細胞增殖論文范文

導語：如何才能寫好一篇細胞增殖論文，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

【關鍵詞】骨髓內(nèi)皮細胞GMCSF細胞增殖

EffectsofGranulocyteMacrophageColonyStimulatingFactoronGrowthofMurineBoneMarrowEndothelialCells

AbstractThepurposeofthisstudywastoinvestigatetheeffectsofgranulocytemacrophagecolonystimulatingfactor(GMCSF)onthegrowthofmousebonemarrowendothelialcells.Endothelialcellculturemedium（EndoM）wasusedtoculturemurinebonemarrowendothelialcells.EndothelialcellcolonieswerecountedundermicroscopebyWrightGiemsastaining.TheeffectofdifferentconcentriationofGMCSFontheproliferationofbonemarrowendothelialcellswasobservedbytheformationofendothelialcellcolonies,MTTandflowcytometry.TheresultsindicatedthattheendothelialspecificmarkervWFwasexpressedbythecolonycells,GMCSFpromotedtheproliferationofbonemarrowendothelialcellcoloniesandMTTconfirmedtheeffectofGMCSFonpromotingtheproliferationofbonemarrowendothelialcells.TheresultofdetectingcellcycleshowedthattherateofcellsenteringintoSphasewas9.3%inGMCSFaddedgroupandtherateofcellsenteringintoSphasewas2.1%incontrol.Therewasnosignificantdifferenceincellgrowthcurvebetweenthefirstpassageandfourthpassage.ItisconcludedthatGMCSFcanpromotetheproliferationofbonemarrowendothelialcells,theproliferationpotentialofbonemarrowendothelialcellsbetweenthefirstandfourthpassagenosignificantlychanges.

Keywordsbonemarrowendothelialcells;GMCSF;proliferation

JExpHematol2007;15(3):622-625

目前，已有許多報道證明內(nèi)皮細胞（endothelialcells,EC）、內(nèi)皮祖細胞（endothelialprogenitorcells,EPC）可以用來治療缺血性心臟病以及各種疾病引起的肢體缺血［1,2］也可以用于組織工程的血管構(gòu)建［3］，并取得了一定的成果。Kawamoto等［4］報道，EPC對缺血心臟病進行治療具有良好的效果，一方面減少了缺血組織的面積，同時改善了心臟的功能。Kalka等［5］則報道了利用EPC對肢體缺血的小鼠模型進行治療，實驗結(jié)果表明了EPC能顯著增加缺血肢體的灌流，而且組織學檢查發(fā)現(xiàn)缺血部位毛細血管的數(shù)目也大大增加。內(nèi)皮細胞的來源有多種，可以從外周血、臍血及骨髓中獲得［6］，而外周血中的內(nèi)皮祖細胞來源于骨髓。從病人自體的骨髓中獲得內(nèi)皮細胞，一方面來源比較方便，而且也可以避免GVHD的發(fā)生。但是由于骨髓基質(zhì)細胞種類多，難以分離純化骨髓內(nèi)皮細胞或內(nèi)皮祖細胞。本研究用本實驗室配制的內(nèi)皮細胞培養(yǎng)液（EndoM）體外培養(yǎng)小鼠骨髓細胞，分離純化骨髓內(nèi)皮細胞及內(nèi)皮祖細胞，并觀察粒巨噬系集落刺激因子（rmGMCSF）對小鼠骨髓內(nèi)皮細胞體外增殖的影響以及體外增殖后內(nèi)皮細胞增殖機能的改變，這對臨床運用內(nèi)皮細胞或內(nèi)皮祖細胞治療疾病有一定的指導意義。

動物

昆明小鼠，由中南大學湘雅醫(yī)學院動物學部提供，雌雄不限，普通飲食。

主要試劑和儀器

IMDM為Gibco公司產(chǎn)品；新生牛血清購自杭州四季清生物制品研究所；重組小鼠粒巨噬細胞集落刺激因子（rmGMCSF）為R&D公司產(chǎn)品；vWF抗體、CY3標記的羊抗兔IgG為Sigma公司產(chǎn)品；MTT、二甲基亞砜（DMSO）為Sigma公司產(chǎn)品；酶標儀為Awarens公司產(chǎn)品；CO2培養(yǎng)箱購自美國Forma。

小鼠骨髓內(nèi)皮細胞及內(nèi)皮細胞集落的培養(yǎng)

用頸椎脫臼法處死小鼠，在無菌條件下取出股骨，用IMDM沖出骨髓細胞，制成單細胞懸液，取1×106個小鼠骨髓單個核細胞種入1ml含有15%新生牛血清的EndoM培養(yǎng)體系，置于24孔板中，于37℃、5%CO2、飽和濕度下培養(yǎng)5天后,用胰蛋白酶消化，制成單細胞懸液，按每孔1×104個細胞種入24孔板，每組3孔。于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)15天后計數(shù)內(nèi)皮細胞集落數(shù)，以≥50個細胞的聚合計為1個集落。

內(nèi)皮細胞的形態(tài)觀察及vWF的檢測

培養(yǎng)的骨髓內(nèi)皮細胞集落經(jīng)WrightGiemsa染色后，顯微鏡下觀察內(nèi)皮細胞形態(tài)。用間接免疫熒光法檢測骨髓內(nèi)皮細胞vWF。將內(nèi)皮細胞培養(yǎng)于24孔板內(nèi)放置的蓋玻片上，當細胞間沒有明顯的間隙時，取出蓋玻片，用PBS清洗，用4%的多聚甲醛固定30分鐘，用PBS洗3次：2%的正常羊血清封閉4小時，加入vWF抗體，4℃過夜，用PBS洗3次，加入二抗CY3IgG，37℃孵育60分鐘,PBS洗3次：置于熒光顯微鏡下觀察。以本室建的小鼠骨髓內(nèi)皮細胞株［7］為陽性對照，骨髓成纖維細胞為陰性對照。

不同濃度的GMCSF對小鼠骨髓內(nèi)皮細胞形成集落的影響

取純化的小鼠骨髓內(nèi)皮細胞培養(yǎng)于24孔板中，每孔5000個細胞，在基本培養(yǎng)體系（含1%濃度EndoM）的基礎上分別加入5、10、25ng/ml的rmGMCSF，對照組不加入GMCSF，每組3孔。置于CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)15天，于倒置顯微鏡下記數(shù)集落數(shù)，≥50個細胞的聚合計為1個內(nèi)皮細胞集落。

GMCSF對內(nèi)皮細胞增殖影響的MTT法測定

將純化的小鼠骨髓內(nèi)皮細胞按5000個/孔培養(yǎng)于96孔板，每孔0.2ml，每組3孔。實驗組培養(yǎng)體系中分別加入5、25、100ng/ml的rmGMCSF，對照組內(nèi)不加。在37℃、5%CO2、飽和濕度下分別培養(yǎng)5天和10天，取出培養(yǎng)板吸去培養(yǎng)液，然后加入無血清的IMDM180μl和20μlMTT溶液，放入培養(yǎng)箱孵育4小時，吸去液體，各孔加入DMSO150μl，振蕩10分鐘，使結(jié)晶充分溶解。選擇492nm波長，在酶標儀上測定各孔的光吸收值（OD492）。

生長曲線

純化的小鼠骨髓內(nèi)皮細胞培養(yǎng)于96孔板中，每孔5000個細胞，加0.2ml含15%新生牛血清的基本培養(yǎng)液，并加入25ng/ml的rmGMCSF。共種6組，每組3孔，培養(yǎng)5天后，分別于第7、9、11、13、15天用胰酶消化后計數(shù)細胞，每次3孔，求平均值，做出生長曲線。按公式DT=t×1g2/(1gN-1gN0)算出第1代內(nèi)皮細胞生長的倍增時間。

