蛋白酶范文10篇

半朧氨酸蛋白酶抑制劑(cystatin)廣泛分布于植物、細菌、病毒、原生動物和哺乳動物體內，參與各種生理和病理的過程，如蛋白質的分解代謝、感染與免疫、腫瘤的侵襲和轉移等。早在20世紀60年代末，Fossum和whitaker[’〕就已從雞蛋清中分離得到半朧氨酸蛋白酶抑制劑并發現其具有抑制無花果蛋白酶、木瓜蛋白酶及二膚酶的活力。80年代早期，Anastasi等[zl首次采用親和層析方法從雞蛋清中分離得到半朧氨酸蛋白酶抑制劑并命名為“cystatin”，此后，cystatin相繼在不同的物種中被分離純化。這些在結構和功能上具有進化上相似性的內源性半朧氨酸蛋白酶抑制劑構成一個Cystatin超家族。

cystatin除了具有獨特的抑制半朧氨酸蛋白酶(如組織蛋白酶eathepsinB、L、S和天冬酞胺內膚酶AE功活性外，還具有一些免疫調節活性。本文就cystatin的分類、結構及免疫調節活性方面的研究進展作一綜述。

由一條約含100個氨基酸的多膚鏈構成，不含二硫鍵和糖基，分子量約11一12KD。這類分子包括人stefinA、B，鼠。tefin。、俘等，主要分布于上皮細胞和多形核白細胞內;②cystatins家族，為分泌型蛋白。由約120個氨基酸組成，分子量約13一14KD，位于多膚鏈的c端有兩個鏈內二硫鍵，也不含糖基。目前，有些學者認為川。ystati。超家族除上述的3個類型外，還包括一些胎球蛋白、組氨酸糖蛋白、cys-tatin相關蛋白以及恒定鏈等，這些均與cystatin同源，歸為新一類cystatin超家族成員。

cystatin分子的結構特征cystati。分子的共同特征是[5]能以等摩爾與半朧氨酸蛋白酶分子發生緊密、可逆地結合。經氨基酸序列分析發現它們具有3個高度保守的區域:①靠近N端的區域，其中甘氨酸一11(cystatinC序列)高度保守;②第一個發夾環，包括高度保守的QVvAG序列(谷氨酞胺一55一甘氨酸一59);③第二個發夾環，包括脯氨酸一105和色氨酸一106。這3個區域均為疏水性，其疏水性作用與cystatin和目標酶的結合有關。

eysrain與抗原呈遞樹突狀細胞(DC)是[7]一類重要的抗原呈遞細胞(APC)。早期或未成熟的DC具有很強的攝取抗原的能力，而無或很弱的呈遞抗原的能力。它們在外周組織接受刺激(如抗原、1」S、細胞因子等)后逐漸向次級淋巴器官遷移。在遷移過程中，DC經歷一個130成熟的過程:首先逐漸喪失內化抗原的能力，接著表達MHC一n分子和協同刺激分子增加，最后胞膜表面呈遞抗原膚一MHC一n復合物。總之，DC通過調控MHC一11分子的胞內轉運和胞膜表達來調節其抗原呈遞能力。

【摘要】研究日本新近研制的第三代3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A（3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA，HMG-CoA）還原酶抑制劑匹伐他汀（pitavastatin，NK-104）對人肝癌細胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）活性的影響。方法:采用細胞培養技術，以肝癌細胞系HepG2為靶細胞，以不同濃度的藥物處理細胞48h后，利用WST-8法測定NK-104對細胞增殖的影響;利用熒光染料Hoechst33258染色，熒光顯微鏡觀察細胞核碎片;以流式細胞儀分析細胞周期的變化;采用半胱氨酸蛋白酶3比色法檢測caspase-3活性。結果:NK-104（10μmol/L）對HepG2細胞有明顯抑制作用，可誘導HepG2細胞凋亡，并能增強caspase-3基因的活性。結論:NK-104能夠誘導HepG2細胞凋亡，其機制與caspase-3依賴性凋亡調節信號通路有關。

