審批報告范文
時間：2023-03-31 13:26:28
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篇1
我局立即派市場股和稽查隊的同志前往現場勘驗：該經營場所設立在*縣南外新*路“好吃街”西邊臨街的一層（約1800平方米），靠左為小區環路，靠右為新*路，正面為“好吃街”街面，該場所以下是地下停車場，屋頂以上一半是露天花園，另一半是居民住宅樓，頂部是整體全現澆水泥板。當時已在裝修，包間墻面隔斷已裝好。
我局認為，一是從地理位置看：該場所的正面為“好吃街”街面，靠左為小區環路，靠右為新*路，街對面為拆遷樓，擬在20*年拆遷，規劃為星級賓館，該場所屋頂一半是露天花園，另一半是居民住宅樓，不屬完全的居民區，其性質認定困難；二是從周邊環境看：“好吃街”的商業星羅棋布，餐飲休閑業十分繁華，業主先入為主，已投入了大量資金裝修，但會所屋頂居民戶要求停止審批呼聲強烈；三是從現狀看：*州市還沒有一家娛樂場所與居民住宅樓截然分開，該會所的裝修又在*州市文化局關于《市城區暫停審批新設立娛樂經營場所的公告》前進行的，情況特殊。
但為了依法行政，我們于20*年1月11日發出了暫停裝修通知書。20*年1月12日我局向附近居民住戶張貼了公示，公示要求有異議者7天之內書面向我局反映，期內只有一女同志前來說在此開辦娛樂場所不合適，沒有收到書面反映。20*年1月12日，*州市“好吃街”物業管理有限公司對各住戶張貼了承諾書，對噪聲問題作出鄭重承諾。同月19日縣環保局出具了同意建設意見書，同時市消防支隊出具了建筑內部裝修防火審核意見書。至今，我局并未同意開辦，而他們的裝修仍在繼續。
篇2
例1
加快推進行政審批制度改革是建設服務型、效能型、廉潔型政府的必由之路。黨的xx大明確要求，深化行政審批制度改革，繼續簡政放權，推動政府職能向創造良好發展環境、提供優質公共服務、維護社會公平正義轉變。作為一名來自區縣政府的人大代表，結合多年的工作實踐和體會，通過與部分省人大代表、相關專家進行交流，廣泛借鑒省外成功經驗，形成該調研報告。
一、加快推進四川行政審批制度改革迫在眉睫
(一)新形勢迫切需要加快推進行政審批制度改革。當前，四川同全國各地一樣，改革步入深水區和攻堅期。就政府自身建設而言，改革必須破除部門既得權力和利益格局形成的阻力，必須改變政府權力部門化、部門權力利益化的現象。政府部門的權力集中在行政審批領域。順應群眾的期盼和要求，必須加快推進行政審批制度改革，從而不斷提高廣大公民和法人的滿意度。
(二)新目標迫切需要加快推進行政審批制度改革。四川省第十次黨代會明確提出，今后五年要努力實現三個翻番、五個提升的奮斗目標。目標催人奮進，關鍵在于加快發展。四川要加快發展，重點是抓招商、增投資、上項目。只有栽下梧桐樹，才能引來金鳳凰只有優化服務，打造一流的政務環境，才能實現四川的快速發展。在制度上，就需要深入推進行政審批制度改革，通過簡化審批流程、建立健全監督機制，進一步規范行政許可、審批權限，改進工作作風，提升工作效率。
(三)新成果迫切需要加快推進行政審批制度改革。實施行政審批制度改革以來，四川雖偏居西部，但通過各級各部門的齊心協力，取得較為可喜的成果。2016行政審批制度改革調研報告2016行政審批制度改革調研報告。2016年以來，全省先后10次對行政審批項目進行清理，取消和調整了一大批行政審批項目，省級行政審批項目由2906項減少到478項。同時，規范了審批行為,優化了審批程序，行政效率有所提高。但改革如逆水行舟，不進則退，當前我們既要鞏固來之不易的成果，更要乘勝追擊，擴大戰果，因此不能須臾懈怠，不能半點停頓，否則可能前功盡棄。
二、四川行政審批制度改革需要解決的突出問題
(一)行政審批的項目有待進一步減少。調查發現，不少企業認為：相關政府部門雖然大幅削減了審批項目的數量，但多數是監管風險高或不收費的項目;對于涉及經濟事務的可收費項目，卻采取化零為整的方式加以保留。因此，減少行政審批的數量與政務服務水平的提升程度不成正比，審批項目仍有進一步縮減的空間。
(二)行政審批的流程有待進一步優化。一些政府部門對審批流程的改進缺乏系統性和整體性，缺乏與相關平級部門的溝通和協調，只是對本部門的行政審批制度作一些局部的改良。由于缺乏完善的制度設計，一些部門仍然存在審批的前置條件過多過細;審批流程重復、阻塞。以市政項目為例，在各項工作順利的情況下，從立項、用地預審、選址、環評、節能、可研、規劃許可、土地、消防、設計審批、概預算審批等需16個環節219個工作日，還未計入項目本身需要的勘察、規劃、設計、其它資料準備、方案圖紙修改和專題論證研究的時間。由于項目審批一環扣一環，若某一階段不批，則下一階段就無法實施，項目單位開展工作相當被動。更嚴重的是，部分審批甚至相互前置。例如：新上企業在生產經營前，應在發改部門進行備案登記，根據規定，辦理備案登記證時需要提供工商營業執照，而辦理工商營業執照需要環評批復意見，辦理環評批復又需要提供備案登記證，發改、工商、環保三個部門的審批事項互為前置，又都有相關政策依據，因此無法辦理相關證照，更無法投產運行。據了解，某地來川的客商投資一個項目，相關部門的公章蓋了80多個。最后，該客商感慨四川是一個休閑的天府，卻不是一個干事創業的好地方。此例子雖不一定具有代表性，但從一個側面反映了審批流程的繁雜以及效能的低下。
(三)行政審批的授權有待進一步到位。一些地方的政務服務中心存在定位不明確，管理權限和職責不到位，對審批窗口授權不充分，不能實現窗口接件與部門審批的前后動，當場辦結率低，甚至變成單純的接件窗口。
(四)行政審批的監管有待進一步加強。目前一些政府部門只審批不監管，或重審批輕監管;有的監管手段單一，監管不到位;甚至有個別人受利益驅動濫用監管權。同時，雖然有些政府部門出臺了行政審批的責任追究制度，但缺乏落實審批責任制度的可操作的程序和具體行動。公眾反映最強烈、最難解決的3個難題拖、 卡、推現象便屢禁不絕。
三、省外成功經驗
(一)浙江省行政審批向下放權。20xx年6月27日，浙江省委辦公廳、省政府辦公廳出臺了《關于加強服務保障改善發展環境，大力推進浙江舟山群島新區建設和XX市國際貿易綜合改革試點的實施意見》。意見要求，進一步簡化和規范審批程序，壓縮辦事時限，做到能放就放、能減則減、能快則快。20xx年9月24日，浙江省政府出臺《關于下放部分省級行政審批和管理事項的通知》，省政府及其有關部門根據各地經濟社會發展需要，以依法交辦、委托等方式，向各設區市政府及其有關部門或縣(市、區)政府及其有關部門下放406項省級行政審批和管理權限。
(二)海南省行政審批實行三集中。海南省政務服務中心實行審批事項、審批權力、審批人員三集中，其核心是審批權的集中。通過集中審批權，并配合監督制衡機制，海南實現了對行政審批事項和審批權的有序管理，提高了依法行政和政務服務水平。以海南省住建廳為例，該廳有48項審批事項，以前分散在7個內設處室，由3位領導分管，涉及53位審批工作人員，使用7枚行政審批專用章進行審批。進入省政務服務中心后，改為11人一個窗口對外，首席代表全權審批，只需1枚審批專用章。