細胞周期的流式細胞術(shù)檢測

無菌條件下取小鼠骨髓單個核細胞，按2×106個細胞種于6孔培養(yǎng)板中（2ml培養(yǎng)體系中含15%新生牛血清的EndoM），置于37℃、5%CO2、飽和濕度下培養(yǎng)5天，然后吸去培養(yǎng)液，加入兩種不同培養(yǎng)體系，對照組加含15%新生牛血清的IMDM，實驗組加15%新生牛血清的IMDM和100ng/ml的rmGMCSF，每組各10孔，置于CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天后，用胰酶消化細胞，200×g,離心5分鐘，用PBS洗滌細胞2次之后，用300μlPBS重懸細胞，加入冰冷的乙醇（-20℃）約700μl（終濃度為70%），將細胞放于-20℃過夜處理后，用流式細胞儀檢測細胞周期。

細胞傳代培養(yǎng)

取小鼠骨髓單個核細胞，按2×106個細胞種于6孔培養(yǎng)板中（2ml體系中含15%新生牛血清的EndoM），置于37℃、5%CO2、飽和濕度下培養(yǎng)5天，然后吸去培養(yǎng)液，加入15%新生牛血清的IMDM培養(yǎng)液和100ng/ml的rmGMCSF，促使細胞融合，再按1∶4傳代于6孔板中，同樣加入15%新生牛血清的IMDM和100ng/ml的rmGMCSF，等細胞生長至融合，按1∶4傳代，加入相同培養(yǎng)體系。按上述方法傳4代后，繪制生長曲線，方法同前。公式DT=t×1g2/(1gN-1gN0)算出第4代內(nèi)皮細胞生長的倍增時間，并與第1代的倍增時間進行比較。

統(tǒng)計學處理

實驗數(shù)據(jù)為3次結(jié)果，以mean±SD表示。不同處理組兩組間比較采用t檢驗，應用SPSS軟件分析，P<0.05表示有統(tǒng)計學意義。

結(jié)果

細胞形態(tài)每孔種入小鼠骨髓內(nèi)皮細胞5000個，對照組加基礎培養(yǎng)液,實驗組在基礎培養(yǎng)液的基礎上分別加入rmGMCSF5、10、25ng/ml。與對照組相比，實驗組集落數(shù)均明顯增多（圖3），說明rmGMCSF對小鼠骨髓內(nèi)皮細胞的增殖有明顯刺激作用。

rmGMCSF對內(nèi)皮細胞增殖的影響

小鼠骨髓內(nèi)皮細胞培養(yǎng)5、10天，分別進行MTT的檢測，結(jié)果表明rmGMCSF對小鼠骨髓內(nèi)皮細胞生長促進作用明顯，各組與對照組相比差異顯著（P<0.01）（圖4）。

GMCSF對EC細胞周期的影響

運用流式細胞儀檢測細胞周期，觀察GMCSF對EC細胞周期的影響。結(jié)果顯示GMCSF使細胞進入S期的比例為9.3%，與對照組2.1%相比有明顯差別。此結(jié)果說明GMCSF能夠促使細胞進入S期，加快細胞的分裂，從而促進了細胞的增殖（圖5）。Figure5.EffectofGMCSFoncellcycleofendothelialcells.A:grouptreatedbyGMCSF.B:controlgroup.

體外擴增傳代對內(nèi)皮細胞增殖的影響

圖6為小鼠骨髓第1代和第4代內(nèi)皮細胞的生長曲線。利用計算公式［DT=t×1g2/(1gN-1gN0)］計算出第1、4代細胞生長的倍增時間分別為30.25±0.55小時、31.67±0.26小時。第1代與第4代的細胞倍增時間相比，無明顯差異，表明經(jīng)體外擴增傳代4次，仍能保持傳代早期的增殖潛能。

Figure6.Growthcurveofthefirstandfourthpassagegenerationsofmurineboneendothelialcells.討論

國內(nèi)外對于骨髓內(nèi)皮細胞的純化報道較少，但已經(jīng)進行了一些關于細胞因子對內(nèi)皮細胞增殖影響的研究，如Yonekura等［8］報道VEGF可以促進內(nèi)皮細胞的增殖，Rieck等［9］則報道bFGF可促進角膜內(nèi)皮細胞的生長。我們此前曾報道了VEGF、bFGF、SCF、IL6、GMCSF等對內(nèi)皮細胞株的增殖有促進作用［10］。GMCSF對未經(jīng)轉(zhuǎn)化的骨髓內(nèi)皮細胞增殖的作用尚未見報道。本研究中，我們用本室配制的培養(yǎng)基在較短的時間內(nèi)純化了小鼠的骨髓內(nèi)皮細胞，vWF為陽性，并在此基礎上觀察了GMCSF對骨髓內(nèi)皮細胞增殖的影響。應用基本培養(yǎng)基培養(yǎng)內(nèi)皮細胞集落時，形成的集落數(shù)較少，加入rmGMCSF后，集落生成明顯增多。MTT的結(jié)果亦支持GMCSF對小鼠骨髓內(nèi)皮細胞生長的刺激作用。細胞生長曲線的結(jié)果表明，在含GMCSF培養(yǎng)的條件下，內(nèi)皮細胞生長的倍增時間為30.25±0.55小時，經(jīng)4次傳代后細胞倍增時間無明顯延長，表明體外培養(yǎng)擴增4代后，細胞仍能保持早期的增殖能力，GMCSF對骨髓內(nèi)皮細胞的體外增殖有明顯刺激作用。文獻報道內(nèi)皮細胞表面有GMCSFR的存在，而內(nèi)皮細胞本身也可以分泌GMCSF［11］。結(jié)合細胞周期測定的結(jié)果，可以認為，GMCSF促內(nèi)皮細胞增殖的機制可能是GMCSF與GMCSFR結(jié)合，通過細胞內(nèi)信號傳遞使更多的細胞進入S期來實現(xiàn)的。

【參考文獻】

1LuttunA,CarmelietG,CarmelietP.Vascularprogenitors:frombiologytotreatment.TrendsCardiovascMed,2002;12:88-96

2RafiiS,LydenD.Therapeuticstemandprogenitorcelltransplantationfororganvascularizationandregeneration.NatMed,2003;9:702-712

3ZammarettiP,ZaischAH.Adult‘endothelialprogenitorcells’.Renewingvasculature.IntJBiochemCellBiol,2005;37:493-503

4KalkaC,MasudaH,TakahashiT,etal.Transplantationofexvivoexpandedendothelialprogenitorcellsfortherapeuticneovascularization.ProcNatlAcadSciUSA,2000;97:3422-3427

5KawamotoA,TkebuchavaT,YamaguchiJ,etal.Intramyocardialtransplantationofautologousendothelialprogenitorcellsfortherapeuticneovascularizationofmyocardialischemia.Circulation,2003;107:461-468

6HristovM,ErlW,WeberPC.EndothelialProgenitorCells:isolationandcharacterization.TrendsCardiovascMed,2003;13:201-206

7王綺如，嚴燕，汪保和.小鼠骨髓內(nèi)皮細胞系的建立.中國實驗血液學雜志，1997；5：360-366

8YonekuraH,SakuraiS,LiuX,etal.PlacentagrowthfactorandvascularendothelialgrowthfactorBandCexpressioninmicrovascularendothelialcellsandpericyts.Implicationinautocrineandparacrineregulationofangiogenesis.JBiolChem,1999;274:35172-35178

9RieckP,OliverL,EngelmannK,etal.Theroleofexogenous/endogenousbasicfibroblastgrowthfactor(FGF2)andtransforminggrowthfactorsbeta(TGFbeta1)onhumancornealendothelialcellsproliferationinvitro.ExpCellRes,1995;220:36-46