【關鍵詞】肝癌

3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A（3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA，HMG-CoA）還原酶抑制劑，統稱為抑制素，是重要的脂類合成抑制劑，主要在人體肝臟中代謝，臨床上廣泛應用于治療高脂血癥［1］。最近研究發現，HMG-CoA還原酶抑制劑具有生物學多效性，與降血脂無關。有報道其在體外具有抗癌作用［2］、體內與5氟尿嘧啶（fluorouracil，5-Fu）共同作用能夠延長晚期肝癌患者的生存期［3］。匹伐他汀（pitavastatin，NK-104）是日本新近研制的第三代高效HMG-CoA還原酶抑制劑［4］。在血管內皮細胞系NK-104通過磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（phosphoinositide3-kinase/proteinkinaseB，PI3K-Akt）基因激活途徑對內皮細胞的保護作用已有報道［5］，但其在肝癌細胞系的抗癌作用尚未見報道。本文在肝癌細胞系HepG2通過2-（2-甲氧基-4-硝基苯）-3-（4-硝基苯）-5-（2，4-二硫代苯）-2H-四氮唑單鈉鹽｛［2-（2-methoxy-4-nitrophe-nyl）-3-（4-nitrophenyl）-5-（2，4-disulfophenyl）-2H-tetrazolium，monosodiumsalt］，WST-8｝、熒光染料Hoechst33258染色、流式細胞儀和半胱氨酸蛋白酶3比色法等檢測方法，研究NK-104對人肝癌細胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）活性的影響，為NK-104在抗腫瘤中的作用機制提供實驗依據。

1材料和方法

1.1主要材料與儀器NK-104，日本興和有限公司（日本名古屋）和日產化學工業公司（日本東京）產品;熒光染料Hoechst33258、甲羥戊酸（mevalonicacid，MEV）和碘化丙啶（propidiumiodide，PI）染色液（PI100g/L，1%Triton100，9g/LNaCl），Sigma公司產品。流式細胞儀，2000FCA，美國BD公司產品。

1.2實驗方法

【摘要目的摘要:蛋白酶激活受體（proteaseactivatedreceptors,PARs）廣泛分布在多種組織細胞上，但4種PARs在肺上皮細胞的表達情況尚不清楚.我們用A549細胞探究PARs在肺上皮細胞的表達.方法摘要:采用逆轉錄聚合酶鏈反應（RTPCR）、流式細胞儀和免疫熒光細胞染色分析技術分析肺上皮細胞系A549細胞PARs的表達情況.結果摘要:4種PARs在肺上皮細胞上均有不同程度的表達.結論摘要:肺上皮細胞同時表達PAR1~44種受體，這為進一步探究PARs在肺上皮細胞的功能奠定了基礎.

【蛋白酶激活受體；肺上皮細胞；RTPCR；流式細胞術；免疫熒光細胞染色

0引言

蛋白酶激活受體（proteaseactivatedreceptors,PARs）屬G蛋白耦聯受體家族，目前共發現4個成員摘要：PAR1，PAR2，PAR3，PAR4.蛋白酶可以酶切PAR的N末端，暴露含有系鎖配體的新的N末端，可自我激活PAR功能［1］.探究顯示，PARs分布在多種組織細胞上，包括血小板、白細胞、肥大細胞、內皮細胞、血管平滑肌細胞、成纖維細胞、消化道上皮細胞等.PAR被激活后，可介導跨膜信號轉導從而參和凝血、炎癥、變態反應等生理和病理過程的發生［2］.許多組織上皮表達的PARs可能在不同的病理過程中起功能，雖然一些組織的PARs的分布已有探究，但4種PARs在肺上皮的表達情況和功能還不是十分清楚.因此，我們利用培養的人肺癌上皮細胞系A549細胞探索四種PARs在肺上皮細胞上的表達特征.

