公藤紅素、去甲澤拉木醛作用較強(qiáng)；雷公藤堿戊、雷公藤春堿、雷公藤新堿、雷公藤吉堿、雷公藤康堿及異雷公藤春堿作用較弱。在毒性方面，雷醇內(nèi)酯、雷公藤堿戊、去甲澤拉木醛的毒性較小；雷公藤紅素、雷公藤內(nèi)酯酮、雷公藤甲素毒性較大。

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Advance in studies on anti-inflammatory and immunoregulatory

monomers of Tripterygium wilfordii

LI Chun-xing1， LI Tai-sheng2， ZHU Zhu1*， XIE Jing2， LV Wei2

（1. Department of Pharmacy， Peking Union Medical College Hospital， Chinese Academy of Medical Science & Peking Union

Medical College， Beijing 100730， China；

2. Department of Infectious Diseases， Peking Union Medical College Hospital， Chinese Academy of

Medical Science & Peking Union Medical College， Beijing 100730， China；

[Abstract] Tripterygium wilfordii has complex chemical components. To study and summarize the advance in studies on the anti-inflammatory and immunoregulatory activities and toxicology of known monomers of T. wilfordii， the pertinent literatures related to the studies on the pharmacology， toxicology and pharmacokinetics of T. wilfordii over past 30 years were searched. According to the findings， more than ten anti-inflammatory and immunoregulatory monomers were found in T. wilfordii. The pharmacology and toxicology of wilforidine， triptolidenol， triptonide， demethylzeylasteral shall be further studied.

篇6

[關(guān)鍵詞]抗菌肽；免疫調(diào)節(jié)；細(xì)菌感染

中圖分類號：R967 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號：1009-914X（2016）14-0286-01

引言

人類從出生到死亡一直在與多種微生物進(jìn)行著抗?fàn)帲▽θ祟悷o致病性的共生微生物和病原微生物，病原微生物通常以宿主的免疫系統(tǒng)為目標(biāo)進(jìn)行攻擊，阻止其行使正常功能，然后引起機(jī)體感染。機(jī)體免疫力生理功能各方面的進(jìn)化常常隨著與這些微生物的抗?fàn)幵诓粩嘧兓Ｑ芯空甙l(fā)現(xiàn)，根據(jù)需要適當(dāng)調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫反應(yīng)是一種有效的治療方法，比如可以阻止病原菌的感染、抑制自身免疫和炎癥反應(yīng)以及引起自發(fā)引起癌癥患者的抗癌免疫反應(yīng)。目前可用的免疫調(diào)節(jié)治療方式主要是用于抗感染，研究者們主要利用天然的免疫調(diào)節(jié)劑來糾正后天性或者先天性的免疫缺陷，而且他們也會(huì)使用輔助的治療來延長抗生素或者抗病毒制劑的效用時(shí)間，比如干擾素或者接種的疫苗；最主要的是免疫佐劑，例如治療佐劑和疫苗佐劑，可以定向增強(qiáng)人類機(jī)體的免疫效用。

免疫調(diào)節(jié)的治療方式提供給我們一定的便利，我們可以通過以機(jī)體為靶點(diǎn)而非致病菌，免疫調(diào)節(jié)可以在最大程度上避免因?yàn)榧?xì)菌耐藥性進(jìn)化從而產(chǎn)生的選擇性壓力。長時(shí)間來，通過疫苗來激活適應(yīng)性免疫依然會(huì)出現(xiàn)反彈的現(xiàn)象，此外，非特異性的天然先天免疫防御給我們了一些指示，就是這些免疫調(diào)節(jié)必須承擔(dān)得起針對許多致病菌的大范圍的保護(hù)能力，尤其是在高風(fēng)險(xiǎn)人群中的預(yù)防作用以及早期感染性疾病的識(shí)別和治療。然而不合適的先天免疫的激活會(huì)導(dǎo)致機(jī)體的前炎性反應(yīng)和組織損傷，因此成功的免疫調(diào)節(jié)治療需要控制好保護(hù)性免疫系統(tǒng)的刺激而不是增加機(jī)體的前炎性免疫反應(yīng)。

抗菌肽是先天免疫的保守組分，有廣泛的抗感染因子活性，不但是抗菌分子（甚至抗對常規(guī)抗生素耐藥菌株），而且對真菌、包膜病毒（如HIV、流感）、寄生性原蟲及癌細(xì)胞等具有直接的殺傷活性。抗菌肽可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的功能，例如趨化作用，基因轉(zhuǎn)錄，和細(xì)胞因子產(chǎn)生，和/或釋放。另外，這些肽可能參與傷口愈合和血管生成過程。值得注意的是，與常規(guī)抗生素相比細(xì)菌對抗菌肽產(chǎn)生耐藥性的機(jī)率更低，有希望進(jìn)一步研究開發(fā)作為新的治療藥物。

1.細(xì)菌的細(xì)胞壁外膜成分激活先天免疫系統(tǒng)

宿主的免疫系統(tǒng)進(jìn)化出識(shí)別保守的細(xì)菌的分子模式，其中細(xì)菌的細(xì)胞壁外膜成分（在革蘭氏陰性菌中的脂多糖（LPS）和在革蘭氏陽性菌中的脂磷壁酸（LTA））作為細(xì)菌感染的信號，由于細(xì)胞分裂或死亡，特別是對細(xì)菌感染的抗生素治療，導(dǎo)致它們從細(xì)菌中被釋放，這些成分作為病原相關(guān)模式分子（pathogen associated molecule patterns ，PAMPs）被模式識(shí)別受體（PRRs）識(shí)別，toll樣受體（TLR）就是其中之一。這些受體表達(dá)于先天免疫細(xì)胞，主要由單核吞噬細(xì)胞（例如單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞）誘導(dǎo)它們的活化，其特征是增加細(xì)胞的吞噬活性，分泌促炎細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、干擾素β及誘導(dǎo)其他促炎蛋白合成，如誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）。

通過PAMPs激活免疫系統(tǒng)是有利的，并且有助于生物體召集所有的資源在正確的時(shí)間和地點(diǎn)以對抗入侵的病原體。然而，在一些情況下長期和不受控制的激活使免疫系統(tǒng)全身性和長期應(yīng)對。這種全身反應(yīng)的特點(diǎn)是血液中高促炎性細(xì)胞因子濃度，特別是TNF-α。TNF-α是導(dǎo)致內(nèi)毒素性休克病理效應(yīng)的主要介質(zhì)。表明亟需要一種新的藥劑可以中和LPS并消除其根源。

2.抗菌肽的體外抗菌機(jī)制

抗菌肽不僅是抗菌分子（甚至抗對常規(guī)抗生素耐藥菌株），而且對真菌、包膜病毒（如HIV、流感）、寄生性原蟲及癌細(xì)胞等具有直接的殺傷活性。抗菌肽可作用于脂雙層作通過不同的機(jī)制使細(xì)胞死亡：（1）改變膜電勢；（2）形成跨膜孔；（3）修改膜脂電流分布伴隨膜結(jié)構(gòu)的去穩(wěn)定性；（4）觸發(fā)致死程序，如誘導(dǎo)自溶酶；（5）透膜后作用于細(xì)胞內(nèi)重要的靶點(diǎn)。

3.抗菌肽作為免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)劑

抗菌肽作為先天免疫系統(tǒng)的一部分，可調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的每一步。它們能夠與適應(yīng)性免疫建立連接，引導(dǎo)宿主對抗入侵的保護(hù)性反應(yīng)。一些抗菌肽已經(jīng)被證實(shí)了與宿主的免疫相關(guān)的一系列促炎功能，例如LL-37和一些防御素被報(bào)道具有免疫調(diào)節(jié)活性，是局部炎癥的發(fā)展的組成部分。抗菌肽能夠促進(jìn)傷口愈合和血管形成，在那里他們作為普通的的生長因子促進(jìn)上皮細(xì)胞增殖，通過刺激巨噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞表達(dá)趨化因子和細(xì)胞因子（例如白細(xì)胞介素-8和巨噬細(xì)胞趨化因子-1）。抗菌肽和其他肽很可能經(jīng)由甲酰肽受體1促進(jìn)免疫細(xì)胞（例如肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和T細(xì)胞淋巴細(xì)胞）趨化活性。