篇2

論文關鍵詞：EM原露在信鴿飼養(yǎng)中的應用

 

“EM”是“有益微生物群”的英文縮寫，是日本琉球大學比嘉照夫教授等研究出來的新型復合微生物菌劑，它由光和細菌、乳酸菌、酵母菌等10個屬、80多種微生物復合培養(yǎng)而成。國內(nèi)已有很多廠家生產(chǎn)此類產(chǎn)品。微生物不僅含有較高的優(yōu)良蛋白質(zhì)、氨基酸，還有豐富的維生素以及大量的類胡蘿卜素、抗病毒物質(zhì)、生長促進因子和提高群體免疫能力的活性物質(zhì)，作為添加劑加入飼料中飼喂能促進生長，提高抗病能力。用EM液養(yǎng)禽有提高飼料轉(zhuǎn)化率、促進禽類生長、防治消化道疾病、使飼料脫毒、改善環(huán)境衛(wèi)生、提高繁殖率和幼雛成活率等作用。

一、EM原露的主要成分

1、光合菌群（好氣性和嫌氣性）。如光合細菌和藍藻類。具有光合作用和固氮作用。屬于獨立營養(yǎng)微生物 ，能自我增殖。菌體本身含60%以上的蛋白質(zhì) ，且富含多種維生素，還含有輔酶Q10、抗病毒物質(zhì)和促生長因子；它以土壤接受的光和熱為能源，將土壤中的硫氫和碳氫化合物中的氫分離出來，變有害物質(zhì)為無害物質(zhì)，并以植物根部的分泌物、土壤中的有機物、有害氣體（硫化氫等）及二氧化碳、氮等為基質(zhì)，合成糖類、氨基酸類、維生素類、氮素化合物、抗病毒物質(zhì)和生理活性物質(zhì)等，是肥沃土壤和促進動植物生長的重要力量。

光合菌群的代謝物質(zhì)可以被植物直接吸收，還可以成為其它微生物繁殖的養(yǎng)分。光合細菌如果增殖，其它的有益微生物也會增殖。例如：VA菌根菌以光合菌分泌的氨基酸為食餌 ，它既能溶解不溶性磷，又能與固氮菌共生，使其固氮能力成倍提高。

2、乳酸菌群（嫌氣性）。以嗜酸乳桿菌為主導。它靠攝取光合細菌、酵母菌產(chǎn)生的糖類形成乳酸。乳酸具有很強的殺菌能力，能有效抑制有害微生物的活動和有機物的急劇腐敗分解。乳酸菌能夠分解在常態(tài)下不易分解的木質(zhì)素和纖維素，并消除未分解有機物產(chǎn)生的種種弊端;合成各種氨基酸，維生素、產(chǎn)生消化酶、促進新陳代謝生物論文，還有融化不溶性無機磷的能力。

乳酸菌還能夠抑制連作障礙產(chǎn)生的致病菌增殖。致病菌活躍，有害線蟲會急劇增加，植物就會衰弱，乳酸菌抑制了致病菌，有害線蟲便會逐漸消失論文的格式。

3、酵母菌群（好氣性）。它利用植物根部產(chǎn)生的分泌物、光合菌合成的氨基酸、糖類及其它有機物質(zhì)產(chǎn)生發(fā)酵力，合成促進根系生長及細胞分裂的活性化物質(zhì)。酵母菌在EM原露中對于促進其它有效微生物（如乳酸菌、放線菌）增殖所需要的基質(zhì)（食物）提供重要的給養(yǎng)保障。此外，酵母菌產(chǎn)生的單細胞蛋白是動物不可缺少的養(yǎng)分。

4、革蘭氏陽性放線菌群（好氣性）。它從光合細菌中獲取氨基酸、氮素等作為基質(zhì)，產(chǎn)生出各種抗生物質(zhì)、維生素及酶，可以直接抑制病原菌。它提前獲取有害霉菌和細菌增殖所需要的基質(zhì)，從而抑制它們的增殖，并創(chuàng)造出其它有益微生物增殖的生存環(huán)境。放線菌和光合細菌混合后的凈菌作用比放線菌單兵作戰(zhàn)的殺傷力要大得多。它對難分解的物質(zhì)，如木質(zhì)素、纖維素、甲殼素等具有降解作用，并容易被動植物吸收，增強動植物對各種病害的抵抗力和免疫力。放線菌也會促進固氮菌和VA菌根菌增殖。

5、發(fā)酵系的絲狀菌群（嫌氣性）。以發(fā)酵酒精時使用的曲霉菌屬為主體，它能和其他微生物共存，尤其對土壤中酯的生成有良好效果。因為酒精生成力強，能防止蛆和其他害蟲的發(fā)生，并可以消除惡臭。

二、EM原露在信鴿所以中作用

EM原露具有改良土壤、增強光合作用、改善水質(zhì)、除臭糞、促生長、抗病、改善信鴿品質(zhì)、抑菌等功效。用EM原露飼養(yǎng)信鴿，有幾大好處：

1、提高成活率

⑴使有益菌群迅速在腸道內(nèi)占據(jù)優(yōu)勢，調(diào)節(jié)腸道內(nèi)微生態(tài)平衡。

⑵對腸道無任何刺激，保護腸道內(nèi)黏膜。

⑶有效預防雛雞白痢、大腸桿菌等疾病的發(fā)生。

⑷保肝護腎，調(diào)節(jié)機體內(nèi)分泌，提高免疫力。

⑷有效促進信鴿生長發(fā)育。

通過飼喂EM原露，可大大提高信鴿成活率，提高5~10%。

2、提高免疫力

用EM原露長期飼喂信鴿，可以有效的刺激胸腺、脾臟和法氏囊的發(fā)育，提高信鴿的免疫功能，同時能明顯增強淋巴細胞的活性，明顯增強機體的細胞免疫和體液免疫，從而大大降低疾病防治費用，提高信鴿和肉鴿飼養(yǎng)的綜合效益。

3、提高飼料轉(zhuǎn)化率

用EM原露制料長期飼喂，克激活與蛋白質(zhì)和碳水化合物代謝有關的酶，從而提高它們的效率。使鴿飼料的消化率明顯的提高，有助于消化過程。同時能提高鴿子對鈣、磷等多種微量元素的吸收利用率。

4、有效減少發(fā)病率

用EM原露制作料飼喂信鴿，可以有效的阻止沙門氏菌、大腸桿菌、霉菌、球蟲等致病微生物和寄生蟲的生長和繁殖，促進有益菌的生長，長期維護腸道微生物菌群的平衡，有效減少發(fā)病機率。

5、促進生長，提高品質(zhì)

通過飼喂EM原露制作料，可明顯的促進鴿子的生長發(fā)育，提高平均重量，可大幅的提高信鴿的品質(zhì)。

6、改善飼養(yǎng)環(huán)境

用EM原露制作料飼喂信鴿，還可以改善鴿舍環(huán)境的功能，使鴿舍內(nèi)二氧化碳、氨氣等有害氣體顯著減少生物論文，減少量為85%以上。鴿糞臭味明顯下降。

綜上所述，通過飼喂EM原露制作料，可以大幅提高鴿子成活率，降低信鴿養(yǎng)殖綜合成本 20%左右。

三、EM原露在信鴿飼養(yǎng)中的具體應用

EM原露用于信鴿最簡單的使用辦法，就是按一定比例兌水后直接給鴿子飲用。具體作法是：用1份（毫升）EM原露，1份（克）紅糖，加水至一定比例即可。其中紅糖是作為一種營養(yǎng)物質(zhì)，它能保持EM原露中菌群的活力，實際使用中也用過葡萄糖和蜂蜜代替。