1材料和方法

1.1材料

【摘要】基質金屬蛋白酶(MMP)是一類鋅離子依賴性內源性蛋白水解酶家族，主要功能是降解細胞外基質(ECM)和基底膜。近年來人們對MMP的結構功能、活性的調節及在原發性開角型青光眼發病機制和治療中的作用有了初步的了解。本文就這方面的研究結果作一綜述。

【關鍵詞】基質金屬蛋白酶；原發性開角型青光眼；細胞外基質

原發性開角型青光眼(POAG)是常見致盲性眼病之一，迄今為止，其病因及發病機制尚不清楚。小梁網組織的ECM與MMP的動態平衡改變日益受到原發性開角型青光眼研究領域學者的關注。本文就MMP與POAG關系的研究進展綜述如下。

1MMP的結構及分類

MMP是一類鋅離子依賴性內源性蛋白水解酶，主要功能是降解ECM和基底膜，除此之外在許多生理和病理過程中發揮重要作用，例如基底膜的降解，ECM的重構，結締組織的更新，血管的發生，再生，創傷的修復，腫瘤的發展和轉移。

MMP家族在人類目前已發現了20幾位成員，新成員還不斷被發現。根據其底物的特異性可將其分為五類［1］:(1)膠原酶，包括從纖維細胞、巨噬細胞、上皮細胞來源的膠原酶MMP-1，從中性白細胞中得到的膠原酶MMP-8、MMP-13和MMP-18。主要水解底物是膠原纖維，如Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ型膠原和基底膜成分。(2)明膠酶，包括主要由結締組織細胞來源的MMP-2和主要由中性白細胞和巨噬細胞分泌的MMP-9，即明膠酶A、B，其主要底物是明膠，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型膠原和基底膜成分，MMP-2還可以分解纖維粘連蛋白(FN)和層粘連蛋白(LN)；(3)基質降解酶類，包括MMP-3，-10，-11，其底物比較廣泛，主要降解Ⅲ、Ⅳ、Ⅸ型膠原LN、FN、蛋白多糖及明膠等，并能激活某些MMP；(4)膜型酶，包括MMP-4，-15，-16，-17，-24，-25，是新發現的一類，能降解幾種ECM成分，有些可激活其他MMP；(5)未分類MMP，包括MMP-6，-7，-12，-19，-26，-28等，較復雜，有些底物仍不詳。

摘要：目的認識蘇木素對胰蛋白酶作用活性的影響及蘇木素對胰蛋白酶作用的熒光性質。方法用酶活性法觀察蘇木素對胰蛋白酶活性的影響；用紫外光譜和熒光光譜研究蘇木素對胰蛋白酶作用的光譜性質。結果蘇木素對胰蛋白酶活性可產生競爭性抑制，抑制劑常數K1=6.13×10-5mol/L；蘇木素對胰蛋白酶的熒光猝滅效應為靜態猝滅；蘇木素與胰蛋白酶之間的作用力主要表現為氫鍵和范德華力。結論蘇木素可使胰蛋白酶分子中的色氨酸所處環境的疏水性增強，使胰蛋白酶分子構象發生變化。

關鍵詞：蘇木素胰蛋白酶熒光光譜紫外光譜酶活性

中藥蘇木的主要成分蘇木素(Haematorylin)是組織、病理實驗室中最常用的染色劑，可用于細胞核染色［1］。蘇木素具有收縮血管、中樞抑制及抗炎等作用，具有行血、破淤、消腫、止痛的功效［2］。胰蛋白酶(trypsin)是人和動物腸道中一種重要的蛋白水解酶，從該酶被發現以來，人們對其進行了一定的研究，如用胰蛋白酶為催化劑對蛋白質進行降解的研究［3～5］。藥物對胰蛋白酶作用的性質［6］及蘇木素與DNA作用的性質的研究已引起重視［7］。本文主要通過紫外和熒光光譜法研究蘇木素與胰蛋白酶作用的性質，從而獲得蘇木素與胰蛋白酶作用時結構變化、所處微環境等信息，探討蘇木素與胰蛋白酶相互作用的機制，并對蘇木素與胰蛋白酶作用活性的影響也進行了研究。

1器材

1.1儀器熒光分光光度計，美國CaryEclipse（瓦里安）產品；雙光束紫外可見分光光度計TU－1901，北京普析產品；pH－3C型酸度計，上海精密科學儀器有限公司產品。