(三)廣東省行政審批先行先試。國務院批準廣東行政審批制度改革先行先試，其主要思路是以取消為主、轉移下放為輔，寬準入、嚴監管，其獨特處在于部分中央設定的審批事項經向上匯報爭取后也被改革掉。20xx年7月17日，廣東省公布了省政府20xx年行政審批制度改革事項第一批目錄，全部調整事項達到354 項，占省級政府現有實際審批項目的1/3以上。其中，明確取消的有179項、轉移的有55項、下放的有115項、委托管理的有5項。20xx年11月23 日，印發《廣東省十二五時期深化行政審批制度改革先行先試方案》，提出到20xx年，省內各級行政審批事項壓減40%以上，辦結時限總體縮短50%左右，網上審批辦理率90%。
四、加快推進四川行政審批制度改革的具體建議
(一)科學確定目標。力爭通過4-5年努力，實現西部地區透明度最高、效率最高和收費最少的目標。為了實現這一目標，省級相關部門有必要明確責任領導、責任處室，在制定本單位行政審批制度改革路線圖的基礎上，科學確定年度工作目標。
(二)設定基本原則。一是效率優先原則。要按照規矩服從效率、權限服從效果的要求，加大行政審批改革力度，下大力氣削減審批事項，優化經濟社會發展環境，加快推進全省在科學發展的軌道上實現跨越提升。二是注意中立原則。建議由省編辦這個相對超脫的部門牽頭審批改革，其他同屬相對超脫的省委政研室、省政府研究室、省社科院協助，從而破除核心權力部門自我改革難題。三是社會協同原則。建議廣泛召開企業、社會組織、行業專家座談會，廣泛發放調查問卷表，詳細聽取審批行為相對人的意見，打好一場行政審批制度改革的人民戰爭。
(三)選擇合適路徑。
1. 做好省級層面的頂層設計。對于依據省人大制定的有關法規而設立的相關審批，由于經濟社會發展經論證不合理的，建議省人大修訂有關法規，從而取消相關行政審批，為加快發展清除障礙。同時，建議省政府在加強調研論證的基礎上，按照系統性、整體性、協同性的原則，盡快出臺簡化審批程序、提高行政審批效率的文件體系，如：《關于進一步改善投資環境簡化建設項目審批程序提高行政效能的意見》、《關于優化政府投資建設項目、工業項目、旅游項目、房地產項目等四類建設項目聯合審批流程實施方案》、《關于簡化建設項目立項規劃環評審批程序的實施方案》、《關于下放或委托市(州)審批投資建設項目有關審批事項的實施意見》、《關于重點建設項目用地保障機制的實施意見》等。
2. 突出重點深化改革。根據中央部署，結合四川實際，著力在三大領域推進行政審批制度改革。一是投資領域。與投資審批相關的企業登記注冊，目前前置審批項目多、環節多。因此，建議改革企業登記審批制度，最大限度地激發企業的活力和創造力。二是社會事業領域。現在以審批代替服務的現象、政府大包大攬的現象仍普遍存在。對此，一方面要下決心減少或下放審批權限;另一方面，要積極引導社會組織健康有序發展，逐步把部分政府公共服務和社會管理職能轉移給成熟的社會組織。三是非行政許可審批領域。按照《行政許可法》規定，臨時性行政許可有效期只有1年，超過1年仍需實施的，必須上升到法規，如果1年之內沒有上升到法規，就自動取消。
3. 再造審批辦理流程。一是突出高效化，全面優化審批流程，做到減事項、減流程，特別是著力消除部分審批事項相互前置的羈絆。二是突出便民化，分領域編制業務手冊和辦事指南，內容涉及辦理依據、辦理機構、審批條件、審批數量、申請材料等，切實方便企業辦事。三是突出集中化，建議借鑒海南模式優化省級部門機構設置，實行三集中。四是突出標準化，全面實行陽光審批，凡工作流程中不涉及的事項和材料，不得要求企業或相關組織提供。
4. 強化審批監管。加快創新和強化政府監管機制，建議省級各部門針對每一項取消、下放、轉移的事項，緊密結合社會信用體系和市場監管體系建設，逐一制定相應的具體監管辦法，充分發揮各類社會主體的作用，著力構建行政管理、社會自治和公眾參與相結合的綜合監管體系，防止出現管理真空。
(四)強化保障措施。
1. 強化組織領導。建議省政府成立高規格的領導小組，建立工作例會制度，及時研究行政審批制度改革工作中遇到的困難和問題。有審批權的省級部門主要領導要帶頭抓，帶頭深入基層、深入企業、深入群眾調查研究，切實擺脫固有利益的束縛，還權于社會、還權于市場，換來四川加快發展的無限生機。
2.強化工作監督。省人大每年組織對行政審批制度改革的視察活動，聽取省政府的工作報告，切實加強法律監督和工作監督，不斷把改革推向深入。
3.強化技術保障。充分發揮現代信息技術的作用，加強電子政務建設，著力建設全川統一使用的通用審批系統，建立省、市、縣三級聯網審批服務平臺，拓展完善網上審批服務大廳的功能，抓好人員培訓，全面推行網上審批，促進審批提速提效。
4.強化社會評價。堅持開門搞改革，建議由省統計局、省監察局牽頭，在廣泛征求民意的基礎上建立四川省行政審批制度改革公眾評價體系，完善行政審批績效考核制度，強化效能問責，做到審批提速不越軌、加快不違規，確保人民群眾放心滿意。
例2
為進一步深化行政審批制度的改革，創新大河西先導區行政審批管理及運行機制，提高政府工作的服務質量，根據市委、市政府對大河西先導區行政審批試點改革的總體要求，現就行政審批流程改革工作提出如下實施方案。
一、改革目標
通過行政審批流程再造，力爭審批環節明顯減少、審批行為得到規范、審批效率顯著提高、審批監督機制進一步強化，構建科學、規范、透明、高效的行政審批快速通道。
二、審批原則
(一)集中原則。一是集中受理行政許可申報，先導區管委會設置一個專門的政務窗口，統一受理44項行政許可事項的報批卷宗，統一對外發卷。二是集中統征土地，先導區范圍內征用土地，由先導區土地儲備(交易)中心統一進行。三是涉及項目建設的行政事業性稅費集中在三個環節收取，即所有土地稅費統一在土地呈報批準后、用地審批發證之前收取，商品房項目報建費統一在商品房預售許可前收取(非商品房則仍在建設工程規劃許可前收取)，房產契稅統一在產權證發放前收取。
(二)公開原則。先導區所有行政許可事項的工作流程、項目申報條件、行政許可時限、辦理責任人等內容將全部向社會公布，為辦事人創造一個公開透明的辦事環境。
(三)精減原則。先導區管委會將履行11個市級行政審批部門44項行政許可或審批工作職能。先導區建設項目審批以規劃審批為主線，國土、建設、環保、房產等審批為輔線，其報建總時限利用大部委辦公的平臺，通過各審批環節的整合、并聯，原體外環節的納入、簡化，統籌利用各部門資源來予以壓縮，而并非簡單的壓縮某個辦事環節時限，并力爭單個審批項目報建總時限在原各部門承諾的總審批時限基礎上再縮短50%。
(四)便民原則。為減少當事人往返行政審批機關的次數，降低項目報批成本，對當事人申報的行政許可事項所必需的資料，窗口工作人員須一次性告知。根據當事人的自主選擇，對所有行政報批事項均可由先導區土地儲備(交易)中心實行全程，跟蹤服務。