1、用于鴿棚及環(huán)境消毒

用EM原露，紅糖、加250~500倍水配成稀釋液噴灑鴿舍及周圍環(huán)境。開始每星期1次，逐漸減少到15天1次。實際運用中只要把鴿子每天喝剩下的EM稀釋液用來消毒鴿舍即可。鴿子飲用EM原露和鴿舍噴灑EM原露一段時間后，鴿舍中的臭味會大大降低，連蚊蠅也會減少很多，這是由于EM原露中的微生物能把促成惡臭的物質(zhì)：氨、硫化氫、甲基硫醇等當做食物吃掉（分解掉）這無疑給城市陽臺的養(yǎng)鴿者帶來福音。再不要因為鴿舍產(chǎn)生臭味及引來的蚊蠅與鄰居們發(fā)生糾紛，城市文明養(yǎng)鴿將落在實處。

2、用于日常保養(yǎng)及防病

用EM原露，紅糖，加水配成稀釋液給鴿子全天飲用即可，EM原露的用量為每羽信鴿每天0.25~0.5毫升，加水量為100~200倍，以每天剛好飲完為宜論文的格式。原則是冬天增加濃度，夏季減少濃度。其特點是能明顯改善整個鴿群體質(zhì)，對養(yǎng)功差的鴿舍效果尤其明顯，鴿群抗病能力增強基本上不民生惡性傳染病，消化能力強，糞便形狀好，家飛時間延長，飛徑半徑大，訓放整體歸巢率高，對照使用注射用氨基酸的鴿群，效果毫不遜色，且成本降低十幾倍。

3、防治信鴿體內(nèi)外寄生蟲

其特點是內(nèi)服不產(chǎn)生毒付作用，非常安全，同時又起到對鴿子身體的保健作用。因此，在比賽期間也能應急使用。外用洗澡也很有特點，有不少鴿友喜歡用高錳酸鉀（PP粉）溶于水中給鴿子洗澡，雖然也能起到驅(qū)蟲，消毒作用，但高錳酸鉀是一種強氧化劑，在殺菌的同時也會加速信鴿羽毛的老化，使其失去光澤而干枯。而EM原露中微生物的特點是能產(chǎn)生抗氧化作用的物質(zhì)，使用它給鴿子洗澡，既能驅(qū)蟲消毒，又能對鴿子的羽毛起到非常好的護理作用。

EM原露可配制成防蟲液，用來驅(qū)除鴿子體內(nèi)外寄生蟲。 鴿子體內(nèi)驅(qū)蟲時用EM防蟲液加500倍水飲用1天生物論文，1星期后再飲用1天即可。驅(qū)除體外寄生蟲可用EM防蟲液加1000 倍水給鴿子洗澡，每星期1次，實際應用中用EM原露直接放在水中給鴿子洗澡，也有驅(qū)蟲效果，并能使鴿子羽毛油滑光亮。

4、用于治療鴿病

其特點是簡便實用，無論是什么病，不需要做治療前的醫(yī)學檢驗，不用擔心會用錯藥，EM原露對鴿子的消化系統(tǒng)疾病，呼吸系統(tǒng)疾病和一些疑難難癥都能治療，特別是對令鴿友最頭痛的多病菌復合有一舉多得的效果，同時EM原露治病沒有其它化學藥劑在治病的過程中產(chǎn)生的毒付作用，抗藥性及二次感染等等一系列后顧之憂。而且用EM原露治好的鴿子身體素質(zhì)恢復極快，這是由于在鴿病治好的同時，鴿子消化系統(tǒng)也已調(diào)整到位，這時給鴿子進行營養(yǎng)補充會得到良好的吸收，使鴿子體質(zhì)迅速恢復。

⑴如果是全棚發(fā)生傳染性疾病，（如沙門氏菌，新城疫球蟲病等）可用EM原露，紅糖，（這時不能使用蜂蜜）加水50倍配成稀釋液全天飲用，觀察鴿子精神狀態(tài)及烘便，以此判斷使用效果，一般3~7天即可完全控制病情，如用后2~3天內(nèi)無明顯效果，可以加大濃度。病情控制后，要繼續(xù)按治療濃度飼喂兩天，以便鞏固治療效果，然后恢復日常保養(yǎng)濃度。

⑵對病情比較嚴重或個別發(fā)生病情的鴿子，可用EM原露紅糖加水10倍配成稀釋液，用注射器灌服，每次10毫升每日2~3次，對病情特別嚴重的鴿子我們的做法是直接灌服EM原露，每次3~5毫升。

⑶對念珠菌，毛滴蟲，霉菌感染的信鴿，一般口腔中生有黃白色沉積物，這時要先將沉積物去掉，然后在口腔內(nèi)滴幾滴EM原露，并內(nèi)服治療濃度的EM原露，一般2~3天以夠治好。

⑷EM原露還可用于防治信鴿飼料的黃曲霉菌中毒，治療各種原因引起的外傷，眼部啄傷，傷口發(fā)炎等具有止血預防感染消炎生物論文，快速愈合創(chuàng)口的神奇效果。

5、用于信鴿賽前賽后的調(diào)整和老幼鴿的保健

由于EM原露中的微生物能分泌出有機酸、多糖類、多種維生素、抗生素、各種生化酶、氨基酸和氧等有益物質(zhì)，既可調(diào)正各器官的功能延緩細胞衰老，激活T細胞，分解亞硝基化合物及其它有機化合物，又可增加營養(yǎng)，促進對其它營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，從而改善鴿子體內(nèi)的微生態(tài)平衡，使鴿子保持健康的體質(zhì)。因此EM原露可用于鴿子的育種，種鴿（特別指高齡鴿）配對前15天，每天灌服10毫升，幼鴿出營后7天至出棚，每天灌服3~5毫升，賽鴿參賽前7天開始每天服10毫升，信鴿比賽歸巢后立即灌服20毫升，（此時配羊稀釋液時可用蜂蜜代替紅糖），之后連服3天，然后轉(zhuǎn)為日常保健濃度飼喂。

注意：在上述調(diào)整中，如信鴿出現(xiàn)體重過重，可適當增加信鴿日常訓練的運動量，減少飼料中油脂性飼料的比例，其它添加劑均可不用或少量使用，比賽期間可適當給賽鴿增加營養(yǎng)，可選擇多種維生素和中草藥制劑。

篇3

1PCNA的特點

PCNA是一種分子量為36KD的蛋白質(zhì)，在細胞核內(nèi)合成，并存在于細胞核內(nèi)，為DNA聚合酶δ的輔助蛋白。在細胞核內(nèi)存在可溶性與不溶性兩種PCNA，可溶性PCNA在細胞周期各期中均有表達，其量在DNA合成過程中不發(fā)生明顯變化，易被去污劑提取、甲醇破壞；不溶性PCNA較穩(wěn)定，不易被去污劑洗脫、甲醇破壞，這種PCNA在G0～G1期細胞中無明顯表達，G1晚期，其表達大幅度增加，S期達到高峰，G2～M期明顯下降，其量的變化與DNA合成一致，檢測其在細胞中的表達，可作為評價細胞增殖狀態(tài)的一個指標[1,2,4]。

2腫瘤中PCNA的研究

腫瘤細胞具有旺盛的增殖活性，而PCNA可作為評價細胞增殖狀態(tài)的指標。因此，國內(nèi)外在許多腫瘤中進行了PCNA的研究，涉及PCNA與腫瘤發(fā)生發(fā)展[5,6]、分級[1,7～10]、分期[1,10]、放療敏感性[11,12]、預后[1,7,8,10,13～20]、復發(fā)和轉(zhuǎn)移[1,21]、死亡原因[20]、腫瘤標志物[18,22]等各個方面的相關性，得出了許多結(jié)論，但在某些方面因作者和所研究腫瘤的不同，還存在一些爭議，即使尚沒有爭議的結(jié)論，也是從一種或幾種腫瘤中得出的，這些結(jié)論是否適用于所有腫瘤，仍有待進一步研究。