1.2藥品牛胰蛋白酶（生化試劑），上海海洋生物技術有限公司產品；蘇木素（生物染色劑BS），成都科龍化工試劑廠產品；硼酸（分析純），成都科龍化工試劑廠產品。

摘要：抗營養因子能破壞或阻礙營養物質的消化利用，對動物健康和生長性能產生不良影響。本文對大豆中的幾種重要的抗營養因子的作用機理及其鈍化處理方法進行了綜述。

關鍵詞：抗營養因子大豆鈍化

大豆作為植物飼料蛋白質源，被廣泛應用于飼料行業中。大豆粕粗蛋白含量為35-42%。大豆粕以其蛋白質含量高，氨基酸比較平均而成為全世界最主要的植物蛋白質飼料原料。但大豆中含有多種抗營養因子，嚴重影響動物的消化、吸收。大豆中的抗營養因子主要包括：蛋白酶抑制劑、植物凝集素、大豆抗原蛋白(致敏因子)、脲酶、脹氣因子、植酸及致甲狀腺腫素等多種抗營養因子。

一、抗營養因子

1.蛋白酶抑制因子蛋白酶抑制因子主要有KTI（胰蛋白酶抑制因子）和BBI（弓手抑制因子）兩類。KTI主要抵抑制胰蛋白酶，而BBI同時抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白質酶。蛋白酶抑制因子，它能抑制胰蛋白酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶活性，促進胰腺分泌、胰腺腫大，造成必需氨基酸內源性損失的結果；生長停滯、生產性能下降。其中重要的是胰蛋白酶抑制因子，胰蛋白酶抑制因子主要影響胰腺的分泌功能，它與胰蛋白酶在小腸中的濃度相關。腸道的胰蛋白酶與抑制因子結合，然后經糞便排出體外，因此降低了胰蛋白酶的濃度。大量胰蛋白酶的大量補償性分泌，造成內源性含硫氨基酸的丟失引起體內氨基酸代謝不平衡，特別是蛋氨酸的不足引起生長受阻，消化吸收功能失調和紊亂（Callaher和Scheeman，1986）。

2.植物凝聚素植物凝聚素主要以糖蛋白的形式存在，它的主要作用是對免疫系統和器官具有一定的毒害，對腸道產生的免疫球蛋白A有顯著的拮抗作用；能影響家畜的生產性能。植物凝集素是一種對某些糖分子具有高度親和力的蛋白質，其中大多數是糖蛋白。植物凝集素和糖及配糖體（糖脂、糖肽、低聚糖、氨基葡聚糖）的結合，類似于酶和底物的結合或抗原和抗體的結合，具有高度的特異性。

摘要：人類對動物蛋白需求量增加的同時也帶來了對動物飼料需求的增加。植酸酶、木聚糖酶和蛋白酶是當今動物生產中使用最廣泛的三種飼用酶。本文總結了三種飼用酶的主要作用方式和營養效能。

關鍵詞：豬；家禽；飼料；木聚糖酶；植酸酶；蛋白酶

“人口的不斷增長意味著對食物的需求不斷增長，為了滿足這一增長需求，動物蛋白將發揮巨大作用。”Novus國際有限公司全球家禽市場部高級經理AjayBhoyar博士如是說。所有的蛋白質來源都必須提高產量，但市場上各種蛋白質來源中家禽和豬的增長幅度是最大的。水產和反芻動物也會出現增長，但其增幅要小于家禽和豬。人類對動物蛋白需求量增加的同時也帶來了對動物飼料需求的增加，而將飼料副產物和副產品以從未見過的高水平添加入單胃動物飼料也正在發展為一種趨勢。酶具有降低抗營養因子效應的作用，這是因為酶能夠自然分解飼料中難以消化的組分，否則這些組分將會浪費。這種作用能夠釋放出更多的營養成分，減少浪費，從而降低飼料中昂貴成分的含量。無論是單獨使用還是組合使用，酶都會作用于其特定的底物上，并發揮出完整的效應。多種酶組合使用時，除釋放能量、礦物質和單體氨基酸外，還有其他優勢。植酸酶、木聚糖酶和蛋白酶是當今動物生產中使用最廣泛的三種飼用酶。這些酶作用于所有原料的特定底物上，因此對于消化來說是必不可少的，即使不使用其他飼料原料也是如此。

