醫學論文香連素片質量研究
時間:2022-03-12 08:52:00
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摘要:目的建立香連素片的質量控制標準。方法采用薄層色譜法鑒別香連素片中的木香;采用高效液相色譜法測定香連素片中鹽酸小檗堿的含量。結果在薄層色譜中檢出了木香;鹽酸小檗堿的進樣量在0.0378~0.378μg范圍內呈良好的線性關系(r=0.9997),平均回收率為101.49%,RSD為1.97%(n=6)。結論本方法專屬性強、準確、重現性好,可作為香連素片的質量控制標準。
關鍵詞:香連素片;木香;薄層色譜法;鹽酸小檗堿;高效液相色譜法
Abstract:ObjectiveToestablishamethodforqualitycontrolofXiangliansutablets.MethodsRadixAuckiandiaeinthetabletswasidentifiedbyTLC.ThecontentofberberinehydrochlorideinthetabletswasdeterminedbyHPLC.ResultsRadixAuckiandiaecouldbeidentifiedbyTLC.Berberinehydrochlorideshowedagoodlinearcorrelationovertherangeof0.0378-0.378μg(r=0.9997).Theaveragerecoveryofberberinehydrochloridewas101.49%withRSD1.97%(n=6).ConclutionsThemethodisspecific,accurateandreproduciblefortheequalitycontrolofXiangliansutablets.
Keywords:Xiangliansutablets;berberinehydrochloride;HPLC;Radixauckiandiae;TLC
香連素片是廣東萬年青制藥有限公司的產品,具有清熱燥濕、行氣止痛的功效,臨床用于濕熱型痢疾、里急后重、腹痛泄瀉。其處方為木香500g、鹽酸小檗堿75g。原藥品標準[1]鑒別木香用試管反應,鹽酸小檗堿的含量用紫外分光光度法測定,方法專屬性較低且影響因素多。本文采用薄層色譜法鑒別木香、高效液相色譜法測定鹽酸小檗堿的含量,結果表明操作簡便、準確、重復性好,為該品種的質量標準進一步修訂提供了依據。
1儀器與試藥
1.1試藥
香連素片(批號:030801、030802、030803、040701、041002、050601、050802、060601、060602、060603)均為廣東萬年青制藥有限公司產品;木香對照藥材(批號:921-9201)及鹽酸小檗堿對照品(批號:110713-200609)均購自中國藥品生物制品檢驗所;硅膠G預制板及硅膠G均由青島海洋化工廠生產;乙腈為色譜純;其他試劑與試藥均為分析純。
1.2儀器
LC2010A高效液相色譜儀(日本島津),UV2501PC紫外分光光度儀(日本島津),CQ15A超聲波清洗器(上海躍進醫用光學器材廠)。
2薄層鑒別[2]
取本品2片,研成細粉,加三氯甲烷10mL,超聲(功率120W,頻率50Hz)處理30min,濾過,濾液濃縮至2mL,作為供試品溶液。另取木香對照藥材0.2g、不含木香的陰性樣品,同法分別制成對照藥材溶液及陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗,吸取上述3種溶液各3μL,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以三氯甲烷環己烷(體積比5∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以1%香草醛硫酸溶液,在105℃加熱至斑點清晰。置可見光下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點。陰性對照無干擾,見圖1。
3含量測定
3.1色譜條件
色譜柱:phenomenexC18(150mm×4.6mm,5μm)流動相:以磷酸鹽緩沖溶液[0.05mol/L磷酸二氫鉀和0.01mol/L十二烷基磺酸鈉(體積比1∶1),含0.2%三乙胺]乙腈(體積比60∶40),用磷酸調節pH值至3.0為流動相;流速:1.2mL/min,檢測波長:266nm,柱溫:室溫,進樣量:10μL,理論塔板數不低于1500。
3.2溶液的制備
3.2.1對照品溶液的制備
取鹽酸小檗堿對照品適量,精密稱定,加乙醇制成每1mL含120μg的溶液,作為對照品溶液。
3.2.2供試品溶液的制備
取本品20片,精密稱定,研細,精密稱取適量(約相當于鹽酸小檗堿60mg),置索氏提取器中,加鹽酸甲醇(體積比1∶100)適量,加熱回流提取至提取液無色,將提取液(必要時濃縮)移至50mL量瓶中,用少量鹽酸甲醇(1體積比∶100)的混合液洗滌容器,洗液并入提取液中,并稀釋至刻度,搖勻,精密量取1mL,置10mL量瓶中,加乙醇至刻度,搖勻,即得。
3.2.3陰性對照溶液的制備
按照本品的處方、制法制備缺少鹽酸小檗堿的模擬樣品,按“3.2.2”項方法制成陰性對照溶液。
3.3專屬性試驗