3肺癌中PCNA的研究

PCNA在肺癌中的研究也較多，許多作者致力于這方面的探討，期望找到有意義、有價值的結(jié)果，但到現(xiàn)在為止，PCNA在肺癌中研究所得出的一些結(jié)果也同樣存在爭論[23]。

3.1PCNA與肺癌發(fā)生發(fā)展的關系

夏書月等[6]在研究肺鱗癌的發(fā)生、發(fā)展過程中，發(fā)現(xiàn)PCNA的表達有逐漸增高，陽性細胞數(shù)逐漸增多的趨勢。在輕、中、重度不典型增生、原位癌及浸潤癌中，PCNA標記指數(shù)分別為12.5±8.7、43.3±14.9、68.1±9.1、74.6±8.2、65.4±23.6，與正常和輕、中度不典型增生的上皮相比，浸潤癌、原位癌和重度不典型增生的上皮細胞PCNA標記指數(shù)明顯升高，PCNA陽性細胞數(shù)也明顯增多。認為PCNA表達為細胞異常增殖的標志，可作為肺鱗癌早期診斷的參考指標。但這僅是在肺鱗癌中的初步探索，且病例數(shù)較少，能否作為肺鱗癌早期診斷參考指標，還需進一步驗證。

3.2PCNA與肺癌分型的關系

有作者[15,24]認為PCNA在不同類型肺癌中表達不同，鱗癌PCNA標記指數(shù)平均約為52％，腺癌為49％，大細胞肺癌為76％，小細胞肺癌為63％。何杰等[25]的結(jié)果為：肺鱗癌標記指數(shù)為0.51±0.23，腺癌為0.69±0.34。在同一類型不同亞型之間也表達不同。王恩華等[13]在86例肺腺癌中對各亞型進行分析：PCNA在細支氣管肺泡癌中表達約為0.22±0.17，腺泡狀腺癌中約為0.36±0.12，大細胞癌中約為0.67±0.10。但也有作者認為PCNA的表達僅能反映細胞的增殖狀態(tài)，與組織學類型無關。Castellano[26]、Fontanini[14]、Fujii[27]等支持這種觀點。

3.3PCNA與肺癌分化程度的關系

有研究表明：PCNA表達隨肺癌分化程度的增高而減少。王恩華[13]在肺腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)：高分化組最低，PCNA標記指數(shù)約為0.19±0.10，中分化組稍高，約為0.35±0.10，低分化組最高，約為0.55±0.17；何杰等[25]分別分析了肺鱗癌、肺腺癌中PCNA的表達，發(fā)現(xiàn)PCNA標記指數(shù)與腫瘤分級呈正相關，Zhao等[28]在73例肺癌中得出了同樣結(jié)論。可見肺癌中PCNA的表達可反映肺癌細胞分化的好壞，預示腫瘤惡性度的高低。這與在許多種其他腫瘤中的研究發(fā)現(xiàn)基本一致。

3.4PCNA與肺癌分期的關系

大多數(shù)研究表明：PCNA表達與肺癌分期相關，分期愈晚，PCNA表達愈高。Ishida等[29]在211例非小細胞肺癌中統(tǒng)計出Ⅰ、Ⅱ、Ⅲa、Ⅲb期各期PCNA表達平均值分別為30％、24％、40％、50％，有逐漸增高的趨勢，但Ⅰ、Ⅱ期差別不大。王恩華等[13]的研究也認為，肺癌中PCNA的表達與N分期及M分期相關，隨著分期的增加，PCNA表達增加。但也有作者持相反意見，F(xiàn)ontanini等[14]在周圍型非小細胞肺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，PCNA的表達與分期無關，他們的結(jié)果為：T1期PCNA表達值平均約為18％，T2期約為10％。是否是由于在早期（Ⅰ、Ⅱ）肺癌中PCNA表達受宿主免疫系統(tǒng)抑制，變化不明顯，而晚期肺癌因免疫抑制減弱，表達明顯增加，還有待繼續(xù)探討。

3.5PCNA與肺癌血管受侵的關系

Fontanini等[14]在40例周圍型，淋巴結(jié)陰性的非小細胞肺癌(NSCLC)中發(fā)現(xiàn)：PCNA的表達與血管受侵明顯相關，有血管受侵組的PCNA表達明顯高于無血管受侵組，平均值分別為40％和10％。Fujii等[27]也發(fā)現(xiàn)PCNA表達與肺癌血管受侵明顯相關。這可能與PCNA高表達者分化差，惡性度高，容易侵蝕血管有關。

3.6PCNA與肺癌預后的關系

部分作者認為：PCNA表達愈低，其生存時間愈長，預后愈好。王恩華等[13]分析了86例手術(shù)切除的肺腺癌病例，發(fā)現(xiàn)術(shù)后存活3年以內(nèi)組與5年以上組之間，PCNA表達值有顯著差異，其標記指數(shù)分別為0.42±0.20和0.22±0.15;Ishida等[29]在Ⅰ期NSCLC中也發(fā)現(xiàn)，5年生存組中，PCNA(＋)組生存率明顯低于PCNA(－)組；Fujii等[26]的研究結(jié)果也支持這種觀點。但有相當多的作者認為單憑PCNA不能評價NSCLC的預后，Matturri[30]、Monraval[31]、Castellano[26]、Ebina[32]等各自分別研究了PCNA的表達與術(shù)后NSCLC生存時間的關系，沒找到明確的相關性。考慮這是由于肺癌的預后是由多種因素：如病理類型、病理分期、分化、治療情況、合并癥、年齡、身體狀況、PCNA的表達等綜合決定的，單憑PCNA這一種因素，難以預測肺癌的預后。

3.7PCNA與肺癌復發(fā)的關系

Ogawa等[33]在35例術(shù)后復發(fā)的Ⅰ期NSCLC中發(fā)現(xiàn)，PCNA(＋)組復發(fā)時間明顯短于PCNA(－)組，中位無瘤生存時間分別為2.5年和4年，認為PCNA可預測Ⅰ期NSCLC術(shù)后復發(fā)時間的長短。但所研究病例太少，范圍狹窄，結(jié)果有待進一步證實。

3.8PCNA與肺癌其它標志物的相關性

Fontanini等[14]在周圍型肺癌中發(fā)現(xiàn)PCNA表達在DNA異倍體中明顯高于DNA整倍體，并與異倍體DNAS期分數(shù)明顯相關，PCNA表達高的分裂指數(shù)高于PCNA表達低的。還有研究[13,15,24,28,29,34]表明肺癌中PCNA的表達與細胞構(gòu)成、DNA指數(shù)、AgNORs計數(shù)、Ki67等相關。這些多為首次報道，不知結(jié)果能否重復，若結(jié)論能確證，則無論在臨床上，還是基礎研究中，PCNA的應用和研究將會更為廣泛。