1植酸酶減少環境污染

在種子發芽的過程中，植酸鹽會存儲磷(Phosphorus，P)，并在種子生命周期內保護其避免被氧化反應。單胃動物飼料中的植酸磷會導致一個問題，即未消化的磷被排出動物體外從而危害環境。磷的替代來源包括肉和骨粉，這些物質中的磷易于消化。而植酸酶也可將磷從植酸鹽中釋放出來，減少環境負荷，并降低飼料成本，因為動物對其他磷源的需求減少了。另外，植酸鹽還會與其他礦物質（如鋅、銅、鈣和鐵）螯合，從而降低了這些礦物質的利用率。植酸鹽還具有結合蛋白質的能力，進而可能降低氨基酸的消化率。在家禽中，植酸鹽還會抑制能量的利用率。植酸酶在家禽的肌胃和腺胃中發揮作用。在豬體內的主要作用部位是胃。最新一代的植酸酶可能會在胃的酸性環境中發揮作用。細菌植酸酶的初步發展提高了動物飼料的生物效能水平。最新一代的植酸酶具有更高的基質值，從而進一步提高了其利用率，這高度依賴于飼料組成和測試條件。同時，隨著人們對植酸酶作用方式的深入了解，未來我們將會得知植酸酶的更多優勢，并為生產者提供更多價值。

2木聚糖酶提高潛在的養分吸收

【關鍵詞】急性胰腺炎

急性胰腺炎(AP)是常見病，大多由于胰酶不正常被激活而導致胰腺本體出現自身消化，它不僅是胰腺的局部炎癥，而且病急，臨床表現及其病程、預后復雜多變，病死率及誤診率高，僅根據臨床表現及化驗檢查，就有30％～40％的病人被漏診［1］。為此，臨床上迫切需要提高早期診斷水平，制訂個體化的最佳治療模式，這就要求檢驗、影像技術不斷改進，合理使用各種治療藥物，加強重癥監護和營養支持，采用內外科相結合的綜合治療。在此，就急性胰腺炎的診斷和治療做一綜述。

1急性胰腺炎的診斷

1.1臨床表現

臨床表現仍然是AP診斷的重要依據，典型的臨床表現：（1）上腹痛：多為中上腹、左上腹持續性痛,餐后加重,膽石癥病人可有右上腹、中上腹痛。輕型病人3～5d后腹痛即可緩解,重癥者劇痛持續時間較長，發生腹膜炎時可引起全腹痛，少數年老體弱病人腹痛輕微,極少數病人可無腹痛而突然休克或昏迷;（2）發熱：輕者可無發熱或僅有低熱，高熱多為重型病例,發病初期，發熱多與急性炎性反應有關，后期多與繼發感染有關;（3）胃腸道反應：約有1／3～2／3病人有嘔吐，病情輕者僅有胃食管反流表現。由膽管感染、膽石癥引起的膽總管梗阻、腫大的胰頭壓迫膽總管、合并胰腺膿腫或胰腺假性囊腫壓迫膽總管及合并肝臟損害等情況也可出現黃疸;(4)低血壓及休克：是重癥胰腺炎(SAP)的重要體征，嘔吐頻繁者可有代謝性堿中毒;(5)累及其它重要臟器的癥狀：如由胸腔積液或并發ARDS引起的呼吸困難，腸麻痹、消化道出血、尿少、神志變化等。