(五)廉潔原則。在行政許可過程中，明確界定各級行政審批人員的職能職責，保持政策的剛性與連續性，實行電子化辦公，建立部門之間、處室之間相互監督辦事機制，健全社會監督機制和效能考核機制，真正做到精減廉潔，公開便民。
三、土地征用、轉用、供應基本流程
(一)土地征用、轉用、供地分三個階段進行，即用地預審，土地征用、轉用報批，土地供應。先導區所有用地均由先導區管委會土地儲備(交易)中心【下稱儲備(交易)中心】統一征、轉，統一儲備，統一安置補償，統一供地。
1、用地預審。由儲備(交易)中心準備下列資料：
(1) 用地、規劃申請表
(2) 選址意見書(由國土規劃部規劃處提供)、立項文件(由項目建設部提供)或土地開發利用方案【省級審批部門有要求的即需要該項資料】
(3) 1：500至1：2016地形圖
(4) 土地規劃調整批文(若需調整規劃的)
(5) 其他相關資料
報國土規劃部國土處審查，由國土處組織本部規劃處、環境資源處進行用地預審，主要審查是否符合土地利用規劃、是否有農用地轉用計劃、是否符合環保的要求、是否屬禁止、限制供地范圍(項目用地)等，審查通過出具預審報告，規劃條件，劃定規劃定點藍線。
2、土地征用、轉用報批。由儲備(交易)中心準備下列資料：
(1) 用地預審階段的所有資料及預審報告
(2) 地籍調查表、土地權屬匯總表及擬占土地權屬證明(國土分局承擔)
(3) 勘測定界技術報告和勘測定界圖、土地利用現狀圖
(4) 預征土地公告(國土分局承擔)
(5) 聽證筆錄(有聽證要求的、國土分局承擔)
(6) 補充耕地驗收文件(占用耕地的)
(7) 相關部門意見
(8) 其他相關資料
報國土規劃部審查，規劃處審查合格發《規劃用地許可證》，國土處審查合格劃調查紅線，編制一書四方案，環境資源處審查建設項目環境影響情況及壓覆礦產、地質災害等情況，各處審查合格簽署意見后上報先導區管委會、省、國務院審批。
3、土地供應。上述地塊經省、國務院審查批準后，交土地儲備(交易)中心統一儲備。根據土地開發進度，由儲備(交易)中心協調區級政府搞好土地安置補償工作。
4、土地劃撥。地塊符合劃撥條件的，由項目申請人準備下列資料：
(1) 用地申請表
(2) 選址意見書(由國土規劃部規劃處提供)、立項文件(由項目建設部提供)
(3) 1：500至1：2016(下基層調研報告)地形圖、紅線圖
(4) 測量測繪成果表
(5) 單位資質證書、工商營業執照
(6) 法人委托書原件
(7) 法定代表人及人身份證復印件
(8) 先導區管委會同意土地劃撥批文
(9) 其他相關資料
報國土規劃部國土處審查并上報先導區管委會審批后發劃撥決定書及劃撥土地紅線圖。
5、土地出讓。地塊進行招、拍、掛出讓，由項目建設部就項目準入、投資強度等問題提出審核意見，由國土規劃部規劃處盡可能做好該地塊的規劃要點及控制性詳規。規劃一旦確定即不再變更，土地招、拍、掛出讓后，不得改變土地性質，不得修改容積率，不得減少公共綠地，不得占用公共配套設施用地。特殊情況確需變更的，由用地人將土地交回管委會重新招、拍、掛。儲備(交易)中心根據規劃編制土地出讓方案，測算土地出讓金，測算土地供應后項目建設過程中所有稅費，一并列入土地成本，報國土規劃部國土處審批后，上報先導區管委會批準，由儲備(交易)中心組織招、拍、掛出讓，項目用地單位取得出讓土地后在建設過程中不再向行政管理部門繳納任何稅費。
項目用地單位通過劃撥、出讓途徑取得土地使用權，交清所有稅費后，準備相關資料報國土處審查，核發《土地使用證》。
四、項目建設報批、預售、竣工驗收
(一)項目建設報批分五個階段，即核發建設用地規劃許可證，建設工程設計方案審查，核發建設工程規劃許可證(建筑工程施工許可證)，商品房預售，竣工驗收。
1、核發建設用地規劃許可證。由項目建設人準備下列資料：
(1) 建設用地規劃申請表
(2) 土地權屬資料(紅線圖、土地使用證、土地出讓合同等)
(3) 總平面圖
(4) 建設項目環境影響評價文件
經國土規劃部規劃處審查總平面圖，環境資源處審查建設項目環境影響評價文件后，規劃處發《建設用地規劃許可證》。
2、建設工程設計方案審查。由項目建設人準備下列資料：
(1) 上一步驟中所有資料
(2) 相關設計文件和圖紙
由建筑房產處牽頭，規劃處、環境資源處參與，審查合格后簽發批復文件。
3、核發建設工程規劃許可證(建筑工程施工許可證)。核發兩證分別由規劃處、建筑房產處牽頭，環境資源處參與，同步進行。
4、核發《建設工程規劃許可證》。由項目建設人準備各類設計圖件報規劃處審查，規劃處審查上述資料，并組織相關部門進行聯合審查，各部門同意，簽署意見后，核發《建設工程規劃許可證》。
5、核發《建筑工程施工許可證》。國家投資項目及國有(控股)企業先由項目建設部按照公開、公平、透明的原則，社會化運作模式組織工程招投標，工程監理招投標。再由項目建設人準備下列資料：
(1) 施工項目報批表
(2) 中標通知書(非公有制企業不須提供)
(3) 施工合同、監理合同
(4) 農民工工資保障金核實表及建筑工地計劃生育管理登記表
(5) 建設工程施工圖技術審查報告
由國土規劃部建筑房產處審查上述資料，發《建筑工程施工許可證》。
6、商品房預售。由項目建設人準備以下資料：
(1) 房地產企業《營業執照》和《資質證書》
(2) 土地使用權證
(3) 建設用地規劃許可證
(4) 建設工程規劃許可證
(5) 建筑工程施工許可證
(6) 審查批準的報建圖
(7) 工程進度證明材料
(8) 商業房預售及物業管理方案
篇3
一、基本情況
交通管理行政審批事項分為公路路政審批和道路運輸審批兩大類，具體分別由縣地方公路管理站和縣交通管理總站組織實施。
（一）公路路政行政審批事項有行政許可12項，沒有非行政許可審批和公共服務審批事項。公路路政承擔行政審批事項有：
1.占用、挖掘公路或者使公路改線的許可。
2.跨越、穿越公路修建橋梁、渡槽或者架設、埋設管線、電纜等設施的許可。
3.在公路用地范圍內架設、埋設管道、電纜等設施的許可。
4.利用公路橋梁、公路隧道、涵洞鋪設電纜等設施的許可。
5.利用跨越公路的設施懸掛非公路標志的許可。
6.在公路上增設或者改造平面交叉道口的許可。
7.在公路兩側建筑控制區埋設管（桿）線、電纜等設施的許可。
8.更新砍伐公路用地上的樹木的許可。
9.在公路用地范圍內設置非公路標志的許可。
10.鐵輪車、履帶車或其他可能損害公路路面的機具需要在公路上行駛的許可。
11.超過公路、公路橋梁、公路隧道或者汽車渡船的限載、限高、限寬、限長標準的車輛，確需在公路上行駛的許可。
12.在中型以上公路橋梁跨越的河道上下游各1000米范圍內抽取地下水、架設浮橋以及修建其他危及公路橋梁安全的設施的許可。
（二）道路、水路運輸行政審批事項有行政許可6項，沒有非行政許可審批和公共服務審批事項。道路、水路運輸承擔行政審批事項有：
1、道路客運站經營許可。
2、道路旅客運輸經營許可。
3、道路機動車維修經營許可。