從上可見，肺癌中PCNA的研究已深入到了肺癌的各個方面，但在許多方面所得結(jié)果還不統(tǒng)一，造成這種結(jié)果不一致的原因很多，初步分析包括以下諸多因素：1)腫瘤本身的因素：腫瘤與腫瘤之間及同一腫瘤不同部位之間，細胞增殖都存在很大的差異[26,36,37]，致使PCNA表達不均。2)取材的影響：由于腫瘤內(nèi)部不同部位之間PCNA表達不均，取材時可能取到高表達區(qū)，也可能取到中表達區(qū)或低表達區(qū)，以致計數(shù)結(jié)果不能代表整個腫瘤情況。3)制片過程中的影響因素：組織固定時福爾馬林的濃度，固定時間的長短，烤片時溫度高低及烤片時間等對PCNA的抗原性都有影響。固定液濃度過高，固定時間過長，烤片溫度過高，烤片時間過長均會降低PCNA的抗原性乃致使抗原性消失[1,2]。4)免疫組化染色過程中的影響因素：免疫組化染色過程中所用抗體不同，所得PCNA結(jié)果不同；微波爐加熱能恢復PCNA的抗原性，增強切片的免疫組化染色效果[37]，使用微波爐處理切片，能增加檢測的數(shù)值；另外抗體的滴度，內(nèi)源性過氧化物酶封閉情況，DAB顯色時間長短，蘇木素襯染的背景深淺等均會影響染片的效果，產(chǎn)生假陰性或假陽性，使檢測結(jié)果發(fā)生變化。5)結(jié)果判斷的影響：由于每個人所定的陰陽性染色標準不同，選取視野不同，計數(shù)細胞總數(shù)不同，也造成了一定的人為偏差。

由于實驗中存在以上諸多影響因素，不同作者在肺癌中所研究出的結(jié)果或在不同腫瘤中所研究出的結(jié)果，都難以對照相比，因此PCNA的免疫組化研究有必要采用統(tǒng)一的標準，減少實驗誤差和人為偏差，使彼此的結(jié)果具有可比性。

總之，無論在整個腫瘤方面，還是單在肺癌這一方面，PCNA的研究都是較多的，得出了許多有臨床應用價值的結(jié)果，但由于腫瘤本身的變異性及人們研究方法的差異，致使所得結(jié)果存在一些爭議，這有待進一步驗證，以便能達到一致的結(jié)論，應用于臨床，指導臨床實踐。

作者單位：劉躍平綜述汪楣沈瑜殷蔚伯中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院放療科北京市100021

參考文獻

1魏永昆.增殖細胞核抗原與腫瘤研究進展.國外醫(yī)學腫瘤學分冊,1996;23(增刊):47～9

2黃杰雄,黃致治.增殖細胞核抗原的研究進展.國外醫(yī)學生理病理科學與臨床分冊,1994;14(1):9～11

3RochelleL,GarciaMD,Coltreraetal.Analysisofproliferativegradeusinganti－PCNA/cyclinmonoclonalantibodiesinfixed,embeddedtissues.AmJpathols1989;134(4):733～9

4TakasakiY,FishwildD,TanEM.Characterizationofproliferatingcellnuclearantigenrecognizedbyautoantibodiesinlupussera.JExpMed,1984;159:981～92

5KabayashiI,MatsuoK,IshibashiY,etal.ProliferativeactivityindysplasiaandcarcinomainsituoftheuterinecervixanalyzedbyPCNAimmunostainingandagNORstaining.HumPathol,1994;25:198

6夏書月,姜彥多,何安光,等.肺鱗癌發(fā)生過程中p53蛋白和增殖細胞核抗原的表達.中國腫瘤臨床,1995;22(11):772～5

7吳名耀,鄭瑞明,沈健,等.食管癌增殖細胞核抗原的免疫組化研究.中華病理學雜志,1993;22(4):239～40

8WoodsAL,HallPA,ShepherdNA,etal.Theassessmentofproliferatingcellnuclearantigen(PCNA)immunostaininginprimarygastro－intestinallymphomasanditsrelationshiptohistologicalgrade,S＋G2＋M,phasefraction(flowcytometricanalysis)andprognosis.Histopathology,1991;19:21～7

9AllegranzaA,GirlandoS,ArrigoniGLetal.Proliferatingcellnuclearantigenexpressionincentralnervoussystemneoplasms.VirchowsArchAPatholanatHistopathol,1991;419(5):417～23

10TsaiST,JinYT.Proliferatingcellnuclearantigenexpressionin.oralsquamouscellcarcinomas.JOralPatholMed,1995;24:313～5

11ChristopherGW,WarlandG,HaganMP,etal.Tumorproliferatinginrectalcancerfollowingpreoperativeirradiation.JClinOncol,1995;13(6):1417～24

12祝淑釵.食管癌PCNA,CYCLIND表達和DNA含量對術(shù)前放療預后的影響：[學位論文].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學，1997.

13王恩華,劉閨男,赫明昌.增殖細胞核抗原表達與AgNORs圖像分析在判斷肺癌預后上的應用.中華病理學雜志,1995;24(3):143～5

14FontaniniG,MacchiariniP,PepeS,etal.Theexpressionofproliferatingcellnuclearantigeninparaffinsectionsofperipheral,node－negativenon－smallcelllungcancer.Cancer,1992;70(6):1520～27

15OyamaT,MitsudomiT,MizoueT,etal.Proliferatingcellnuclearantigenmaybesuperiortoargyrophilicnucleolarorganizerregionsinpredictingshortenedsurvivalofpatientswithnon－smallcelllung&nbsp;cancer.SurgOncol,1995;4(2):83～9

16RussoJ,FrederickJ,OwnbyHE,etal.Predictorsofrecurrenceandsurvivalofpatientswithbreastcancer.AmJClinPathol,1987;88:123～31

17OkaK,HoshiT,AraiT.PrognosticsignificanceofthePC10indexasaprospectiveassayforcervicalcancertreatedwithradiationtherapyalone.cancer,1992;70(6):1545～50

18楊竹林,李永國,黃生福,等.胃癌組織中PCNA評分和Bcl－2.p53蛋白表達及相互關系.中國腫瘤臨床,1997;24(11):811～4

19YuCCW,HallPA,FletcherCDM,etal.Haemangiopericytomas:theprognosticvalueofimmunohistochemicalstainingwithamonoclonalantibodytoproliferatingcellnuclearantigen(PCNA).Histopathology,1991;19:29～33

20劉文勝.增殖細胞核抗原(PCNA)與聲門上喉鱗癌的關系及臨床意義：[學位論文].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學，1997.

21阮幼冰,武忠弼,IvankovicS.增殖細胞核抗原及表皮生長因子受體在大鼠肝癌與胃癌中的表達.中華病理學雜志,1994;23(5):274～7

22PichA,PontiR,ChiusaL,etal.MIB－1,Ki67,andPCNAscoresandDNAflowcytometryinintermediategrademalignantlymphomas.JClinPathol,1994;47:18～22

23AbeS.Molecularbiologicalprognosticmarkersinlungcancer.NipponGekagakkaiZasshi,1997;98(1):2～7

24KawaiT,SuzukiM,KonoS,etal.ProliferatingcellnuclearantigenandKi－67inlungcarcinoma.CorrelationwithDNAflowcytometricanalysis.cancer,1994;74(9):2468～75

25何杰,汪萬英,姚敏.肺癌C－erB－2,p21和PCNA的表達及意義.浙江腫瘤,1998;4(1):8～10

26CastellanoVM,SoteloT,BallestinCetal.Analysisofproliferatingcellnuclearantigen(PCNA)expressionin24casesofprimarynon－smallcellpulmonarycarcinomasandcorrelationwithsurvival.Archbronconeumol,1996;33(3):127～31

27FujiiM,MotoiM,SaekiH,etal.Prognosticsignificanceofproliferatingcellnuclearantigen(PCNA)expressioninnon－smallcelllungcancer.ActaMedokayama,1993;47(2):103～8

28ZhaoT,ZhangYL,LiCD.Acomparisonofproliferatingcellnuclearantigenimmunostaining,nucleolarorganizerregionstaininginlungcancer.ChungHuachiehHoHoHuHsiTsaChih,1993;16(6):342～4