相對于這些活性，抗菌肽具有減少促炎反應(yīng)的能力，通過與細(xì)菌膜和細(xì)胞壁成分與病原體相關(guān)模式分子直接相互作用，使它們不可用模式識(shí)別受體，因此防止吞噬細(xì)胞的活化和促炎細(xì)胞因子的分泌。由此可見，抗菌肽是通過多方面機(jī)制、多個(gè)點(diǎn)干預(yù)保護(hù)宿主抵御微生物病原體。

抗菌肽除了在細(xì)胞因子調(diào)節(jié)、趨化活性和炎癥調(diào)節(jié)方面發(fā)揮作用外，它們通過與先天免疫橋接能調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫反應(yīng)或與適應(yīng)性免疫細(xì)胞直接相互作用。例如，LL-37不僅召集肥大細(xì)胞而且上調(diào)TLR-4表達(dá)，這種抗菌肽的表達(dá)是通過感染信號引起，這提高了肥大細(xì)胞識(shí)別入侵的細(xì)菌的能力。此外，以LL-37和LPS共刺激肥大細(xì)胞下調(diào)Th2細(xì)胞因子分化亞群的表達(dá)。

4.傷口修復(fù)和血管再生

抗菌肽除它們的直接抗菌活性和作為免疫調(diào)節(jié)劑功能之外，還能通過促進(jìn)傷口愈合幫助緩解損傷或感染。LL-37在表皮細(xì)胞再生和血管再生過程中具有重要的作用，直接作用于上皮細(xì)胞并在這些細(xì)胞中促進(jìn)增殖和和血管樣結(jié)構(gòu)形成。這種肽通過反式激活表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）誘導(dǎo)角化細(xì)胞發(fā)生顯著的遷移。在小鼠體內(nèi)經(jīng)由血管局部應(yīng)用LL-37的合成重組肽的P-LL-37可促進(jìn)由地塞米松誘導(dǎo)的損傷恢復(fù)。LL-37 和HNP 1-3也有助于呼吸道上皮的愈合與表皮生長因子相互作用并激活細(xì)胞外絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號通路。HNP-1通過培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞增加膠原蛋白I型的表達(dá)并下調(diào)間質(zhì)膠原酶的合成。

從無脊椎動(dòng)物中分離的大多數(shù)肽是非常有效的病原菌殺滅分子，在這些生物體內(nèi)缺少適應(yīng)性免疫反應(yīng)表明抗菌肽是無脊椎動(dòng)物防御反應(yīng)的必要成分。這些特性對尋找新的化合物或領(lǐng)域相當(dāng)具有吸引力，可用作研發(fā)治療藥物。另一方面，已經(jīng)作出一些嘗試以評估這些肽可能在哺乳動(dòng)物中的免疫調(diào)節(jié)活性。

5.細(xì)菌對抗菌肽的耐藥性

迄今為止，我們已經(jīng)討論了的抗菌肽的非常多樣化功能特性，但仍然未能涵蓋它們的殺菌機(jī)制和細(xì)菌對這些分子的耐藥機(jī)制，而這是抗菌肽潛在應(yīng)用作為藥物用于治療不可缺少的方面。值得注意的， 即使當(dāng)一些傳染性病原體進(jìn)化某些工具以抵抗這些分子的作用，然而在自然界所有生命中抗菌肽庫具有廣泛保守性，而且仍然有效。Steinberg等人證明，相對于傳統(tǒng)抗生素如諾氟沙星和慶大霉素致病菌對豬Protegrin PG-1更難產(chǎn)生耐藥性。因此，抗菌肽與常規(guī)抗生素相比產(chǎn)生耐藥性的機(jī)率更低。

結(jié)論

自20世紀(jì)80年代以來，對抗菌肽的認(rèn)識(shí)增加并持續(xù)增長，因此，關(guān)于這些分子的潛在前景也已發(fā)生改變。前期，它們主要被考慮作為天然抗生素，它們的潛在用途僅限于感染性疾病的治療。此外，傳統(tǒng)觀念抗菌肽作為細(xì)胞的功能不穩(wěn)定性分子或作為成孔肽無特異性膜靶點(diǎn)。現(xiàn)在，抗菌肽不僅是廣譜天然抗生素具有廣譜作用機(jī)制，而且具有超出直接抗菌活性的廣譜生理功能。這些引導(dǎo)我們到一個(gè)新的廣闊的應(yīng)用領(lǐng)域從治療細(xì)菌感染和非感染性疾病和病癥，到它們作為疫苗研發(fā)佐劑的適用性。另外，現(xiàn)在考慮通過生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)基于生物膜滲透能力設(shè)計(jì)新型細(xì)胞內(nèi)的藥物。

盡管多肽具有作為新型治療藥物的諸多優(yōu)點(diǎn)，但是作為多肽藥物制劑研究上仍然面臨許多問題與挑戰(zhàn)。這些問題的焦點(diǎn)主要圍繞在解決多肽藥的穩(wěn)定性、毒性以及如何提高療效和降低生產(chǎn)成本提高產(chǎn)量等方面。相信隨著人們對抗菌肽作用機(jī)制研究的逐漸深入，以及新興科技與設(shè)備的不斷引入，諸多問題終將迎刃而解，而抗菌肽最終會(huì)對人類的健康事業(yè)產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。

參考文獻(xiàn)

篇7

【摘要】 目的： 觀察穴位埋線聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑(轉(zhuǎn)移因子膠囊)治療銀屑病的臨床療效，探討其可能作用機(jī)制。方法： 將160例進(jìn)行期尋常型銀屑病患者隨機(jī)分為兩組：治療組80例，采用穴位埋線聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑治療;對照組80例，采用單純免疫調(diào)節(jié)劑治療。檢測各組患者治療前后血清腫瘤壞死因子α(TNFα)和白介素-8(IL8)水平。結(jié)果： 治療組有效率為81.25%，對照組有效率為57.50%，兩組療效差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

【關(guān)鍵詞】 穴位埋線; 免疫調(diào)節(jié)劑; 進(jìn)行期尋常型銀屑病; 腫瘤壞死因子α;白介素8

[Abstract] Objective: To observe the therapeutic effect and mechanism of catgutembedding and oral taken transfer factor capsules combined therapy on psoriasis. Methods: One hundred and sixty cases of patients with acute psoriasis vulgaris were chosen and pided into treatment group (80 cases)and control group(80 cases) randomly. Treatment group was treated by the method of catgutembedding at acupuncture point and oral taken transfer factor capsules. Control group was only treated with oral taken transfer factor capsules. The serum levels of TNFα and IL8 were also detected before and after the treatment. Results: The total effective rates of treatment group and control group were 81.25% and 57.50% respectively. Compared with each other， the difference was significant(P

[Key words] catgutembedding; transfer factor capsules; acute psoriasis vulgaris; TNFα; IL8

銀屑病是一種常見的遺傳與環(huán)境等多因素相互作用的慢性炎癥性皮膚病，病程較長，治療困難，易復(fù)發(fā)，給患者生理及心理造成較大傷害。近年來，我科采用穴位埋線聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑(轉(zhuǎn)移因子膠囊)治療進(jìn)行期尋常型銀屑病，取得了較好的療效。為進(jìn)一步探討該治療的可能作用機(jī)制，我們同時(shí)檢測了患者治療前后血清腫瘤壞死因子α(TNFα)和白介素8(IL8)水平，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 對象與方法