4、機動車駕駛培訓經營許可。
5、道路貨運站（場）經營許可。
6、道路貨物運輸經營許可。
7、水路運輸經營許可。
二、運行情況
1.在信息公開方面?？h公路站、縣交管站對所承擔的行政許可項目向社會公開、并重新進行流程再造；有關審批事項、依據、數量、期限以及需要提交的全部材料目錄和申請書示范文本等也逐項分類對外公示；依法依規公開準予行政許可決定。
2.在實施程序方面。實行了“一個窗口對外”制度；切實履行了“一次性告知制”，有關印章和書面憑證使用符合法律規定，在實施審批項目中沒有增設違反上位法的其他條件，依法依程序實施行政審批，對有關需要依法舉行聽證的事項進行聽證，行政許可變更與延續符合法律規定，辦理期限符合承諾期限要求，在實施行政許可程序中符合法律特別規定，嚴格依法告知救濟渠道和方式，對行政審批案卷立卷歸檔。
3.在許可費用方面。公路運輸收費項目和標準是《關于調整我省占用損壞公路路產賠補償費標準的通知》,并依法公開,對實施行政許可依法收取費用,收取的費用全部上繳國庫,在對行政許可事項進行監督檢查中不收取任何費用。道路運輸許可不收取任何費用。
4.在監督檢查方面。嚴格依法履行監督檢查職能，并建立健全相關監督檢查制度；許可核實工作人員持有效行政執法證件；撤銷、注銷行政許可符合法律規定；對被許可人違法從事行政許可事項的活動進行依法予以處理；對監督檢查案卷進行分類、整理、立卷歸檔。
三、清理精簡意見建議
篇4
政收費項目進行了清理，在方便企業、居民辦事方面取得了一定成效，服務經濟社會發展、服務企業、服務市民群眾的水平明顯提高。但在實際運作中，還存在著許多問題。為此，我們進行深入思考，借鑒先進地區經驗，結合我縣實際，探索我縣行政審批制度改革的一些舉措，供領導參考。
一、基本情況
審批中心為各窗口統一制作了審批流程圖，印發了審批事項告知單和服務指南，實施了服務承諾八項制度，推進了政務公開，方便了辦事群眾。六是加強對入駐部門和窗口工作人員的考核監督。按市領導要求，借鑒南方經驗，已將各部門入駐審批中心情況納入全縣重點工作目標管理考核范圍，并占一定的分值;在發展黨員、評先、評優、評模、選拔后備干部、提拔干部等方面，應將審批中心單列并在中心進行考核，使表現突出的窗口工作人員能得到獎勵、提拔和重用。七是貫徹落實好全市行政審批服務工作會議精神。全市行政審批服務工作會議之后，審批中心按照上級會議要求，迅速開展工作。中心領導多次深入有關入駐部門，與部門主要領導進行溝通、協商，就審批項目進駐、人員落實、電腦配置等問題研究解決辦法，在審批中心的積極運作下，有些單位近期將審批項目納入審批服務大廳集中辦理。八是發揮審批中心平臺作用，切實加大招商引資工作力度。經過我們確定專人、多方尋找門路、積極運作，已初步與長春一家客商達成投資協議，并在烏鴉泡鎮建一木材加工企業，投資金額200萬元。九是認真總結并在全市會議上介紹了我縣審批中心建設經驗。我縣是哈市各縣(市)中首家正式揭牌對外辦公的行政審批服務中心，市政府有關領導認為**縣委、縣政府對審批中心建設高度重視，起步早、進度快，工作推進力度大、效果明顯。在今年全市行政審批服務工作會議上，市領導在講話中對我縣工作給予了充分肯定，我縣《依法行政 便民利商 開啟行政審批綠色通道》的工作經驗在會上作了交流。
二、存在的主要問題
目前我縣行政審批改革工作的整體情況而言，雖然運行較為平穩，但與先進發達地區相比，與我縣經濟發展相比，與投資者、居民的期望相比，與縣委、縣政府的要求相比，還存在較大差距，致使改革缺乏一定的深度和廣度，多數企業和民眾對行政收費項目之多、手續繁雜問題意見較大，主要表現在以下幾個方面：
1、少數單位認識不夠到位，缺乏改革熱情。少數單位負責人大局意識、組織紀律意識淡薄，過多地強調困難性、習慣性，對縣委、縣政府有關審批項目進駐和辦理政策、規定執行不力、落實不到位。
2、行政服務中心管理的職能不強。行政服務中心與各窗口單位只是一種協調服務的關系，雖然縣委、縣政府賦予了一定的管理權力，但實際上很難運用到位。
3、前店后坊現象仍然存在。有些單位沒有在中心設立窗口進行集中辦公、公開辦事。少數單位為保住自身的審批權力，對一些重要的審批事項仍未做到應進盡進，存在小權進、大權不進，將重要的服務項目、關鍵的辦事環節，仍放在本單位辦理，把行政服務中心窗口作為收發室，兩頭受理、收費標準不一的現象依然存在，嚴重弱化了中心的服務功能和服務質量。如地稅部門在行政服務中心設立了窗口，而國稅卻沒有。地稅進中心，但稅務登記卻沒有進。
4、項目設置不合理，綜合功能發
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一、加強思想作風建設，牢固樹立服務意識
切實以《行政許可法》為依據，以改革創新為動力，以“兩集中、兩到位”為主題，構建“審管分離、權責掛鉤”和“審批一條龍、服務一站式”的行政審批工作新機制?？剖胰藛T能堅持以正確的思想為先導，不斷地加強政治理論學習，牢固樹立為民辦事、為企業服務的意識。在全年工作中，我們始終把提供優質服務放在首位，耐心解答電話及現場的各項業務咨詢。認真辦理各項審批工作事務，真正做到以 “便民、高效、廉潔，規范”為標準，努力提高工作能力，提高服務水平，得到了廣大服務對象及相關群眾的普遍贊譽。
二、強化理論學習，提高業務理論水平
窗口工作是直接面對群眾的前沿崗位，業務的熟練與精通將直接影響到辦事的效率乃至窗口單位的形象。為此，我們在工作有側重和分工的基礎上，嚴格按中心規定實行AB崗工作制度，不因人員的變動而耽擱工作。同時狠抓科室人員的日常學習，始終把業務理論的學習放在工作首位，尤其對政策性及法律性要求強的有關業務，我們始終能保持前后方的學習和交流，切實形成科室內部人員以及與其他科室人員之間的相互學習、虛心請教的良好氛圍，不斷提高自身的素質和修養。全年工作中我們從未發生因業務能力的不足和人員變動而拖延、緩辦辦件的事件發生。并遇有重大事務及時向匯報，確保了各項審批和轉報工作順暢有序地進行。
三、強化作風建設，恪守行業規范
我科室始終把“以服務企業、方便群眾、奉獻社會”作為自己在窗口工作的職業觀念和宗旨。愛崗敬業，積極履行崗位職責。一年來，我們本著“便民、高效、廉潔、規范”的宗旨，用最大的熱情和友情為群眾服務。因此，在窗口工作時，我科室始終把“打造誠信窗口，爭做文明職工”作為我窗口工作的最高準則。工作中我們嚴格按照辦事程序辦理各項業務，杜絕了各種吃、拿、卡、要的情況發生，真正做到“情為民所系，權為民所用”，使前來辦事的群眾有如沐春風之感。此外，我局領導始終致力于行政審批的改革，在水利局和行政審批服務中心的共同努力下，局領導對行政審批科下放了審批權限、進行了不斷的提速。工作中我們始終堅持想群眾所想，急群眾之所急，如一些村級二三產項目、涉河基礎建設項目等，因特殊的原因、時間限制和涉及相關部門的有關業務時，為提高辦事效率，方便前來辦事的群眾，我們主動提供初步的規劃河道岸線以及相應的意見，讓群眾能在規定的時限內辦理相關部門的手續。全年工作中我們沒有發生一起因服務不到位而耽擱企業業務，給企業帶來損失的事件發生。