29IshidaT,KanekoS,AkazawaKetal.Proliferatingcellnuclearantigenexpressionandargyrophilicnucleolarorganizerregionsasfactorsinfluencingprognosisofsurgicallytreatedlungcancerpatients.Cancerres,1993;53(20):5000～3

30MatturriL,LavezziAM,GrignaniF,etal.Theprognosticvalueofcellproliferationinnon－smallcelllungcancerassessedwithtritiatedthymidineandanti－PCNAantibodies.EurJCancer,1994;30A(9):1397～8

31AlemanyMonravalP,CebolladaM,VillalbaS,etal.Studyoftheexpressionofproliferatingcellnuclearantigenandp185innon－smallcelllungcarcinoma.archBronconeumol,1996;32(4):165～9

33EbinaM,SteinbergSM,MulshineJL,etal.Relationshipofp53overexpressionandup－regulationofproliferatingcellnuclearantigenwiththeclinicalcourseofnon－smallcelllungcancer.CancerRes,1994;54(9):2496～503

34OgawaJ,TsurumiT,YamadaS,etal.BloodvesselinvasionandexpressionofsialylLewisxandproliferatingcellnuclearantigeninstageInon－smallcelllungcancer.Relationtopostoperativerecurrence.Cancer,1994;73(4):1177～83

35FontaniniG,PingitoreR,BiginiD,etal.Growthfractioninnon－smallcelllungcancerestimatedbyproliferatingcellnuclearantigenandcomparisonwithKi－67labelingandDNAflowcytometrydata.AmJPathol,1992;141(6):1285～90

36CareyFA,FabbroniG,LambD.Expressionofproliferatingcellnuclearantigeninlungcancer:asystematicstudyandcorrelationwithDNAploidy.histopathology,1992;20(6):499～503

篇4

據(jù)該論文的作者之一、中科院生物物理研究所研究員李國紅介紹，遺傳信息DNA是經(jīng)過凝縮之后聚集在只有幾個微米的細胞核里的，其核小體以密集堆積的方式形成了一種直徑在30納米左右的管狀螺旋體，即30納米染色質(zhì)纖維。目前國際上對30納米染色質(zhì)纖維這一超大分子復合體的組裝和調(diào)控機理還不清楚，對于其精細結(jié)構(gòu)組成也有很大爭議，“30多年來，對其結(jié)構(gòu)的研究一直是現(xiàn)代分子生物學領域面臨的最大挑戰(zhàn)之一”。

李國紅與生物物理所研究員朱平經(jīng)過四五年的密切合作與不懈努力，成功建立了一套染色質(zhì)體外重建和結(jié)構(gòu)分析平臺，利用一種冷凍電鏡單顆粒三維重構(gòu)技術(shù)，在國際上率先解析了30納米染色質(zhì)的高清晰三維結(jié)構(gòu)，在破解“生命信息”的載體――30納米染色質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)研究中取得了重大突破。朱平說，這一結(jié)構(gòu)提示了30納米染色質(zhì)纖維以4個核小體為結(jié)構(gòu)單元，各單元之間通過相互扭曲折疊形成了一個左手方向的雙螺旋高級結(jié)構(gòu)，它還明確了組蛋白H1在30納米染色質(zhì)纖維形成過程中的重要作用。

據(jù)了解，本研究論文的評審人曾評論說：“30納米染色質(zhì)結(jié)構(gòu)是最基本的分子生物學問題之一，困擾了研究人員30余年”，該結(jié)果是“目前為止最有挑戰(zhàn)性的結(jié)構(gòu)之一”，“在理解染色質(zhì)如何裝配這個問題上邁出了重要的一步”。

篇5

糖尿病視網(wǎng)膜的危害情況

隨著我國國民經(jīng)濟的發(fā)展，生活方式的改變，大家生活好了，可是糖尿病的發(fā)病率卻在逐年增加。據(jù)統(tǒng)計，目前全國糖尿病的患病人數(shù)在4000萬人以上，這當中約30%左右可能已經(jīng)有糖尿病視網(wǎng)膜病變，這樣，糖尿病視網(wǎng)膜病變的患者應該會有1000萬，而這之中視力受到嚴重威脅的可能要在300萬左右。即使在美國這樣的發(fā)達國家，糖尿病引起的失明每年大概1，2000～2，4000人，可見糖尿病對我國人民視覺的影響有多大。作為眼科醫(yī)生，我們幾乎每天都能見到因為糖尿病而失明的患者，因此，感到肩上的擔子是十分沉重的。

糖尿病視網(wǎng)膜病原因

是否發(fā)生糖尿病視網(wǎng)膜病變?nèi)Q于患病時間的長短和血糖、血壓、血脂的控制情況以及個體的差異性。一般來說，剛發(fā)生糖尿病是不會有糖尿病視網(wǎng)膜病變的，但隨發(fā)病時間延長，一般7年～8年以后，就慢慢開始出現(xiàn)糖尿病視網(wǎng)膜病變了，隨著時間延長病變會越來越加重。當然，如果您的血糖、血壓、血脂控制得很好，生活方式很健康，心態(tài)也很好，可能病變發(fā)生得晚，我們也見過患糖尿病50多年，而眼底竟然沒有發(fā)生病變的。個體差異也很大，有的個體盡管血糖控制得不錯，但發(fā)生糖尿病視網(wǎng)膜病變卻很厲害。

另外，1型糖尿病發(fā)生糖尿病視網(wǎng)膜病變早且嚴重，2型糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生視網(wǎng)膜病變要晚一些。

法治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的方法

近年來醫(yī)藥科技進步很快，尤其是抗血管生成藥物的出現(xiàn)，使得糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療有了更多的治療選擇。比如，激光聯(lián)合抗血管生成藥物玻璃體腔注射治療，對控制黃斑水腫會有更好的效果；又如，對已經(jīng)有新生血管形成的病例，玻璃體腔注射抗血管生成藥物，可以幫助新生血管的退縮，尤其新生血管在視神經(jīng)上無法激光時。

在有些糖尿病視網(wǎng)膜病變晚期，必須手術(shù)的病例，也可以先注射藥物，然后再手術(shù)，可以減少術(shù)中出血。

糖尿病引起的青光眼的治療方式

首先采用先注射抗血管生成藥物，將虹膜新生血管退縮，其次再聯(lián)合眼底激光、或睫狀體光凝、或小梁切除術(shù)，在最短的時間內(nèi)把眼壓控制下來。這非常關鍵，如果眼壓很高，又遲遲得不到控制，最后視神經(jīng)萎縮了，就什么都晚了。因此，必須刻不容緩地采取措施，將虹膜新生血管退縮，控制眼壓。

糖尿病視網(wǎng)膜病變手術(shù)治療

篇6

關鍵詞：花椒；延胡索；沒藥；三七；止痛；毒理學；研究進展

中圖分類號：R285文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2009）02-0060-03

通過對先秦至現(xiàn)代有確切止痛作用的中草藥文獻資料和前期動物實驗的廣泛調(diào)研，共研究篩選出外用于肛腸病術(shù)后創(chuàng)面止痛療效確切的止痛中藥4味：花椒、延胡索、沒藥、三七［1、2、3、4、5］。現(xiàn)就以上四味止痛中藥的毒理學方面的研究進展，進行資料收集，綜述如下。