1.1 病 例

選取我科2006年8月至2008年7月符合進(jìn)行期尋常型銀屑病診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]的銀屑病患者160例，其中男94例，女66例，平均年齡36歲(12～68歲);平均病程8年(1個(gè)月～30年)。按就診順序，將患者隨機(jī)分為治療組和對照組，每組各80例，其中治療組點(diǎn)滴型患者36例，斑塊型患者44例;對照組點(diǎn)滴型患者43例，斑塊型患者37例。兩組患者在性別、年齡、平均病程、銀屑病嚴(yán)重程度指數(shù)(PASI[2])間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。排除標(biāo)準(zhǔn)：2周內(nèi)曾接受局部藥物(如糖皮質(zhì)激素、維A酸類或維生素D3衍生物)治療者;4周內(nèi)曾使用光化學(xué)療法或接受紫外線治療者;12周內(nèi)曾系統(tǒng)使用糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑或維A酸類藥物者;患嚴(yán)重心、肝、腎等內(nèi)臟疾病及免疫功能缺陷者;同時(shí)使用其他可能影響疾病病程的藥物;有可能妊娠或妊娠、哺乳期婦女;無法隨訪者。

1.2 治療方法

1.2.1 治療組 采用穴位埋線聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑治療。埋線方法：① 取穴：患者取俯臥位，選擇脊椎旁開3指，自第7頸椎至第2骶椎分為5等份，兩側(cè)共10個(gè)埋線點(diǎn)，相當(dāng)于大杼、心俞、膽俞、腎俞、膀胱俞等穴位，以2%甲紫液標(biāo)記。② 操作：埋線點(diǎn)常規(guī)皮膚消毒后，戴一次性無菌手套。用無菌12號上頜竇穿刺針，將針芯尖端磨平，把醫(yī)用羊腸線(0號)剪成1.5～2 cm塞入套管針的前端，以不露出為度;左手拇、食指繃緊或捏起進(jìn)針部位皮膚，將針朝穴位處呈30度角斜刺入皮膚達(dá)肌層(約2 cm)，邊退針邊推進(jìn)針芯，用針芯將羊腸線推至穴內(nèi)。拔針后，不能有線頭外漏，消毒針眼處敷以創(chuàng)可貼。另取足三里穴、曲池穴，常規(guī)消毒后作直刺埋線。每隔30天埋線1次，4次為一療程。注意事項(xiàng)：① 嚴(yán)格無菌操作，勿將線頭露在皮外以防止感染;② 嚴(yán)格掌握埋線深度，切不可傷及內(nèi)臟、大血管、神經(jīng)干或造成氣胸;③ 5天內(nèi)禁止洗澡，忌酒、辛辣刺激性食物1周;④ 避免重體力勞動(dòng)及劇烈運(yùn)動(dòng)，以免線頭露出皮面。個(gè)別患者埋線后感覺疲乏、周身不適、局部疼痛，屬正常現(xiàn)象，無需治療，3 d至1周后會(huì)自行緩解。

治療期間同時(shí)口服轉(zhuǎn)移因子膠囊(成都利爾藥業(yè)有限公司，每粒3 mg)，6 mg/次，2次/d，連續(xù)用藥120天后判定療效。

1.2.2 對照組 單純口服轉(zhuǎn)移因子膠囊，6 mg/次，2次/d，連續(xù)用藥120 d后判定療效。

1.2.3 血清TNFα及IL8水平測定 每例患者治療前后各抽取空腹靜脈血3～5 ml，取其血清置-80℃冰箱中保存待測。血清TNFα及IL8檢測試劑盒均購自上海晶美生物技術(shù)有限公司。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行。

1.3 療效判定標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)皮損面積、嚴(yán)重程度分別對兩組患者治療前后進(jìn)行PASI評分，以評價(jià)療效。療效指數(shù)=(治療前總積分-治療后總積分)/治療前總積分×100%。根據(jù)療效指數(shù)判斷治療效果：治愈為療效指數(shù)≥90%;顯效為療效指數(shù)60%～89%;好轉(zhuǎn)為療效指數(shù)25%～59%;無效為療效指數(shù)

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)。取α=0.05，P

2 結(jié) 果

2.1 治療前后PASI評分的比較

治療前治療組PASI評分為23.38±6.23，對照組PASI評分為22.85±6.58;治療后治療組PASI評分為4.32±2.67，對照組PASI評分為7.64±2.43。兩組患者治療前PASI評分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組治療后PASI評分下降均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均

2.2 兩組療效比較

治療組和對照組有效率分別為81.25%和57.50%，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.620，P

2.3 兩組治療前后血清TNFα、IL8水平

兩組治療前血清TNFα、IL8水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.1)。兩組治療后血清TNFα、IL8檢測值與自身治療前相比明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

3 討 論

銀屑病是一種以炎性細(xì)胞浸潤、角質(zhì)形成細(xì)胞過度增生為病理特征的皮膚科常見病。迄今為止，其病因及發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚。目前認(rèn)為免疫異常是銀屑病的重要發(fā)病機(jī)制之一。

穴位埋線聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑治療進(jìn)行期尋常型銀屑病，其可能作用機(jī)制可歸為以下幾點(diǎn)：① 羊腸線是一種異種蛋白，埋入穴位可使人體產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)，使淋巴細(xì)胞致敏，并配合體液中的抗體、巨噬細(xì)胞等，反過來破壞分解、液化羊腸線，使變成多肽、氨基酸等，最后被吞噬吸收，同時(shí)產(chǎn)生多種淋巴因子。這些抗原刺激物可引起局部組織輕微的無菌性炎癥反應(yīng)，有利于調(diào)節(jié)體內(nèi)各臟器的功能。② 羊腸線埋入機(jī)體后，15～20 d才能被完全液化、吸收，在組織內(nèi)存留時(shí)間較長，能起到持續(xù)刺激和發(fā)揮治療的作用，這種異體蛋白的刺激，類似組織療法，能增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。③ 羊腸線埋入穴位后，能促進(jìn)病灶局部血管增生，血流量增大，從而加快局部炎癥吸收，提高機(jī)體應(yīng)激能力。④ 埋線穴位均在神經(jīng)節(jié)段處和神經(jīng)分布較多處，能有效地將埋線后產(chǎn)生的刺激信息和能量通過經(jīng)絡(luò)傳入體內(nèi)。⑤ 免疫調(diào)節(jié)劑(轉(zhuǎn)移因子膠囊)的主要成分是從健康豬或牛脾臟中提取的多肽、氨基酸和多核苷酸等。其主要藥理作用是增加輔T細(xì)胞數(shù)，促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖分化，從而發(fā)揮其抗免疫抑制、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用。⑥ 穴位埋線和免疫調(diào)節(jié)劑聯(lián)用，可產(chǎn)生協(xié)同作用，加強(qiáng)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能。

國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)[3-6]，銀屑病患者血清TNFα和IL8水平顯著高于正常人。TNFα能增強(qiáng)中性粒細(xì)胞的趨化性，協(xié)助炎癥細(xì)胞穿透血管壁，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞的浸潤與活化[7];IL8亦具有趨化中性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞，促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞增生和新生血管形成等功能。兩者在銀屑病病理形成過程中發(fā)揮了重要作用。為了研究穴位埋線、免疫調(diào)節(jié)劑聯(lián)合治療對銀屑病患者細(xì)胞免疫功能的影響，我們對所有患者治療前后的血清TNFα、IL8水平進(jìn)行定量檢測。本研究結(jié)果顯示兩組患者血清TNFα、IL8水平較治療前均下降(P

本研究表明穴位埋線、免疫調(diào)節(jié)劑聯(lián)合治療進(jìn)行期尋常型銀屑病，其臨床有效率、治愈病例復(fù)發(fā)率均優(yōu)于單純應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑(P

目前，治療銀屑病的方法種類繁多，全身系統(tǒng)用藥如服用維甲酸類藥物或免疫抑制劑等，雖起效較快，療效確切，但對機(jī)體內(nèi)臟系統(tǒng)的毒副作用亦較大，且停藥后病情易反復(fù)。因此，在無法解決銀屑病復(fù)發(fā)的前提下，我們建議盡量采用毒副作用少，臨床緩解期長的治療方案。我們認(rèn)為穴位埋線聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑治療進(jìn)行期尋常型銀屑病是一種安全有效的治療方法，此法毒副作用甚微，方法簡便易操作，患者易于接受，療效較滿意，且能有效降低銀屑病的復(fù)發(fā)率，臨床緩解期長，值得臨床應(yīng)用、推廣。