四、規范受理辦結，爭創一流窗口
五、嚴格遵守各項規章制度，充分展示水利服務風貌
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市民管辦
接到關于對全市2008年以后取消和調整行政審批事項落實情況進行專項檢查和清理行政監管事項的通知以后，我局領導高度重視，按照《關于對全市2008年以后取消和調整行政審批事項落實情況進行專項檢查和清理行政監管事項的工作方案》的要求，對我局2008年以后取消和調整行政審批事項和行政監管事項中有關社會組織的事項認真進行了梳理和自查，現將有關情況匯報如下：
一、 目前尚保留的行政審批事項：1、申請籌備成立社團審查（行政許可）2、社會團體及其分支機構、代表機構成立、設立、變更、注銷登記（行政許可）；3、民辦非企業單位成立、變更、注銷登記（行政許可）
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***省衛生廳中醫藥管理局：
我院創建于1987年10月，二十多年來，在省、市、縣衛生行政部門的重視支持下，突出中醫特色，重視?？茖２〗ㄔO，狠抓人才培養，醫院發展規模和診療水平得到了很大提高，已發展成為一所集醫療、科研、教學為一體的綜合性二級乙等中醫醫院。全院現有職工104人，其中副主任醫師8人，中級職稱21人，開設病床100張，有臨床科室13個，醫技科室7個，開設骨傷科、婦產科、外科、內兒科病區4個，有CT、彩超、500mAx 光機C型臂等大型醫療器械 68臺件。2007年接診門急診病人5萬多人次，收住院病人2300多例，業務收入879萬元。我院骨傷科創建于1987年10月，經過二十多年努力，已形成了具有一定中醫特色優勢和診療體系的特色?？疲?996年等級醫院和1998年全國農村中醫工作先進縣建設達標驗收中，骨傷科作為重點專科通過了上級驗收；2004年12月被***市衛生局驗收命名為“市級重點中醫?？啤?。為了進一步加大我院重點科室骨傷科建設力度，特申請其四批省級重點中醫藥?？平ㄔO單位，現根據《***省重點中醫專科（專病）建設檢查標準》，將自查結果報告如下：
一、 科室規模（5分，實得分4分）：
骨傷科設有病床20張，有醫護人員13個，其中中醫骨傷科副主任醫師1名，主治醫師1名，初級職稱人員9名，其比例為1：1：9。
二、?？茦I務量（20分，實得分10.7分）：
我院骨傷科年接診門（即）病人5800多人次，收住院病人368例，年業務收入102萬元，專科門診、住院人次占全院門診、住院人次的比例分別為11.6%和16%，門診病人比例低3.4%，扣3.4分；其中外縣、市門診、出院病人分別占專科病人的比例為14.3%和12.5%，扣2.5分；?？崎T診住院收入合計為102.4萬元，占全院業務收入的11.65%。
三、技術質量（43分，實得分33.5分）：
1.醫療指標：門診中醫治療率90%，住院病人中西醫結合治療率95%，入院三日確診率95%，入、出院診斷符合率98%，治愈好轉率88.5%，比標準要求低7.5%，扣1.5分，病床使用率49.3%，比標準要求低35.7%，扣3分；甲級病歷率93.8%，本可制劑收入占藥品收入的13.52%，扣3分。
2.本?？婆R床二級臨床科室有2個，骨傷科有頸肩腰腿痛科、牽引理療室、按摩室，有甲級單病種1個，乙級2個，扣1分。
3.能接受同級中醫機構或其它醫院在專科方面的會診、轉診。
4.能運用中醫傳統療法診療該?？品秶某Ｒ姴?、疑難病，在治療腰椎間盤突出癥，頸椎病等方面已形成了較為完整的診療常規。
5.?？浦苿汗莻片F有臨床較好的?？浦苿?，神經痛丸、接骨膠囊、活絡定痛膏、生肌玉紅膏、上肢洗劑、下肢洗劑，近3年未開發新制劑，扣1分。
6.護理技術：能開展整體護理和?？铺厥庾o理；能開展中醫傳統的護理項目，如針灸、推拿、按摩、拔火罐、中藥換藥、中藥坐?。蛔o理技術操作合格率≥95%；五種護理文件書寫合格率≥96%，能開展單病種護理。
四、科研學術水平（14分，實得分12分）：
1.每年進修培訓2名以上學科帶頭人，每年進行學術講座8場次；
2.能承擔中專以上學生的臨床實習和培訓基層中醫?？迫瞬诺膶W習任務，但住院醫師規范化培訓無記錄。
3.近三年來有地廳級以上新成果及新技術，引進新技術3項，無地廳級以上新成果扣2分。
4.每年有?？品矫娴慕涷灴偨Y，近3年在國家級及省級刊物4篇。
五、醫療設備(6分，實得分5分)
病區設備每年每床單元設施和?？圃O備能達到分級管理標準要求，能適應專科需要和專科技術發展的要求，每床單元設備平均值在1萬元以上設備完好率90%；C型臂常發生故障。
六、管理（12分，實得分9分）：
有重點中醫專科的發展規劃和年度實施計劃及總結，有?？平涃M；有?？漆t療文件管理、考評制度，并對醫護質量進行評估，實行質量監控；有?？茖I委員會組織，進行有專科特色的學術檢驗研究、總結、推廣工作；建立了三個以上單位參加的學術網絡，但開展活動不夠扣1分；科內有計算機2臺，但相關程序不配套扣2分。
綜上所述，根據《***省重點中醫藥建設檢查標準》自查，結果得分74.2分，特申請***省第四批重點中醫藥?？平ㄔO單位，望審批為盼！
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一、基本情況
我市第三批深入學習實踐科學發展觀活動自2009年
二、主要做法
（二）立足實際，深入分析檢查。一是開展三項活動，找準查透問題。廣泛開展“調查征求意見”活動，通過集中座談、實地訪談、網絡論談等形式，聽取民聲，吸納民意；認真開展“縣鄉村干部大走訪”活動，組織黨員干部深入村組農戶、田間地頭、企業學校，宣傳惠農政策，破解發展難題；深入開展“科學發展大家談”活動，主動邀請“兩代表一委員”、基層群眾、服務對象等進行“零距離”溝通交流，進一步找問題、挖根源、謀發展。二是落實三項要求，開好民主生活會。各參學單位把民主生活會和組織生活會搬到村組院落、田間地頭、企業生產一線召開，讓黨員干部與群眾面對面交流，主動接受群眾的監督和評議；單位主要負責同志帶頭談心交心，深挖思想根源，深刻分析檢查；廣大黨員干部堅持說真話、講實情，積極亮言亮丑，確保了民主生活會的質量和效果。三是采取三項措施，形成分析檢查報告。在起草撰寫分析檢查報告前，各參學單位充分運用征求意見和民主生活會成果，對查擺出來的問題逐一進行梳理歸類，切實做到找得準、梳理清、不漏項；為高質量撰寫形成分析檢查報告，各參學單位主要領導親自指導、參與報告的起草，市活動辦采取以會代訓的形式，進一步細化內容，統一標準，明確要求，市委指導檢查組逐一對參學單位分析檢查報告進行嚴格審核；分析檢查報告形成后，各參學單位通過深入基層走訪座談、設置公示欄、開設網上論壇等方式，認真組織群眾評議，反復修改完善，努力使分析檢查報告切合實際、長效管用。
