卵黃抗體進展分析論文

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論文關鍵詞：卵黃抗體；仔豬腹瀉；研究進展

論文摘要：介紹了卵黃體抗研究的歷程和較其他抗體的優越性，闡述了卵黃抗體在治療仔豬腹瀉上的研究與應用。

1卵黃抗體研究歷程

卵黃抗體的研究始于19世紀末至20世紀初。1889年，Klemperer發現了卵黃中富含抗體。1934年，Jukes的試驗證明，母雞血清中的抗體可以轉移到卵黃中，從而為雛雞提供被動免疫保護。Patterson等（1962）試驗證實，相對于別的血漿蛋白，IgG被選擇性地轉運到卵泡中。1969年，Leslie和Clem將這種抗體命名為IgY。Roth等（1981）和Locken等（1983）提出并證實IgY轉運到卵泡的過程是受體依賴性的，認為卵巢的IgY受體使得血液中所有的IgY亞群被選擇性轉運到卵泡中。存在于禽卵黃中的免疫球蛋白主要是IgY，IgM、IgA和IgD含量極少。

雞IgY在功能上相當于哺乳動物IgG，但在結構上有所不同。相對于哺乳動物IgG，雞IgY也是由2條輕鏈和2條重鏈組成，但IgY重鏈沒有鉸鏈區，除可變區外，有4個恒定區。Warr等（1995）利用序列比較表明，雞IgY重鏈可變區Cv3、Cv4相當于哺乳動物IgG重鏈可變區Cy2、Cy3，而雞IgY重鏈可變區Cv2在哺乳動物IgG重鏈中被鉸鏈區取代。序列比較分析同樣發現，相對于其他免疫球蛋白IgG、IgM和IgA，雞IgY與哺乳動物IgE在系統發生學上更接近一些。雞IgY可分為IgY1、IgY2和IgY33個亞類，但卵黃中只有IgY1和IgY22種。

2卵黃抗體的優越性

（1）由于鳥類與哺乳類動物種系發生學的差距，鳥類更適于生產抗哺乳動物抗原的特異性抗體。卵黃抗體不會激發補體系統，不與抗哺乳動物抗原的抗體發生反應，不與哺乳動物和細菌的Fc受體結合，這在免疫診斷中具有重要意義（Lindmark等，1983；Guss等，1986；Boscato等，1988；Kapyaho等，1989；Larsson等，1990；Lindahl等，1992）。

（2）化學性質穩定。卵黃抗體作為一種具有生物活性的免疫球蛋白，在貯存、生產、加工、攝食及消化過程中保證其穩定性是非常關鍵的。多項試驗表明，雞IgY具有較好的穩定性，耐酸、耐堿、耐熱（Shimizu等，1992，1993；王炯等，1997；龍中兒等，1997；郭立君等，2001）。李春暉等（2002）研究了胃蛋白酶對抗狂犬病毒IgY活性的影響，結果表明：IgY經胃蛋白酶酶解24h后仍保持中和抗原的作用，其酶解片段也具有抗體活性。Hatta等（1993）研究了胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶對抗人輪狀病毒IgY活性的影響，結果表明：在pH2.0條件下，抗人輪狀病毒IgY在胃蛋白酶處理1h后活性幾乎全部喪失；但在pH4.0條件下的活性為91%，10h后仍有63%的活性；而胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶對抗人輪狀病毒IgY活性的影響不大。李學伍等（2000）試驗表明，胃液對干粉抗體效價影響不大。特別對幼齡動物而言，其胃內pH值不是很低的情況下，口服卵黃抗體不會遭到太大的破壞。Hatta等（1994）用體內試驗研究了鰻魚胃腸環境對卵黃抗體的影響，結果表明：口服抗體7h后在鰻魚腸內容物中仍可檢測得到高水平的抗體活性。此外，卵黃抗體還具有良好的加工和貯存性能。李學伍等（2000）將抗仔豬大腸桿菌卵黃抗體制成噴霧干燥粉，除了黏附在管壁上的抗體滴度稍有下降外，正常噴出的干粉抗體滴度與卵黃液一致。體外試驗表明，經噴霧干燥的含抗K88黏附素抗體的雞卵黃粉能有效阻礙ETECK88與豬小腸黏膜的黏附（Jin等，1998）。卵黃抗體較易保存，4℃條件下存放5年或室溫條件下存放6個月對抗體活性無明顯影響（Larsson等，1993）。王炯等（1997）報道，抗脊髓灰質炎病毒IgY在25℃室溫條件下保存半年，活性無明顯變化。