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篇8

一、全身性炎癥反應(yīng)綜合征

全身性炎癥反應(yīng)綜合征（Systemic Inflammatory Response Syndrome，SIRS）這一個(gè)新的臨床概念是近年來的研究熱點(diǎn)。其基本病理變化是機(jī)體內(nèi)促炎—抗炎自穩(wěn)失衡所致的、伴有免疫防御功能下降的、持續(xù)不受控制的炎癥反應(yīng)[1]。

（一） SIRS的定義

SIRS指的是由感染、燒傷、創(chuàng)傷、手術(shù)、胰腺炎以及缺血一再灌注等多種因素引起的一種全身性炎癥反應(yīng)，并具有以下兩項(xiàng)或兩項(xiàng)以上的體癥：①體溫＞38℃或＜36℃；②心率＞90次/分；③呼吸＞20次/分或PaCO2＜4.3kPa；④白細(xì)胞數(shù)＞12.0×10.9／L或＜4.0×10.9/L或幼稚細(xì)胞＞10%[2]。它不一定均由致病菌引起，許多非感染因素也可以引起SIRS。其中伴有微生物存在或侵入正常活體組織而引起炎癥者能稱為感染，SIRS伴有嚴(yán)重感染時(shí)稱之為膿毒癥[3]。

（二） 關(guān)于SIRS發(fā)生機(jī)制及假說

經(jīng)過多年的研究，人們已知內(nèi)毒素是全身性炎癥反應(yīng)（SIR）的觸發(fā)劑，其后有多種細(xì)胞因子參與SIR的最初啟動(dòng)，其中TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8為最有影響的介質(zhì)，有作者將這些介質(zhì)稱之為前炎癥介質(zhì)（Pre-inflammatory factor），而TNF-α、IL-1既為原發(fā)性前炎癥介質(zhì)，又是激發(fā)繼發(fā)性炎癥介質(zhì)的趨化因子[4]。炎癥啟動(dòng)后激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生眾多的繼發(fā)性炎癥介質(zhì)，加重SIR的瀑布效應(yīng)，這種持續(xù)高水平的細(xì)胞因子可進(jìn)一步發(fā)展為MODS[5]。同時(shí)，體內(nèi)存在一種與之對抗的抗炎機(jī)制，稱之為代償性抗炎反應(yīng)綜合征（Compens atory Anti-inflammatory Response Symdrome，CARS）。參與抗炎反應(yīng)的重要介質(zhì)包括IL-4 、IL-10、IL-13，轉(zhuǎn)化生長因子β-（TGF-β）、集落刺激因子（CSF）、可溶性TNF受體（sTNFR） 、IL-1受體拮抗物（IL-1RA）等。如果抗炎細(xì)胞因子產(chǎn)生過多，往往會(huì)造成免疫功能受抑，促使感染和其它并發(fā)癥增加。Schwartz根據(jù)嚴(yán)重創(chuàng)傷后過度炎癥反應(yīng)與免疫調(diào)節(jié)的關(guān)系分為三種情況：一種是病人經(jīng)過一段時(shí)期的全身性炎癥反應(yīng)后，其免疫調(diào)節(jié)過程逐漸恢復(fù)；另一種是病人在嚴(yán)重創(chuàng)傷早期即刻出現(xiàn)SIRS，后又急劇轉(zhuǎn)為多臟器功能衰竭階段（MOF），甚至死亡；第三種情況是創(chuàng)傷后立即呈現(xiàn)CARS，其代償特點(diǎn)為免疫調(diào)節(jié)過程逐漸趨于平衡。在上述病程反應(yīng)過程中，均有激發(fā)細(xì)胞因子的分泌，其中TNF-α起著核心作用，它可誘發(fā)IL-1、IL-6、IL-8以及繼發(fā)性炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，并由此進(jìn)一步激發(fā)炎癥連鎖反應(yīng)[9]。眾多細(xì)胞 因子相互作用形成一個(gè)復(fù)雜的生物化學(xué)網(wǎng)絡(luò)，有的起上調(diào)作用，有的起下調(diào)作用，導(dǎo)致所謂的“瀑布效應(yīng)”，從而加重了細(xì)胞的損傷[10]。

（三） 內(nèi)源性介質(zhì)

1.內(nèi)毒素：G—細(xì)菌壁外膜由許多蛋白和脂多糖（LPS）組成，LPS由O抗原多糖、內(nèi)、外核心和類脂A四個(gè)區(qū)域組成，其中類脂A是LPS的生物活性成份。LPS是通過多種受體（如CD14、CD11／18和脂蛋白凈化劑受體）與哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜結(jié)合而起作用的。脂多糖結(jié)合蛋白（LBP）與LPS的類脂A結(jié)合，促進(jìn)中性白細(xì)胞和網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)細(xì)胞的調(diào)理作用，其誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α的能力是單一LPS的1000倍。CD14是LBP／LPS復(fù)合物的受體之一，是一種55kD的蛋白，當(dāng)CD14與LPS/LBP復(fù)合物結(jié)合后即能激 發(fā)細(xì)胞生物活性，使信號向胞內(nèi)傳遞，并最終導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄事件的發(fā)生，如引發(fā)炎癥放大反應(yīng)等。實(shí)驗(yàn)證明，CD14缺陷小鼠對高濃度LPS或低濃度LPS加D-Gal預(yù)處理均有顯示抵抗。而LPS通過非CD14依賴途徑發(fā)揮生物學(xué)功能時(shí)，通常需要超常規(guī)的高濃度。

2.TNF-α：機(jī)體受到創(chuàng)傷或感染刺激后，TNF-α是機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生最早的和最起核心作用的炎癥介質(zhì)，它最初來源于腹膜和內(nèi)臟的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞[11]，其后，作為人體內(nèi)最大的巨噬細(xì)胞群——Kuffer細(xì)胞在TNF-α的生成中發(fā)揮了重要作用。盡管其半衰期很短，約14分～18分鐘。但它的短暫出現(xiàn)是誘發(fā)機(jī)體代謝和血流動(dòng)力學(xué)明顯變化，促進(jìn)炎癥介質(zhì)生成，導(dǎo)致炎性因子“瀑布效應(yīng)”的“元兇”；同時(shí)，TNF-α也是一種肌肉分解的主要誘導(dǎo)劑，它能促使肝內(nèi)蛋白質(zhì)、氨基酸作為能量消耗而導(dǎo)致惡病質(zhì)的形成；TNF-α還可激活凝血及補(bǔ)體系統(tǒng)，促進(jìn)粘附分子、前列腺素E2、血小板刺激因子（PAF）、糖皮質(zhì)激素（GC）等的釋放和表達(dá)[12]。轉(zhuǎn)貼于

3.白介素：TNF-α的分泌可誘發(fā)IL-1、IL-6、IL-8以及繼發(fā)性炎癥介質(zhì)的釋放。IL-1最初主要由被激活的巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，分為兩種類型：IL-1α和IL-1β。多數(shù)IL-1α以其前體形式存在于細(xì)胞液內(nèi)，少數(shù)以其生理活性形式存在于細(xì)胞膜上。IL-1β主要存在于血 循 環(huán)中，能誘導(dǎo)出與TNF-α相似的生理和代謝改變[13]，能與TNF-α產(chǎn)生相互協(xié)同作用[14]。IL-1在循環(huán)中的半衰期大約6分鐘，作為局部炎癥介質(zhì)，它的作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)不及TNF-α明顯。但在創(chuàng)傷時(shí)，IL-1通過刺激下丘腦前部的前列腺激動(dòng)中樞而誘導(dǎo)典型的炎癥發(fā)熱反應(yīng)。另外，IL-1還可通過垂體釋放β-內(nèi)啡呔和增加中樞鴉片類受體數(shù)目[15]。