（三）完善措施，大力整改落實。各參學單位圍繞查擺出的涉及思想觀念、工作作風、結構調整、環境衛生、社會事業、改善民生和基層黨建等20個方面200多項影響科學發展的突出問題，采取領導帶頭“點題整改”的方式，帶動參學單位和參學黨員積極整改落實，推動整改由點到面；采取建立臺賬“量化整改”的方式，明確整改措施和目標，推動整改由粗到細；采取公示結果“陽光整改”的方式，及時通過鄉村廣播、工作簡報、公開欄等將整改情況向群眾通報，接受群眾的監督和評判，推動整改由虛到實。同時，采取廣泛征集民意、形成建議議案、反復征求意見、表決形成草案、印發文件執行“五步法”，對查擺出來的制度、機制問題進行全面分析，通過發放調查問卷、召開座談會、設立意見箱等形式，向社會各界征集意見及建議，并組織召開專家會議討論形成建議議案，制度、機制草案經公示后以文件形式印發執行。目前，各參學單位累計建立制度、機制323個，修改完善規章制度458個，清理廢止規章制度226個。
三、基本特點
個，并通過理論考試、演講比賽、文藝演出等豐富多彩的形式，在全市營造了學習實踐活動的濃厚氛圍。
（三）堅持督促檢查，狠抓工作落實。市委指導檢查組采取定期例會、日報周報等辦法，了解情況，把握方向，及時指導，每個階段都制定了《序時進度一覽表》，細化活動安排，量化活動內容，并及時對活動開展情況重點抽查，綜合指導，使活動開展指導有方、督導有力、推進有效。
（四）堅持開門搞活動，擴大群眾參與。學習調研階段，積極組織領導干部深入基層、深入群眾集中開展“蹲點調研”；分析檢查階段，通過問卷調查、邀請“兩代表一委員”座談、組織民主評議等多種形式向廣大群眾征求意見；整改落實階段，盡心竭力幫助基層和群眾解決實際困難，并組織群眾開展滿意度測評，使活動的每一個階段每一個環節都積極吸收群眾參與。
四、取得成效
（一）進一步提高了思想認識。廣大參學黨員干部通過學習實踐活動，提高了對科學發展觀的認識，增強了貫徹落實科學發展觀的自覺性和堅定性，在推動科學發展的理念和思路上形成了共識，進一步堅定了“把新密建設成為干凈整潔、結構優良、富足文明、風清氣正的現代化新興中等城市”的奮斗目標。
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【關鍵詞】 高尿酸血癥 尿酸 有機陰離子轉運子 免疫組織化學
［ABSTRACT］ Objective To observe the expression of organic anion transporter 3 (OAT3) in renal epithelial cells of Wistar rats with hyperuricemia. Methods Twenty male Wister rats were evenly pided into control group and hyperuricemia group in random. The hyperuricemia group was administrated with adenine 100 mg/ (kg·d) by gavage and richyeast forage. Blood UA， CR， BUN were detected regularly. The expression of OAT3 was detected by immunohistochemistry. Results On day 14， blood uric acid level of rats in hyperuricemia group was higher than that of the controls (P
［KEY WORDS］ Hyperuricemia; Uric acid; Organic anion transporters; Immunohistochemistry
近年來高尿酸血癥的患病率逐年上升，且隨年齡增加而升高，已成為危害人類健康的公共衛生問題[1]。業已證實，約90%以上原發性高尿酸血癥是因腎近端小管對尿酸的重吸收增加和（或）分泌減少所致。有機陰離子轉運體3（OAT3）參與了腎近端小管對尿酸鹽的轉運[2～4]，其表達及功能缺陷可能為原發性高尿酸血癥重要的發病機制之一。本實驗選用雄性Wistar大鼠制備高尿酸血癥模型，觀察模型大鼠腎臟近端小管上皮細胞OAT3 蛋白的表達水平，以期明確OAT3在高尿酸血癥狀態下的變化，為研發治療高尿酸血癥藥物提供新的作用靶點。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 實驗動物
8周齡雄性Wistar大鼠共20只，體質量（250±10）g，由青島實驗動物基地提供， SPF級實驗動物房飼養。
1.1.2 儀器
Sysmex CHEMIX180型全自動生化分析儀（日本）；Simple PCI圖像分析儀（Comp ix，美國）。
1.1.3 藥品和試劑
UA、CRE、BUN檢測試劑盒購自青島益信公司；一抗為兔抗大鼠OAT3多克隆抗體，由北京博奧森公司制備，按1∶50配成工作液；二抗（PV6001）及 DAB 顯色試劑盒均購自北京中杉金橋公司，二抗為羊抗兔IgG，為工作液。其他試劑均為進口或國產分析純。
1.2 方法
1.2.1 高酵母飼料的制備
酵母干粉均勻拌入粉碎的大鼠顆粒飼料中重新壓粒成型，控制其在飼料中的質量分數為0.10。
1.2.2 動物模型的建立及分組
根據奚九一等[5]的造模方法，動物購入后，讓其適應環境1周，自由飲水進食。然后將動物隨機分為對照組和高尿酸血癥組（實驗組），每組10只。實驗組飼以高酵母飼料，并給予腺嘌呤100 mg/(kg·d）灌胃，以制備高尿酸血癥模型。對照組飼以普通大鼠顆粒飼料，并給予同體積的蒸餾水灌胃。兩組動物自由飲水。
1.2.3 生化指標的監測
定期內眥靜脈采血，分離血清后，在全自動生化分析儀上測定尿酸（UA）、肌酐（CR）和尿素氮(BUN)，監測大鼠高尿酸血癥模型的建立情況及造模對大鼠腎功能的損害情況。
1.2.4 動物處死及標本處理
待血尿酸出現顯著差異時處死大鼠，術前禁食14 h， 體積分數0.10的水合氯醛3 mL/kg腹腔麻醉，開腹后分離腎臟，切除腎組織用40 g/L甲醛固定，石蠟包埋， 全部標本均1 μm厚連續切片，分別進行蘇木精伊紅染色和免疫組織化學染色。
1.2.5 免疫組化檢測
石蠟切片脫蠟至水，體積分數0.03的H2O2室溫孵育10 min，以清除內源性過氧化物酶的活性；抗原微波熱修復；體積分數0.10的正常山羊血清封閉非特異性位點；傾去血清，滴加一抗工作液， 37 ℃孵育3 h；滴加二抗工作液，37 ℃孵育30 min；DAB染色；蘇木精復染細胞核；封片。以PBS代替一抗作陰性對照。
1.2.6 圖像分析和統計學處理