1.2實驗室檢查

論文關鍵詞：卵黃抗體；仔豬腹瀉；研究進展

論文摘要：介紹了卵黃體抗研究的歷程和較其他抗體的優越性，闡述了卵黃抗體在治療仔豬腹瀉上的研究與應用。

1卵黃抗體研究歷程

卵黃抗體的研究始于19世紀末至20世紀初。1889年，Klemperer發現了卵黃中富含抗體。1934年，Jukes的試驗證明，母雞血清中的抗體可以轉移到卵黃中，從而為雛雞提供被動免疫保護。Patterson等（1962）試驗證實，相對于別的血漿蛋白，IgG被選擇性地轉運到卵泡中。1969年，Leslie和Clem將這種抗體命名為IgY。Roth等（1981）和Locken等（1983）提出并證實IgY轉運到卵泡的過程是受體依賴性的，認為卵巢的IgY受體使得血液中所有的IgY亞群被選擇性轉運到卵泡中。存在于禽卵黃中的免疫球蛋白主要是IgY，IgM、IgA和IgD含量極少。

雞IgY在功能上相當于哺乳動物IgG，但在結構上有所不同。相對于哺乳動物IgG，雞IgY也是由2條輕鏈和2條重鏈組成，但IgY重鏈沒有鉸鏈區，除可變區外，有4個恒定區。Warr等（1995）利用序列比較表明，雞IgY重鏈可變區Cv3、Cv4相當于哺乳動物IgG重鏈可變區Cy2、Cy3，而雞IgY重鏈可變區Cv2在哺乳動物IgG重鏈中被鉸鏈區取代。序列比較分析同樣發現，相對于其他免疫球蛋白IgG、IgM和IgA，雞IgY與哺乳動物IgE在系統發生學上更接近一些。雞IgY可分為IgY1、IgY2和IgY33個亞類，但卵黃中只有IgY1和IgY22種。

2卵黃抗體的優越性

【關鍵詞】二十碳五烯酸；HepG2細胞；細胞凋亡；線粒體

EffectsofeicosapentaenoicacidonapoptosisandmitochondriainHepG2cells

【Abstract】AIM:ToinvestigatethemitochondriachangesinhumanhepatoblastomaG2（HepG2）cellapoptosisinducedbyeicosapentaenoicacid(EPA).METHODS:IntheHepG2cellsincubatedwithEPAinvitro，cellapoptosiswasdetectedbyDNALadder,thechangesofmitochondriafunctionandquantityweredeterminedwithmethylthiazolyltetrazolium（MTT）colorimetricassayandfluorescenceprobe.TheexpressionandactivityofCaspase9weremeasuredinHepG2cellapoptosiswithWesternblottingandspecialsubstrate.RESULTS:Twentyfourhoursafterexposureto120μmol/LEPA，HepG2cellsdisplayedtheapoptosisbytheDNAladderpattern;thenumberofthemitochondriawasdecreased;theAvaluebytheMTTtestwas0.173±0.065,whichindicatedthatthefunctionofmitochondriawassignificantlydeclined(P<0.01);comparedwiththeuntreatedHepG2cells,theexpressionofCaspase9wasupregulatedandtheactivityofCaspase9wasincreasedto75.4±4.8inHepG2cellstreatedwithEPA(P<0.01).CONCLUSION:ThechangesofmitochondriamayplayagreatroleintheHepG2cellapoptosisinducedbyEPA.

【Keywords】eicosapentaenoicacid;HepG2cells;apoptosis;mitochondria

【摘要】目的：探討二十碳五烯酸（EPA）誘導人肝癌HepG2細胞凋亡及其對線粒體的影響.方法：HepG2細胞與經EPA處理后，DNALadder檢測細胞凋亡的發生，應用線粒體熒光探針和四唑鹽（MTT）比色法分析細胞線粒體數量和功能，應用免疫印跡法和特異性底物檢測HepG2細胞Caspase9蛋白酶的表達和活性.結果：終濃度為120μmol/LEPA處理HepG2細胞24h后，可以檢測到凋亡標志性的DNA梯形帶；細胞線粒體數量減少，MTT比色法檢測A值為0.173±0.065（P<0.01），提示線粒體功能降低；線粒體相關凋亡級聯反應的啟動分子Caspase9蛋白表達增加，Caspase9酶活性增強至75.4±4.8，與未經EPA處理HepG2細胞相比差異有統計學意義（P<0.01）.結論：EPA可能通過損傷線粒體誘導人肝癌HepG2細胞凋亡.

【關鍵詞】二十碳五烯酸；HepG2細胞；細胞凋亡；線粒體