IL-6來源于所有經(jīng)過TNF-α和IL-1誘導(dǎo)的細(xì)胞和組織，其中包括腸管組織。創(chuàng)傷60分鐘內(nèi)即可見循環(huán)中IL-6增高，4小時(shí)～6小時(shí)后達(dá)高峰，持續(xù)10天左右。IL-6既有致炎作用又有抗炎作用[16]。它是機(jī)體創(chuàng)傷和修復(fù)過程中一種重要的急性期反應(yīng)介質(zhì)，在創(chuàng)傷和炎癥過程中，IL-6不僅激活中性粒細(xì)胞，而且還能延遲吞噬細(xì)胞對衰老和喪失功能的中性粒細(xì)胞的吞噬，從而加劇了創(chuàng)傷后炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生[17]；IL-6也能通過促進(jìn)sTNFRs和IL-1R2的釋放，減弱TNF-α和IL-1的作用，并起到抗炎癥作用[18]。IL-6的大量釋放對患者是一個(gè)危險(xiǎn)信號[19]。

IL-8由內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，它的表達(dá)和激活與IL-6相關(guān)，它并不像TNF-α和IL-1那樣能顯著的影響血流動(dòng)力學(xué)，但可誘導(dǎo)中性多形核白細(xì)胞（PMN）和淋巴細(xì)胞的趨化[20]。因此，有作者把IL-8視為MODS的危險(xiǎn)性指標(biāo)[19]。

γ-INF在創(chuàng)傷6小時(shí)內(nèi)由Th細(xì)胞經(jīng)激活而產(chǎn)生，維持8天左右[21]。它可增強(qiáng)內(nèi)毒素對抗巨噬細(xì)胞的作用，增加TNF-α、IL-1、IL-6的釋放和粘附分子的表達(dá)；促進(jìn)PMN和巨噬細(xì)胞的吞噬活力。拮抗粒-單細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）；誘導(dǎo)IL-2、IL-12、IL-18R產(chǎn)生[22]。

4.繼發(fā)性炎癥介質(zhì)：繼發(fā)性炎癥介質(zhì)包括內(nèi)皮素（ET）-1、一氧化氮（NO）、前列腺素（PGI2）、前列腺素E2（PGE.2）激肽、反應(yīng)性氧族和血小板活化因子（PAF）等。其中大部分可誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞的相互作用，造成血流動(dòng)力學(xué)改變和器官損傷；也可直接誘導(dǎo)靶器官中細(xì)胞凋亡，引起器官功能衰竭。在這過程中，粘附分子發(fā)揮了相當(dāng)重要的作用。

（四） SIRS的進(jìn)程

SIRS可分為三期。第一期是機(jī)體受到損傷后發(fā)生局部反應(yīng)，產(chǎn)生細(xì)胞因子，激發(fā)炎癥反應(yīng)， 促進(jìn)創(chuàng)口修復(fù)和征集網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)細(xì)胞。第二期主要是少量細(xì)胞因子進(jìn)入血循環(huán)引起局部增強(qiáng)反應(yīng)，巨噬細(xì)胞和血小板聚集，細(xì)胞因子再生產(chǎn)。第一急性反應(yīng)可因前炎癥介質(zhì)分泌減少或釋放內(nèi)源性拮抗劑而被控制，如果這種穩(wěn)定狀態(tài)被打破，即進(jìn)入第三期—SIRS，再繼續(xù)發(fā)展，故MODS在所難免。

二、免疫調(diào)節(jié)治療

創(chuàng)傷后的免疫反應(yīng)不僅有眾多的細(xì)胞因子和受體參與，而且常遭受微生物及其毒素的直接損害。長期以來人們僅依賴抗菌藥物直接殺滅或抑制微生物的生長繁殖，并未對免疫紊亂狀態(tài) 進(jìn)行調(diào)理治療，致使不少SIRS患者仍循著MODS的方向發(fā)展。通過近年來的研究，人們提出了多種免疫治療方案，著重于阻斷炎癥瀑布反應(yīng)和保護(hù)細(xì)胞介導(dǎo)免疫功能。其總體策略：用多價(jià)抗體和補(bǔ)體受體中和內(nèi)毒素或外毒素，避免過量巨噬細(xì)胞受刺激而激活；下調(diào)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的活性，阻止炎癥細(xì)胞因子的大量產(chǎn)生；恢復(fù)創(chuàng)傷應(yīng)激后嚴(yán)重受損的細(xì)胞介導(dǎo)免疫功能[4，23]。其具體免疫調(diào)節(jié)治療方法有：

1.抗內(nèi)毒素和外毒素抗體中和毒素的炎癥激發(fā)作用：抗內(nèi)毒素抗體應(yīng)用較早，即利用致病菌制成與許多不同種類G-細(xì)菌起交叉反應(yīng)的抗內(nèi)毒素（mAb），結(jié)合內(nèi)毒素的類脂A部分而發(fā)揮中和其毒性作用。目前已制成鼠mAbE5和HA-1A兩種，并已用于臨床試驗(yàn)。殺菌/滲透性增強(qiáng)蛋白（BPI）與LBP具有較高同源性，為一種小分子蛋白，與LPS的親和力遠(yuǎn)大于LBP，并對G-細(xì)菌外膜有特異性的結(jié)合能力；BPI-LPS復(fù)合物既可防止巨噬細(xì)胞的激活，對動(dòng)物內(nèi)毒素血癥模型起保護(hù)作用；當(dāng)BPI與細(xì)菌外膜結(jié)合后，又發(fā)揮其毒性致細(xì)菌生長停止和不可逆性破壞及溶解。在類似的實(shí)驗(yàn)中也證明BPI對致死性G-細(xì)菌感染具有保護(hù)作用。

2.抗細(xì)胞因子療法：它是近年來的研究熱點(diǎn)之一。根據(jù)其作用原理不同，可分為：①用細(xì)胞因子抗體，可溶性受體及受體抗拮抗劑阻止TNF、IL-1和IL-6等的損傷作用。其中TNF-α抗體、sTNFR、IL-1RA、sIL-1R均已進(jìn)行了臨床試驗(yàn)，取得了一定的臨床試驗(yàn)，取得了一定的臨床效果；②拮抗體。IL-4、IL-10、IL-13、轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）—β和PGE2等均可抑制TNF-α基因的表達(dá)，尤以IL-10的作用更為顯著[24]。而TNF-α的許多病理損害效應(yīng)由其受體TNFRI-P55和TNFRⅡ-P75所介導(dǎo)，如秋水仙鹼能阻斷TNF與受體結(jié)合，進(jìn)而阻斷病理損害的發(fā)生。IL-1受體能阻斷脂多糖的作用，大劑量應(yīng)用對G-細(xì)菌感染和內(nèi)毒素血癥動(dòng)物具有保護(hù)能力。③應(yīng)用持續(xù)血液濾過和腎臟替代療法可部分清除細(xì)胞因子，對改善SIRS和MODS大有益處[25]。但這僅是一種非選擇性方法，意義尚待進(jìn)一步探索。

3.其他炎癥介質(zhì)的拮抗治療：磷脂酶A2單抗、花生四烯酸衍生物、環(huán)氧化酶制劑、粘附抑制劑和脫顆粒抑制劑（氧苯砜）等均處于實(shí)驗(yàn)階段，尚無最后定論。用IFN-γ、粒細(xì)胞集 落刺激因子（G-CSF）、IL-12等可預(yù)防膿毒癥的發(fā)生。其次，IFN還可通過正反饋調(diào)節(jié)機(jī)制促進(jìn)IL-12的合成，從而促進(jìn)Th1類細(xì)胞因子的產(chǎn)生和維護(hù)嚴(yán)重創(chuàng)傷病人的體內(nèi)免疫平衡。還有關(guān)于進(jìn)行ET-1/NO比值調(diào)節(jié)維持體內(nèi)免疫平衡的報(bào)道。

4.非類固醇藥物治療：布洛芬和消炎痛等可減少PGE2的產(chǎn)生，改善抗原提呈和維護(hù)淋巴細(xì)胞的IL-2、γ-IFN產(chǎn)生，促進(jìn)IL-2R表達(dá)，下調(diào)巨噬細(xì)胞啟動(dòng)的急性期反應(yīng)，以恢復(fù)創(chuàng)傷后的免疫抑制。