對腎小管上皮細胞基底膜上OAT3免疫組化著色強度， 用Simple PCI軟件測定其陽性信號灰度值及吸光度值。所得數據用SPSS 11.5 統計軟件處理，各指標以±s表示，組間數據比較采用t檢驗。
2 結 果
2.1 兩組UA、CR及BUN水平比較
造模后第14天，高尿酸血癥組UA、CR、BUN水平與對照組相比均升高，差異均有顯著性（t′=-15.00、-9.13、-17.59，P
2.2 大鼠腎臟組織切片蘇木精伊紅染色光鏡觀察
對照組大鼠腎臟切片， 光鏡下腎小球囊腔內未見異常物質，腎曲小管、集合管亦未見異常病變，間質有輕度瘀血；高尿酸血癥組大鼠腎臟切片，光鏡下腎小球囊內有紅細胞，伴紅染物質，腎小管濁腫，腎小管及間質部位有較多的尿酸鹽結晶沉積，間質有出血及大量炎性細胞浸潤，尿酸鹽結晶呈針狀、雙折光放射形排列。
2.3 腎近端小管上皮細胞OAT3表達水平
免疫組織化學染色結果顯示，對照組及高尿酸血癥組大鼠腎臟近端小管上皮細胞均有OAT3的表達，但高尿酸血癥組大鼠OAT3的表達較對照組顯著減少。Simple PCI軟件分析結果顯示，高尿酸血癥組OAT3的吸光度值（0.202 2±0.014 3）較對照組(0.217 7±0.015 8)明顯降低（t=3.299，P
3 討 論
高尿酸血癥和痛風是一種嘌呤代謝紊亂性疾病，受遺傳和環境因素的影響，目前其發病機制仍不確切。約90%原發性高尿酸血癥是因尿酸排泄減少所致，每日排出體外的尿酸2/3通過腎臟排泄，1/3通過腸道排泄。腎近端小管對尿酸的重吸收增加和（或）分泌減少是尿酸排泄減少的主要原因，但導致腎近端小管尿酸排泄減少的分子機制目前仍不確切。目前研究表明， 腎近端小管上皮細胞有尿酸分泌和重吸收的轉運體，參與腎臟對尿酸的排泄。其中，OAT3在腎臟主要位于腎小管上皮細胞基底膜，它是一個有機陰離子二羧酸鹽轉運子，其底物親和性很廣，包括雌激素硫酸鹽（ES）、對氨基馬尿酸(PAH)、非類固醇類消炎藥、利尿劑、磺溴酞、膽鹽、青霉素、西米替丁以及抗高血壓藥溴化四乙胺，同時它還參與腎小管管周細胞對尿酸鹽的攝取，從而有利于尿酸鹽的分泌[3，4]。
本實驗選用雄性Wistar大鼠飼以高酵母飼料加腺嘌呤灌胃，制備高尿酸血癥模型，觀察高尿酸血癥狀態下大鼠腎臟近端小管上皮細胞OAT3 蛋白表達水平的變化。實驗第14天，高尿酸血癥組血尿酸水平顯著高于對照組（P
此外，OAT3在腎臟對尿酸鹽及一些藥物的排泄中占有重要地位，在高尿酸血癥病人中，OAT3的表達及活性降低，提示高尿酸血癥并發其他疾病的臨床治療中，應注意一些有機陰離子藥物的用法及用量調整，以防藥物排泄減少導致蓄積。高尿酸血癥及痛風發病機制復雜，為多基因遺傳病，有多種尿酸鹽轉運體參與腎近端小管上皮細胞對尿酸的重吸收和分泌[6]，對其發病機制及治療的研究應綜合多種相關基因及其表達活性進行進一步研究。
【參考文獻】
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[2]KUSUHARA H， SEKINE T， UTSUNOMIYATATE N， et al. Molecular Clonin and characterization of a new multispecific organic anion transporter from rat brain[J]. J Biol Chem， 1999，274(19):1367513680.
[3]BAKHIYA A， BAHN A， BURCKHARDT G， et al. Human organic anion transporter 3(hOAT3) can operate as an exchanger and mediate secretory urate flux[J]. Cell Physiol Biochem， 2003，13(5):249256.
[4]CHA S H， SEKINE T， FUKUSHIMA J I， et al. Identification and characterization of human organic anion transporter 3 expressing predominantly in the kidney[J]. Mol Pharmacol， 2001，59:12771286.
[5]奚九一，趙兆琳，魯培基，等. 高尿酸血癥腎病的實驗動物模型研究[J]. 上海中醫藥雜志， 2001，10：1214.
篇10
【摘要】 目的: 探討p38 MAPK在高糖誘導的腎小管上皮細胞轉分化中的作用. 方法: 將體外培養的人腎小管上皮細胞（HK2）分為正常對照組（NG）， 高糖組（HG）， 無關siRNA轉染組（RG）、轉染p38 MAPK siRNA 24 h組(24hG)、轉染p38 MAPK siRNA 48 h組(48hG). 免疫細胞化學法檢測α平滑肌肌動蛋白(αSMA)和細胞角蛋白(CK)的表達，RTPCR法檢測CK mRNA的表達，Western Blot檢測p38 MAPK的活化及αSMA的表達. 結果: p38 MAPK siRNA能顯著抑制高糖誘導的p38 MAPK過度活化；高糖刺激后腎小管上皮細胞αSMA蛋白表達明顯高于正常組（P
【關鍵詞】 p38 絲裂原活化蛋白激酶類；腎小管；上皮細胞；上皮間質轉分化
0引言
糖尿病腎病(DN)是糖尿病的主要微血管并發癥，而腎臟纖維化是糖尿病腎病進展為慢性腎功能衰竭的病理基礎. 研究發現，腎小管上皮細胞轉分化為間充質細胞(epithelialmesenchymaltransition， EMT)是腎間質纖維化發生機制之一［1］. p38絲裂素激活蛋白激酶(p38 MAPK) 是脊椎動物體內廣泛存在的絲氨酸／蘇氨酸蛋白調節激酶，在糖尿病腎病的發生和發展中發揮重要作用［2-3］. 我們應用RNA干擾技術(siRNA) 抑制腎小管上皮細胞p38 MAPK基因的表達，觀察其對高糖誘導的腎小管上皮細胞轉分化的影響，以探討DN腎間質纖維化的機制，為糖尿病腎病的基因治療提供實驗依據.
1材料和方法
1.1材料人近端腎小管上皮細胞株2(HK2)(美國ATCC). 鼠抗人αSMA(美國Santa Cruz公司)， 鼠抗人CK抗體(北京中杉公司)， p38和磷酸化p38(Pp38)抗體(cell signaling公司)，通用型RTPCR試劑盒(日本TaKaRa公司)， LipofectamineTM2000(美國Invitrogen公司).
1.2方法
1.2.1p38 MAPK siRNA轉染人p38特異性siRNA序列：Sense， 5′GAAGCTCTCCAGACCATTT3′; Antisense，5′AAATGGTCTGGAGAGCTTCTT3′. 用Blast搜尋EST基因庫，對選中的siRNA序列同源性分析. 將適量HK2細胞接種于培養板，分別轉染重組PshRNAp38 MAPK和無關對照質粒，依LipofectamineTM2000轉染試劑盒說明書進行操作.