分別取供試品溶液、對照品溶液及陰性對照溶液,按上述色譜條件測定,結果陰性對照對鹽酸小檗堿測定無干擾,說明方法專屬性強。結果見圖2。
3.4線性關系的考察
精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量,用乙醇溶解制成質量濃度為37.8μg/mL的溶液,分別精密吸取1、2、4、6、8、10μL注入液相色譜儀中,按上述色譜條件測定色譜峰面積,以進樣量(m)為橫坐標,色譜峰面積積分值(Y)為縱坐標,繪制標準曲線,經線性回歸,得線性回歸方程為Y=2.88725×106m-5586.84,r=0.9997,表明鹽酸小檗堿進樣量在0.0378~0.378μg范圍內與色譜峰面積呈良好的線性關系。3.5穩定性試驗
精密吸取同一批供試品溶液各10μL,按上述色譜條件,每隔1h測1次峰面積,結果表明鹽酸小檗堿在24h內穩定,RSD為0.66%。
3.6重復性試驗
取同一批樣品共6份,分別按“3.2.2”項下方法進行制備溶液,并按上述色譜條件測定鹽酸小檗堿的含量,結果RSD=0.90%,表明方法重現性良好。
3.7回收率試驗
精密稱取已知含量的樣品(批號:030802)共6份,分別精密加入對照品適量,按“3.2.2”項下方法制備溶液并按上述色譜條件測定鹽酸小檗堿的含量,計算加入量的回收率。結果見表1。表1鹽酸小檗堿加樣回收率試驗(略)
3.8準確度考察
以含量限度下限的50%為范圍低限、以含量限度上限的150%為范圍高限,考察測定范圍的準確度。
精密稱取已知含量的樣品(批號:030802),按含量范圍高、低限折算取樣量,各6份,分別精密加入對照品適量,按“3.2.2”項下方法制備溶液并按上述色譜條件測定鹽酸小檗堿的含量,計算加入量的回收率。結果見表2。表2準確度試驗結果(略)
3.9樣品的測定
取10批樣品,分別按“3.2.2”項下方法制備溶液,分別精密量取供試品溶液及對照品溶液各10μL,注入高效液相色譜儀,并按上述色譜條件,測定鹽酸小檗堿的含量,結果見表3。表3樣品中鹽酸小檗堿的含量(略)
4討論
4.1采用薄層色譜法鑒別木香時,分別采用自制板及預制板同時展開、預平衡與未平衡的條件展開,層析結果表明:自制板與預制板的層析結果無差別,兩種展開條件均可檢出木香特征斑點,但以未平衡的條件展開,結果容易產生邊緣效應,故展開時預平衡10min較好。
4.2薄層層析的環境影響
分別在冰箱、室溫、相對濕度45%和75%的環境條件下展開,結果表明:在上述環境條件展開,均可檢出木香特征斑點,差異不大,故選用以室溫、相對濕度45%~75%為展開環境條件,操作簡便。
4.3提取方法的選擇
參照國家藥品標準[1],供試品溶液的制備是經索氏提取后上氧化鋁柱洗脫,操作較繁瑣。我們對提取方法進行了優化,只經索氏提取后直接測定,并與原提取方法的HPLC測定結果作對比。結果表明:只經索氏提取與原提取方法的測定結果一致,因此樣品的提取采用索氏提取法。
4.4測定波長的選擇
取對照品溶液,在200~500nm波長范圍內進行掃描,在349、266、231nm均有最大吸收,經HPLC試驗比較,鹽酸小檗堿在266nm波長的峰面積值最大,故選擇檢測波長為266nm。
4.5流動相的選擇
參考文獻[3,4],采用磷酸鹽緩沖溶液[0.05mol/L磷酸二氫鉀和0.01mol/L十二烷基磺酸鈉(1∶1),含0.2%三乙胺]乙腈(60∶40),分別用磷酸調節pH值至3.0、3.2、3.5為流動相,經試驗,當流動相的pH值為3.0時對照品及樣品的峰形對稱,重復性好,陰性對照無干擾,故確定流動相為磷酸鹽緩沖溶液[0.05mol/L磷酸二氫鉀和0.01mol/L十二烷基磺酸鈉(1∶1),含0.2%三乙胺]乙腈(60∶40),用磷酸調節pH值至3.0。
4.6耐用性考察
4.6.1柱溫的考察
柱溫分別為室溫、40℃時,色譜峰的分離度、峰形及峰面積基本一致,故以室溫作為柱溫,操作較簡便。
4.6.2流速的考察
分別設定流速為1.0、1.2及1.5mL/min進行測定,結果表明:當流速為1.0mL/min時保留時間太長,當流速分別為1.2及1.5mL/min時色譜峰的峰形及峰面積無甚差別,且前者的保留時間短一些,故選擇流速為1.2mL/min。
4.6.3色譜柱的考察
選用3種不同廠牌的色譜柱:phenomenexC18(150mm×4.60mm,5μm)、DiamonsilTMC18(250mm×4.60mm,5μm)和SpherisorbC18(250mm×4.60mm,5μm),測定同一批樣品(批號:060602)的含量,結果3種色譜柱測得含量的RSD=0.61%(n=2),表明換用不同廠牌的色譜柱,均可得到滿意的色譜圖,故本法的耐用性好。
【參考文獻】
[1]WS3—B—2572—97.國家藥品標準:衛生部藥品標準第十三冊[S].1997:140.
[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2005年版一部[S].北京:化學工業出版社,2005:41.
[3]龐小雄,宋粉云,鐘兆健,等.HPLC法測定拈痛丸中鹽酸小檗堿的含量[J].廣東藥學院學報,2007,23(3):240-242.
[4]張宇烽,馬安霓,陳小玲,等.HPLC法測定芩連葛根片鹽酸小檗堿的含量[J].廣東藥學,2004,14(7):83.
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