5.免疫調(diào)節(jié)性激素治療：免疫促進(jìn)激素減少，或免疫抑制類激類（類固醇激素、腎上腺激素等）增強(qiáng)是創(chuàng)傷誘導(dǎo)免疫抑制的重要原因。故可從整體水平調(diào)節(jié)內(nèi)分泌和免疫平衡、促進(jìn)某些免疫調(diào)節(jié)性激素分泌，間接調(diào)節(jié)創(chuàng)傷病人的細(xì)胞免疫功能[26]。如雄激素參與了創(chuàng)傷一出血后的免疫抑制機(jī)制，應(yīng)用睪酮拮抗劑可予以防止，由此可減少膿毒癥的易感 性。又如應(yīng)用氧氯普胺可促進(jìn)垂體前葉分泌催乳素，從而降低血漿中GC水平，促進(jìn)免疫功能恢復(fù)[27]。

6.免疫營養(yǎng)調(diào)節(jié)治療：傳統(tǒng)的營養(yǎng)療法并不能降低嚴(yán)重創(chuàng)傷病人的并發(fā)癥和死亡率。現(xiàn)代研究證實(shí)，在營養(yǎng)食品中添加精氨酸、谷氨酰胺、微量元素、ω-3脂肪酸和維生素等可以改變和/或調(diào)節(jié)免疫炎癥反應(yīng)，提高細(xì)胞免疫水平，促進(jìn)傷口愈合[28]。其中谷氨酰胺對許多器官和組織有特殊的營養(yǎng)作用，可降低高代謝反應(yīng)，保持和恢復(fù)腸道屏障的結(jié)構(gòu)和功能，改善免疫功能以及提高細(xì)胞的抗氧化能力。

7.擬胸腺藥物治療：如異丙肌甙和戊肽TP-5等能調(diào)理細(xì)胞免疫功能，使淋巴細(xì)胞增殖、活性增強(qiáng)以及IL-2、IL-2R、IFN等細(xì)胞免疫促進(jìn)成分合成[29]。

8.中醫(yī)中草治療：運(yùn)用中醫(yī)理論的“活血化瘀”“清熱解毒”方劑進(jìn)行免疫調(diào)理治療。研究較多的有人參、黃芪、金銀花、大黃、虎杖等。已證實(shí)其對細(xì)胞免疫功能和創(chuàng)傷后免疫抑制方面調(diào)理作用明顯，但對全身性炎癥反應(yīng)的研究尚不多見，且無統(tǒng)一病例選擇標(biāo)準(zhǔn)，有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

此外，近期在調(diào)節(jié)靶細(xì)胞信號傳導(dǎo)研究中，發(fā)現(xiàn)很多活化蛋白酶可進(jìn)一步激活胞漿中的轉(zhuǎn)錄因子，從而影響多種炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子的信號傳導(dǎo)途徑。其中研究較多的有抗轉(zhuǎn)錄因子（Nuchear Factor-kB， NF-kB），它廣泛存在于體內(nèi)各種細(xì)胞中，是調(diào)控多種細(xì)胞因子、化學(xué)因子、生長因子、細(xì)胞粘附分子和某些急性期蛋白基因表達(dá)所必需的轉(zhuǎn)錄因子[30] 。鑒于NF-kB能作為炎癥反應(yīng)中起中心調(diào)控作用的轉(zhuǎn)錄因子，故已成為抗炎治療的新熱點(diǎn)。到目前為止，已先后發(fā)現(xiàn)的NF-kB抑制劑有：蛋白酶抑制劑、二硫氨基甲酸肽吡咯烷（PDTC） 、二甲基亞砜（DMSO）、N—乙酰半胱氨酸（NAC）以及糖皮質(zhì)激素和水楊酸等，最近，Hehner等發(fā)現(xiàn)倍半萜內(nèi)脂（Sesquiterpene Lactones， SLs）可以阻止NF-kB誘導(dǎo)激酶（NIK）誘導(dǎo)的NF-kB抑制蛋白激酶（IKK）的激活，從而阻止NF-kB的活化[31]。可能成為最有前途的抗炎藥物之一。

三、結(jié) 語

嚴(yán)重創(chuàng)傷多引起機(jī)體的神經(jīng)、內(nèi)分泌和免疫三大系統(tǒng)的網(wǎng)絡(luò)反應(yīng)，其中STRS是發(fā)病基礎(chǔ)，如不予控制，MOF是最終結(jié)果，因而，有效地阻止早期STRS是控制病情惡性發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，故應(yīng)及時(shí)阻斷細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的瀑布效應(yīng)，給予免疫調(diào)節(jié)治療。近年來，免疫治療愈來愈受到重視，取得了一定的進(jìn)展。但在臨床和研究應(yīng)用中，首先應(yīng)考慮到免疫治療不僅存在個(gè)體差異性，而且受藥物使用時(shí)機(jī)、劑量以及創(chuàng)傷病理的嚴(yán)重程度和發(fā)展階段的影響。更應(yīng)考慮的因素是正確判斷體內(nèi)免疫平衡狀態(tài)，是典型的SIRS、CARS病變，還是中間型狀態(tài)（ 又叫混合型炎癥反應(yīng)綜合征Mixed Antagonist Response Syndrome，MARS）。如處于SIRS占優(yōu)勢，應(yīng)采用抗介質(zhì)治療；如CARS占優(yōu)勢，則采用免疫刺激治療。總之，應(yīng)盡量增強(qiáng)其有利的一面，抑制其危害的一面。

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篇9

【關(guān)鍵詞】  白細(xì)胞介素21;肝炎,乙型,慢性;cd8+t細(xì)胞;免疫調(diào)節(jié)

【摘要】  目的探討白細(xì)胞介素21(il-21)在慢性乙型肝炎中的免疫調(diào)節(jié)作用。方法采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa)檢測32例慢性乙型肝炎病人(病人組)和29例健康人(對照組)血清中il-21水平。提取外周血單個(gè)核細(xì)胞后分別設(shè)為il-21刺激組、il-2刺激組和未刺激組，多色流式分析技術(shù)檢測cd8+t細(xì)胞頻率，胞內(nèi)細(xì)胞因子染色技術(shù)檢測cd8+ifn-γ+t細(xì)胞的頻率。

結(jié)果與對照組相比，病人組血清中il-21濃度明顯增高(t=2.75，p<0.01);與il-2刺激組和未刺激組相比，il-21刺激組cd8+t細(xì)胞頻率及分泌ifn-γ水平顯著升高(f=59.27、10.27，q=3.82~14.11，p<0.01)。結(jié)論il-21通過對cd8+t細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)參與慢性乙型肝炎病人體內(nèi)病毒的清除，為臨床治療提供了新的靶標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】  白細(xì)胞介素21;肝炎,乙型,慢性;cd8+t細(xì)胞;免疫調(diào)節(jié)

[abstract]objectiveto investigate the role of il-21 in patients with chronic hepatitis b (chb).methodsserum il-21 in 32 patients with chb and 29 healthy subjects were determined using enzyme-linked immunosorbent assay (elisa). after extraction of peripheral blood mononuclear cell, a setting of il-21-stimulus, il-2-stimulus and not-yet stimulus group was made. hbv dna was analyzed with rt-pcr. the frequency of cd8+ t cells was analyzed by flow cytometry, and that of ifn-γ by intracellular cytokine straining.resultscompared with the controls, the serum concentration of il-21 in chb was markedly higher (t=2.75,p<0.01); compared with il-2 stimulus and not-yet stimulus, the frequency of cd8+ t cells and secretion of cd8+ifn-γ+ t cells dramatically increased (f=59.27,10.27;q=3.82-14.11;p<0.01).conclusionil-21 involves in eli-mination of viruses in the body of patients with chb through immunological regulation of cd8+ t cells, which provides a new target for clinical therapy of the disease.