1.2.2細胞培養及分組HK2用含100 mL/L FCS的DMEM培養液傳代培養. 分為5組：①正常對照組(NG): 培養液中含D葡萄糖(5.5 mmol/L);②高糖組(HG):培養液中含D葡萄糖(30 mmol/L);③無關siRNA轉染組(RG):無關pshGSP轉染細胞24 h后， 再給予D葡萄糖(30 mmol/L);④轉染p38 MAPKsiRNA 24 h組(24hG):pshRNAp38 MAPK轉染細胞24 h后，再給予D葡萄糖(30 mmol/L);⑤轉染p38 MAPK siRNA 48 h組(48hG):pshRNAp38 MAPK轉染細胞48h后，再給予D葡萄糖(30 mmol/L). 每組均加入等量脂質體，給予D葡萄糖作用48 h后收集細胞和培養液用于各項檢測. 各組細胞分別用相差顯微鏡和透射電鏡進行觀察.
1.2.3免疫細胞化學法檢測CK和αSMA表達HK2細胞爬片，待細胞長至亞融合狀態，以無血清培養基繼續培養24 h使其同步化，分組如前述. 根據SP試劑盒所示方法檢測CK，αSMA的表達. 生物醫學圖像分析系統進行圖像分析，用平均吸光度表示陽性物質的相對含量.
1.2.4RTPCR實驗各組按照Trizol說明書提取總RNA，根據260 nm吸光度值計算RNA濃度. 取總RNA 1 μg作逆轉錄，步驟參照試劑盒說明. CK引物正義鏈：5′CCCAGAGCCTTGAGATAGAAC3′，反義鏈:5′CACGACCTTGCCATCCAC3′. βactin引物正義鏈5′CACCAACTGGGACGACAT3′，反義鏈:3′GCAACGATAGGTCCGACA5′. 反應參數:變性94℃ 2 min，變性94℃ 30 s，退火55℃ 30 s，延伸72℃ 2 min，35個循環. PCR產物瓊脂糖凝膠電泳，CK mRNA表達以βactin作為內參照物調整后進行半定量分析.
1.2.5Western Blot檢測收集細胞，提取蛋白，考馬斯亮藍法測定蛋白濃度. SDS聚丙烯酰胺凝膠上樣，積層膠電壓50 V電泳，分離膠60～65 V電壓電泳， 50 V轉膜2 h， BSA封閉l h，一抗p38，Pp38(1∶1000)或αSMA(1∶200)，βactin(1∶2000)孵育過夜，洗滌后加二抗(1∶2500) 室溫反應1 h，曝光、顯影. 凝膠成像和化學發光分析系統進行灰度分析.
統計學處理：數據用 x±s表示，采用統計學軟件SPSS11.0進行統計學處理，多組計量資料經檢驗方差齊同，采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSDt檢驗，P
2結果
2.1細胞形態學改變倒置顯微鏡下，正常HK2細胞為橢圓形貼壁生長. 高糖刺激后，細胞間隙增大，呈梭形，失去鵝卵石樣形態. 轉染p38 MAPKsiRNA后，部分細胞為橢圓形，部分轉變為梭形. 透射電鏡下，正常對照組細胞表面微絨毛積聚，細胞內線粒體豐富，粗面內質網少. 高糖組和無關轉染組與正常對照組相比，細胞表面微絨毛明顯減少，胞質內粗面內質網豐富，線粒體極少. 而轉染p38 MAPKsiRNA組與高糖組和無關轉染組相比，細胞表面微絨毛增多，細胞內粗面內質網減少，線粒體增多(圖1). A:正常對照組; B:高糖組; C:無關siRNA轉染組; D:轉染p38 MAPKsiRNA 24 h組; E:轉染p38 MAPKsiRNA 48 h組.
圖1各組HK2細胞超微結構改變
2.2p38 MAPKsiRNA對腎小管上皮細胞p38 MAPK表達的影響Western Blot檢測顯示，高糖組和無關轉染組p38 MAPK被磷酸化激活，與正常對照組相比差異有統計學意義（P
1:正常對照組; 2:高糖組; 3:無關siRNA轉染組; 4:轉染p38 MAPKsiRNA 24 h組; 5:轉染p38 MAPKsiRNA 48 h組.
圖2各組HK2細胞p38 MAPK的表達
2.3p38 MAPKsiRNA對腎小管上皮細胞CK和αSMA表達的影響免疫細胞化學結果顯示，與正常對照組相比，高糖組和無關轉染組CK表達顯著降低，差異有統計學意義；p38 MAPKsiRNA轉染組，與高糖組和無關轉染組相比CK表達顯著增加(P
3討論
腎臟纖維化是糖尿病腎?。―N）進展為慢性腎衰的病理基礎，細胞外基質過度聚積是腎臟纖維化的主要原因. 研究證實，腎小管上皮細胞轉分化是腎間質纖維化發生的重要機制之一［4-5］. 深入了解轉分化的發生機制，對于早期防治糖尿病腎病具有十分重要的意義.
M:marker;1:正常對照組; 2:高糖組; 3:無關siRNA轉染組; 4:轉染p38 MAPKsiRNA 24 h組; 5:轉染p38 MAPKsiRNA 48 h組.
圖3各組HK2細胞CK mRNA表達的水平
1：正常對照組; 2:高糖組; 3:無關siRNA轉染組; 4:轉染p38 MAPKsiRNA 24 h組; 5:轉染p38 MAPKsiRNA 48 h組.
圖4各組HK2細胞αSMA蛋白表達的影響
αSMA是肌成纖維細胞的標志性蛋白，肌成纖維細胞是活化的成纖維細胞，具有很高的合成細胞外基質的作用，是引起腎間質纖維化的主要原因［6］. 正常情況下，腎小管上皮細胞表達其標志蛋白CK，不表達αSMA. 我們實驗發現，高糖可以刺激HK2細胞發生形態學改變，細胞逐漸由卵圓形拉長成梭形，微絨毛明顯減少，粗面內質網明顯增多；這提示細胞失去了上皮特性而表現為成纖維細胞特性. 同時，正常對照組幾乎無αSMA的表達，但高糖作用下αSMA高表達，而HK2的標志蛋白CK的表達明顯下調，表明高糖誘導腎小管上皮細胞表型轉化，可能是糖尿病腎病腎間質纖維化的重要機制之一.
p38 MAPK為信號轉導通路的交匯點，在糖尿病腎病的發生發展起到重要的作用［7］. 本實驗成功構建pshRNAp38 MAPK表達載體，能有效抑制p38 MAPK的表達. 轉染pshRNAp38 MAPK后， p38 MAPK的表達被抑制，HK2細胞αSMA的表達明顯低于高糖組和無關轉染組，而HK2的標志蛋白CK的表達較高糖組和無關轉染組明顯增加. 同時形態學檢查顯示，p38 MAPK siRNA轉染組細胞形態介于對照組與高糖組之間，部分細胞為橢圓形，部分轉變為梭形，同時細胞表面微絨毛較高糖組明顯增多，胞漿內粗面內質網較高糖組減少. 表明高糖可通過p38 MAPK活化誘導腎小管上皮細胞轉分化，參與糖尿病腎病的纖維化進程.
本研究表明，高糖能夠導致腎小管上皮細胞p38 MAPK通路的激活，下調CK表達，同時導致αSMA等間充質細胞表型的表達，誘導其表型轉化，而p38 MAPKsiRNA能有效抑制其發生，p38 MAPK作為腎小管上皮細胞轉分化中的重要因子，成為糖尿病腎病纖維化干預的中心環節，該研究為應用RNAi糖尿病腎病的基因治療提供實驗依據.
參考文獻
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