（3）產量高，成本低，便于規模化生產。卵黃中抗體濃度能長期維持在相當于甚至超過血清抗體濃度的水平上（BarJoseph，1980；Larsson等，1993；Hatta等，1993）。1只產蛋雞（以平均每周產蛋5~6枚，平均每枚雞蛋蛋黃大約15mL計算）所產蛋生產的抗體量相當于90~100mL血清或180~200mL血液中抗體的量，例如1只兔子1個月可提取IgG約200mg，而1個月1只蛋雞可從蛋中提取IgG2000mg以上。此外，在實際生產中，動物的采血不僅對動物本身是極大的應激，而且費時、費工，大規模生產是不切實際的，而利用蛋雞生產抗體要方便的多。

3卵黃抗體的應用

在現代規模化養豬生產中，特別是大規模、高密度飼養方式下，仔豬腹瀉是困擾養豬業的主要難題之一，給養豬業帶來了巨大的經濟損失。其中產腸毒素大腸桿菌（ETEC）是導致規模化豬場仔豬腹瀉的最主要的致病性大腸桿菌。ETEC感染性腹瀉主要發生于集約化養豬場及種豬場，個體飼養的豬雖然也有發生，但較少見。無明顯季節性，低溫潮濕和寒冷季節多發。

生產上多采用ETEC的多價疫苗免疫母豬，提高初乳中的抗體水平，以防治哺乳仔豬ETEC感染性腹瀉；但母乳中的抗體保護作用是有限和暫時的，在斷奶后短期內將消失，而高免血清價格昂貴。因此，應用抗ETEC卵黃抗體治療和預防新生和斷奶仔豬腹瀉的研究在國內外一直備受矚目。

在卵黃抗體的研究中，國內外所用方法不盡一致，國內多采用大腸桿菌菌苗免疫母雞，國外則采用大腸桿菌黏附素免疫。由于抗黏附素卵黃抗體在特異性、效果等方面優于抗菌體卵黃抗體（肖馳等，1998；Marquardt等，1999）。近年來，應用抗黏附素抗原特異性卵黃抗體預防和治療仔豬腹瀉已經取得了較大進展（Yokoyama等，1992；Erhard等，1996；Imberechts，1997；Marquardt等，1999）。Yokoyama等（1992）首次進行用卵黃抗體控制仔豬大腸桿菌病，他們將提純的ETECK88、K99和987P黏附素制成黏附素蛋白疫苗，胸部肌肉注射免疫產蛋母雞，抗體水平達到高效價后，收集雞蛋，分離和噴霧干燥卵黃抗體，對感染不同ETEC菌株的初生未食乳仔豬進行卵黃抗體治療，結果顯示，所有仔豬接受不同菌株感染后12h內均發生腹瀉；用效價為625和2500的抗體治療仔豬全部存活，而對照組仔豬死亡率超過80%。Erhard等（1996）、Zuniga等（1997）、Imberechts等（1997）和Marquardt等（1999）都進行了相關的研究，均得到了類似的結論。肖馳等（1998）分別制備了抗K88、K99、987p和F41菌毛抗原和菌體抗原卵黃抗體，結果表明，用菌毛蛋白疫苗得到的抗體甘露糖血凝抑制（MRHI）效價要高于菌體疫苗，前者防治仔豬腹瀉效果也明顯好于后者。Marquardt等（1999）報道，用菌毛蛋白疫苗免疫的抗體滴度為140000，而全菌體疫苗抗體滴度僅12000。

4參考文獻

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