[key words]interleukin-21; hepatitis b, chronic; cd8+ t cells; immune regulation

我國是全球乙型肝炎病毒(hbv)感染高流行區(qū)，hbv攜帶者超過1億人，現(xiàn)癥慢性乙型肝炎病人約3 000萬，每年新增病例50萬～100萬[1-2]。盡管預(yù)防性hbv疫苗已經(jīng)在全球廣泛應(yīng)用，但慢性持續(xù)性hbv感染率仍居高不下，嚴(yán)重威脅著人類的健康。目前，由于尚不清楚hbv感染后乙型肝炎慢性化的確切機(jī)制，所以無法制定出行之有效的治療方案。因此，明確該機(jī)制，可望為乙型肝炎的臨床治療提供新的線索和可靠的理論依據(jù)。白細(xì)胞介素21(il-21)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞因子，屬于ⅰ型細(xì)胞因子家族，主要是由cd4+t細(xì)胞合成和分泌。人類的il-21基因定位于4q26-27,鼠類的il-21基因位于3號染色體[3]。最近研究證實(shí)，在淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(lcmv)慢性感染中，il-21擔(dān)負(fù)著重要作用，并與病毒的清除直接相關(guān)，這一重大發(fā)現(xiàn)為hbv慢性持續(xù)感染的研究帶來了新的思路。本研究旨在探討在慢性hbv感染過程中，il-21擔(dān)負(fù)著怎樣的作用?對乙型肝炎特異性cd8+t細(xì)胞是否存在免疫調(diào)控作用?

1對象與方法

1.1研究對象

慢性乙型肝炎病人32例(病人組),男20例，女12例;平均年齡(41.2±13.6)歲。病人均來自青島市市立醫(yī)院，診斷符合2000年全國第十次病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議(西安)制定的標(biāo)準(zhǔn)，均排除合并腫瘤及自身免疫性疾病者。健康對照組29例，男18例，女11例;平均年齡(37.2±9.5)歲。

1.2主要試劑和儀器

美國bd公司產(chǎn)facs calibur型流式細(xì)胞儀。美國寶特公司產(chǎn)酶標(biāo)儀。cd3-pe、cd8-fitc、ifn-γ-apc等均購自美國bd公司。hbv血清標(biāo)志物elisa檢測試劑盒由上海實(shí)業(yè)科華科技有限公司提供。il-21試劑盒購自美國tpi公司。

1.3il-21水平檢測

采用雙抗體夾心elisa方法檢測受試者血清il-21水平。取受試者血清及標(biāo)準(zhǔn)液各50 μl加入酶標(biāo)板，37 ℃孵育30 min;每孔加酶標(biāo)抗體50 μl，37 ℃孵育30 min。洗滌5次加底物顯色;終止反應(yīng)后，采用酶標(biāo)儀測定吸光度(a)值，以a值計(jì)算il-21水平。

1.4外周血單個(gè)核細(xì)胞(pbmc)的提取

將淋巴細(xì)胞分離液加入到10 ml尖底離心管中;用毛細(xì)吸管加入等量的倍比稀釋血液，2 000 r/min離心25 min。使用毛細(xì)吸管輕輕吸取白膜層的pbmc，洗滌后使用含體積分?jǐn)?shù)0.10胎牛血清的rpmi 1640培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，培養(yǎng)于6孔板中備用。分為以下3組：il-21刺激組(加入20 μl的il-21)、il-2刺激組(加入20 μl的il-2)、未刺激組(不加il-21和il-2)。共孵育10 d后，檢測cd8+t細(xì)胞的數(shù)量及功能。

1.5流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測cd8+t細(xì)胞頻率

肝素抗凝的全血200 μl加2 ml pbs稀釋后，1 000 r/min離心5 min;用吸管小心移棄上清液;分別加20 μl以pe標(biāo)記的cd3、fitc標(biāo)記的cd8抗體于全血細(xì)胞中，設(shè)置同型對照，混勻;室溫避光孵育30 min;洗滌;加facs裂解液，室溫10 min;待細(xì)胞懸液變成真性溶液后洗滌2次;以10 g/l多聚甲醛200 μl重懸固定，流式細(xì)胞儀檢測cd8+t細(xì)胞頻率，bd facs 專用facsdiva軟件分析。

1.6特異性肽刺激活化胞內(nèi)ifn-γ染色

3組孵育10 d后，分別加入20 μl以pe標(biāo)記的cd3、fitc標(biāo)記的cd8單克隆抗體及同型對照，室溫避光孵育20 min;然后加入1× facstm穿透液500 μl，室溫下避光孵育15 min;洗滌1次;分別加入20 μl熒光標(biāo)記的ifn-γ抗體及同型對照，室溫下避光孵育20 min;洗滌2次，重懸于10 g/l多聚甲醛溶液200 μl 中，上機(jī)檢測。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以±s表示，使用stata 7.0及ppms 1.5[4]統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析,兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn),p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組血清il-21濃度比較

對照組和慢性乙型肝炎病人組血清il-21濃度分別為(196.33±114.56)、(274.18±106.22)ng/l，與對照組相比，病人組血清il-21濃度明顯增高(t=2.75，p<0.01)。

2.2cd8+t細(xì)胞頻率

與未刺激組及il-2刺激組相比，il-21刺激組cd8+t細(xì)胞的頻率明顯增高，差異有顯著性(f=59.27，q=11.39、14.11，p<0.05)。見表1。

2.3cd8+t細(xì)胞胞內(nèi)ifn-γ的檢測

與未刺激組及il-2刺激組相比，il-21刺激組cd8+ifn-γ+t細(xì)胞頻率顯著增高，差異有顯著性(f=10.27，q=3.82、6.28，p<0.01)。見表1。表1各組cd8+t細(xì)胞和 cd8+ifn-γ+t細(xì)胞頻率比較

3討論

在hbv感染中，hbv作為嗜肝的dna病毒，本身對肝細(xì)胞并沒有損害;而在清除胞內(nèi)hbv和肝細(xì)胞的損傷中均起關(guān)鍵作用的是cd8+t細(xì)胞，即細(xì)胞毒性t細(xì)胞 (ctl)。在急性hbv感染中，可激發(fā)強(qiáng)烈的、多克隆的表位特異性ctl反應(yīng);而在慢性感染中，這些反應(yīng)是微弱的甚至缺失的，造成ctl反應(yīng)低下的原因仍有待于研究[5-6]。傳統(tǒng)理論認(rèn)為，cd4+t細(xì)胞通過分泌il-2，促進(jìn)cd8+t細(xì)胞的增殖及免疫學(xué)效應(yīng)。而在慢性乙型肝炎中，這種功能薄弱，于是有學(xué)者期望通過提高il-2的分泌，改善cd8+t細(xì)胞的功能，促進(jìn)病毒的清除，以期達(dá)到治療目的，但是臨床效果甚微，說明尚未找到其真正的作用靶標(biāo)。

近期研究結(jié)果提示，il-21在慢性感染中可發(fā)揮免疫調(diào)控效應(yīng)。在lcmv慢性感染模型中，若敲除il-21基因可嚴(yán)重影響lcmv的清除[7-9]。這一重大發(fā)現(xiàn)為我們的研究帶來新的思路。本研究結(jié)果顯示，乙型肝炎病人血清中il-21含量增高，提示其在hbv感染中擔(dān)負(fù)著一定的作用。為揭示il-21發(fā)揮免疫學(xué)效應(yīng)的機(jī)制，本研究設(shè)置不同組觀察其對cd8+t細(xì)胞數(shù)量的影響，結(jié)果顯示，用il-21刺激后，cd8+t細(xì)胞數(shù)量顯著增高，且超過il-2的刺激效應(yīng)，說明cd4+t細(xì)胞可以通過分泌il-21而刺激病毒特異性cd8+t細(xì)胞的增殖，這一新發(fā)現(xiàn)是對傳統(tǒng)概念的突破。

近年來研究結(jié)果提示，cd8+t細(xì)胞識(shí)別hbv感染肝細(xì)胞表面的靶抗原后，主要通過兩種途徑發(fā)揮免疫學(xué)效應(yīng)。以往對hbv的清除機(jī)制主要傾向于cd8+t細(xì)胞對靶細(xì)胞的直接殺傷作用，即通過穿孔素和顆粒酶的釋放等使病毒和感染細(xì)胞 “同歸于盡”。近來越來越多的研究證據(jù)使這一傳統(tǒng)學(xué)說受到挑戰(zhàn)，目前認(rèn)為ctl的非細(xì)胞損傷的病毒清除機(jī)制占優(yōu)勢地位。cd8+t細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞無損傷的病毒清除主要是通過細(xì)胞因子的釋放，如ifn-γ和tnf-α等，達(dá)到清除病毒的目的[10-11]。為驗(yàn)證il-21在促進(jìn)cd8+t細(xì)胞數(shù)量增高時(shí)是否會(huì)改善其功能，本研究利用流式細(xì)胞分析技術(shù)并胞內(nèi)細(xì)胞因子染色技術(shù)觀察了il-21對不同組cd8+t細(xì)胞胞內(nèi)ifn-γ分泌情況的影響，結(jié)果顯示，加入il-21刺激后，cd8+t細(xì)胞分泌ifn-γ功能增強(qiáng)。

綜上所述，il-21在慢性乙型肝炎中擔(dān)負(fù)著重要的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)，其通過改善cd8+t細(xì)胞的數(shù)量及功能，幫助清除病毒。本研究結(jié)果為慢性乙型肝炎的治療提供了新的思路。

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篇10

【關(guān)鍵詞】口腔扁平苔蘚；中西醫(yī)結(jié)合；免疫調(diào)節(jié)

文章編號：1009-5519（2008）13-1919-03 中圖分類號：R25 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

口腔扁平苔蘚（oral lichen planus，OLP）是口腔黏膜病中除復(fù)發(fā)性口瘡?fù)獾某Ｒ姴〖岸喟l(fā)病。因其原因不明，時(shí)發(fā)時(shí)愈，病程較長，給患者帶來了極大的痛苦。病損表現(xiàn)為白色小丘疹組成的各種花紋，分為網(wǎng)狀、樹枝狀、環(huán)狀或半環(huán)[1]。免疫研究認(rèn)為：扁平苔蘚的發(fā)病是T細(xì)胞介導(dǎo)的過程，局部病變組織內(nèi)有大量激活的T淋巴細(xì)胞浸潤；細(xì)胞激酶和粘附分子的表達(dá)增加[2。所以選擇有效的治療方法，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，取得最佳的治療效果已成為目前醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：36例OLP患者來源于大連大學(xué)附屬新華醫(yī)院，大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬口腔醫(yī)院，瓦房店市中心醫(yī)院口腔科（20004年8月~2007年8月）。其中男15例，女21例。年齡23~62歲，平均39歲。所有患者過去均未接受中藥和免疫藥物治療。健康人對照組36例，平均37.5歲，無系統(tǒng)疾病和口腔疾病，均對本研究的目的和要求有所了解，志愿受試，并能合作。用免疫酶法測36例健康人及36例扁平苔蘚患者用藥前后的外周血T淋巴亞群CD3、CD4、CD8及CD4/CD8比率。

1.2 藥物治療及方法：黃芪30 g，黨參30 g，肉桂10 g，甘草10 g，生地30 g，黃柏20 g，砂仁10 g。0.5%維甲酸軟膏（上海第三制藥廠生產(chǎn)）。36例扁平苔蘚患者隨機(jī)分3組。中藥組：連續(xù)服用中藥水煎劑，早晚各1次，連續(xù)用2個(gè)月。西藥組：在病損處敷0.5%維甲酸軟膏，隔日1次，連續(xù)用2個(gè)月。中藥加西藥組：服用中藥的同時(shí)，局部涂0.5%維甲酸軟膏。隔日1次。連續(xù)用2個(gè)月。三組分別在用藥后2個(gè)月進(jìn)行各項(xiàng)觀察指標(biāo)的檢查。

2 結(jié)果

2.1 OLP患者T淋巴細(xì)胞亞群的變化：見表1。

2.2 藥物治療對OLP患者T淋巴細(xì)胞亞群的影響：見表2。

3 討論

3.1 祖國醫(yī)學(xué)病機(jī)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)致病因素的關(guān)系：OLP從中醫(yī)理論來講，與心脾肝腎均有關(guān)。其中脾失健運(yùn)，心火上炎，氣血兩虛導(dǎo)致機(jī)體抵抗力下降與西醫(yī)所論述的精神因素、內(nèi)分泌因素、免疫因素等所致的口腔扁平苔蘚[1]都是異曲同工。如過度緊張、情志不舒、失眠健忘、經(jīng)期緊張綜合征等則是共有的誘因。而脾腎與機(jī)體免疫功能的內(nèi)在聯(lián)系也是不言而喻的。

3.2 中藥的功效及組方分析：本方是在保元湯及三才封髓丹的基礎(chǔ)上進(jìn)行重新組合配制的方劑，其主要作用是益氣養(yǎng)血，增強(qiáng)免疫功能。方藥組成為黃芪、黨參、肉桂、甘草、生地、黃柏、砂仁。方中黃芪補(bǔ)氣生血，能增強(qiáng)人體抗病能力，其中的黃芪多糖能提高免疫功能，促進(jìn)抗體生成。且對干擾素系統(tǒng)有促進(jìn)作用，使IgA、IgM、IgE水平明顯提高。黨參為補(bǔ)中益氣，生津養(yǎng)血藥，其增強(qiáng)機(jī)體免疫作用，主要能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力和T細(xì)胞功能。對機(jī)體應(yīng)激性也有一定作用。肉桂具有活血通經(jīng)之功效，用以本方可增強(qiáng)補(bǔ)益氣血之功，且其主要成份桂皮醛可擴(kuò)張血管，促進(jìn)血液循環(huán)。甘草可益氣補(bǔ)中，益氣健脾，同時(shí)具有類腎上腺皮質(zhì)激素樣作用。生地可養(yǎng)陰生津，抑制真菌感染。黃柏可瀉火解毒，有一定的抗菌能力。砂仁可理氣溫脾，其主要成份對腸管有興奮作用，故善行脾胃氣滯。

3.3 中藥對OLP T淋巴細(xì)胞亞群的影響：本組患者治療前CD3、CD4以及CD4/CD8比率顯著低于健康人(P＜0.01）。提示OLP患者T淋巴細(xì)胞功能減弱，對免疫監(jiān)視起重要作用的T淋巴細(xì)胞亞群的比例平衡失調(diào)。經(jīng)過中藥治療及中藥+西藥治療之后，兩組的CD4/CD8的比率提高，回升到1.60±0.31及1.62±0.29。與健康人的比率（1.61±0.15）差異無顯著性(P＞0.05)。說明患者T淋巴細(xì)胞亞群分布逐漸恢復(fù)平衡，功能好轉(zhuǎn)，中藥治療對患者T細(xì)胞亞群有很好的調(diào)節(jié)作用，從而取得較好的療效，而治療效果優(yōu)良的程度與CD4/CD8比率恢復(fù)的程度有關(guān)。中藥加西藥治療組較純中藥療組CD4/CD8比率提高顯著，說明治療效果中西醫(yī)結(jié)合優(yōu)于純中藥治療。

從患者治療前后的T細(xì)胞亞群分布變化觀察到，中藥對T細(xì)胞亞群的調(diào)節(jié)作用通過兩條途徑進(jìn)行。其一是對CD4和CD8均低的病例（本組9例）行純中藥治療和中西醫(yī)結(jié)合治療后均有提高。但CD8提高幅度較小。第二是對CD8偏高的病例（本組17例）表現(xiàn)為CD4提高而CD8降低，從而達(dá)到恢復(fù)CD4/CD8，比率正常的狀態(tài)。說明本研究中中藥治療對OLP患者機(jī)體免疫有雙向調(diào)節(jié)作用。雙向調(diào)節(jié)作用含義是：當(dāng)機(jī)體某一方而處于失衡狀態(tài)時(shí)，給以同一方藥，既可以使其從亢進(jìn)狀態(tài)向正常狀態(tài)轉(zhuǎn)化，也可使其從低下狀態(tài)向正常狀態(tài)轉(zhuǎn)化[2]。本研究中治療結(jié)果也充分表明了中藥治療對機(jī)體免疫具有雙向調(diào)節(jié)作用的優(yōu)點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)：

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