1 花椒的研究進展

1.1 概述

花椒具有溫中散寒，止痛，溫腎，燥濕，殺蟲的功效，起止痛作用的有效成分為揮發(fā)油。

1.2 毒理學研究進展

急性毒性試驗：牛兒醇對大鼠口服的LD50為4.8g/kg，兔靜注為LD50g/kg。過量可引起呼吸極度困難而致動物死亡［6、7］。

臨床報道：花椒醋浸液及蛋清外用治療間擦型足癬27例，效果滿意，無明顯毒副作用［8］。

2 延胡索的研究進展

2.1 概述

延胡索具有活血、行氣、止痛的功效；起止痛作用的成分中，延胡索乙素的止痛作用最強。

2.2 毒理學研究進展

急性毒性試驗：延胡索醇浸膏對小鼠口服的LD50為（100±4.53）g/kg，腹腔給藥為（7.5±0.3）g/kg。延胡索乙素、丙素、甲素給小鼠靜脈注射的LD50分別為146、151～158、100mg/kg［9］。癸素腹腔注射的LD50為127mg/kg。延胡索乙素、癸素、丑素及寅素給小鼠靜脈注射的最小致死量分別為102mg/kg、42mg/kg、150mg/kg、41mg/kg［9］。

亞急性毒性試驗：用藥1月，未發(fā)現(xiàn)明顯毒副作用［10］。

麻醉貓靜脈注射延胡索乙素40mg/kg后，則使血壓略降，心率減慢，心臟功能無明顯變化。正常兔靜脈注射延胡索乙素20～40mg/kg，呼吸短暫興奮，劑量增大至60mg/kg，則呼吸出現(xiàn)抑制。猴1次靜脈滴注延胡索乙素85或100mg/kg，或口服80mg/kg無明顯毒性；靜滴180mg/kg，先出現(xiàn)短時興奮，繼而出現(xiàn)較嚴重的抑制，極度鎮(zhèn)靜和較深度的催眠作用，感覺并不喪失，隨后發(fā)生四肢震顫性帕金森氏綜合征，心電圖和呼吸均不正常，尿中有管型，數(shù)天后可恢復。當每天靜滴85mg/kg，連續(xù)2周后，除出現(xiàn)鎮(zhèn)靜、催眠作用外，于第4-7天的反應基本與靜滴180mg/kg者相似。肉眼觀察內(nèi)臟無明顯變化，組織病理檢查發(fā)現(xiàn)心臟和腎臟有輕度渾濁腫脹［11］。

臨床報道：趙桂芬，靳國君等報道：患者左上肢患有靜脈炎，疼痛不止，故首次涂延胡索浸泡液止疼。涂后約30min，患者自覺全身不適，嚼心、頭暈。lh后癥狀明顯加重，繼而出現(xiàn)胸悶氣短、心悸、口唇及四肢未稍麻木、抽搐，全身皮膚潮紅瘙癢［12］。

3 沒藥的研究進展

3.1 概述

沒藥具有活血止痛、消腫生肌的功效，起止痛作用的有效部位為揮發(fā)油。

3.2 毒理學研究進展

細胞毒活性：從沒藥中得到的三萜對人乳腺癌細胞系有弱的細胞毒活性。沒藥對艾氏腫瘤細胞有細胞毒作用。沒藥中一系列倍半萜對癌細胞有細胞毒活性［13］。沒藥有細胞毒和抗腫瘤活性，抑制有絲分裂，但對鼠正常細胞不誘導裂變。

急性毒性試驗：在3g/kg劑量下沒有觀察到毒性指標，沒有死亡，但鼠的運動能力下降，可能是由于揮發(fā)油對中樞神經(jīng)的抑制作用。

長期毒性試驗：100mg／（kg•d）對鼠沒有慢性毒性，但給予沒藥后體重增加明顯，重要器官的平均重量與對照組比較沒有差別。與對照組比較，治療組、附睪、精囊的重量顯著增加，對沒有毒性效應，紅細胞和血紅蛋白水平顯著提高。因為沒藥中含有甾類，影響體內(nèi)雄激素水平。生化研究方面，與對照組比較肌酸激酶同工酶MB和血清谷草轉(zhuǎn)氨酶有很小的下降，沒有統(tǒng)計學意義，其他指標沒有變化［13］。

沒藥精油和其中分離到的7種倍半萜對鼠的耳朵有刺激性。

4 三七的研究進展

4.1 概述

三七具有散瘀止血、消腫定痛的功效，人參皂苷Rbl為主要鎮(zhèn)痛成分。

4.2 毒理學研究進展

急性毒性試驗：三七醇提取物小鼠靜注LD50為（836±17）mg/kg［14］。另有報道PNS小鼠靜注LD50為447mg/kg［15］。Rb1小鼠腹腔注射LD50為1208mg/kg，Rg1為1250mg/kg［16］。

亞急性毒性試驗：三七粉1g/kg、PNS0.4g/kg分別給兔灌胃，1次/D，7d為1療程，每療程間歇1d，連續(xù)4療程。除三七粉組血糖有一定降低外，對紅細胞、白細胞及分類、血紅蛋白、凝血時間、血清膽固醇、血清總脂及β-脂蛋白無明顯影響［17］。兔每日喂飼三七絨根700～800mg/kg，連續(xù)2月，血象、肝腎功能及重要臟器組織檢查以及心電圖均無異常［15］。

臨床報道：周曉明［18］報道：三七總皂苷注射液致11例遲發(fā)型藥疹，患者均為在單一使用靜滴三七總皂苷治療心腦血管性疾病過程中出現(xiàn)，且出現(xiàn)時間晚，平均潛伏期達1O.7d，所出現(xiàn)的藥疹反應較輕，其中5例有藥物過敏史，4例有過敏性疾病，經(jīng)停藥，抗過敏，對癥處理后迅速好轉(zhuǎn)。劉桂紅［19］等報道一例71歲女患者注射血塞通注射液（主要成分為三七總皂苷），突感耳后發(fā)癢，并伴有0．5cm×1．0cm大小的皮疹出現(xiàn)，繼而心慌、胸悶、大汗、極度煩躁、并伴有下肢無力癥狀，立即換用5％葡萄糖注射液加10mg地塞米松靜滴，約40min后過敏癥狀減輕，皮疹逐漸消退，癥狀逐漸消失。考慮老年人對此藥耐受性較差，易產(chǎn)生不良反應。吳剛勇，宗剛軍［20］報道一名78歲女患者使用三七總甙注射液（血塞通）500mg靜滴后第5天出現(xiàn)大皰性表皮松解壞死型藥疹，予氫化可的松（400mg／d）、丙種球蛋白（10g／d）、清蛋白（10g／d）及維生素C（4g／d）等治療，并抽吸水泡內(nèi)滲出液后緩解。當三七總甙濃度>16mg／mL時．對細胞有明顯毒性作用，其ID約為0．4nag／mL，對小牛血清耐激的細胞增殖有明顯的抑制作用。與三七凍干粉相比，e總甙對細胞的毒性作用與增殖抑制影響均較明顯［21］。三七草對化膿菌和病毒所致的局部炎性包塊均有一定療效，外敷藥物在控制炎癥發(fā)展的同時，可明顯促進膿液吸收，加速增生和萎縮組織的修復和控制血液中內(nèi)外源致熱原反應［22］。

5 問題與展望

以上4味中藥的藥用歷史悠久，但對其止痛作用的研究仍存在局限：①單方、單方提取物、單體化學成分的止痛作用的研究較中藥復方制劑多，而中藥的止痛作用是多水平，多靶點的，這在一定程度上限制了止痛中藥止痛作用最大限度的發(fā)揮。因此，如何將中藥單方、單方提取物、單體化學成分按中醫(yī)理論，科學、有機的結(jié)合，制成療效更好的中藥復方制劑，將是今后研究止痛中藥的一個方向；②口服、靜脈、腹腔給藥途徑的研究較外用給藥途徑的研究多，某些藥物口服或注射給藥止痛作用不理想，如花椒，這在一定程度上限制了中藥止痛的應用，故如何在藥劑學指導下開展對止痛中藥外用劑型的研究將是今后研究止痛中藥的又一方向；③對中藥毒理學方面的研究較少。毒理機制不明，很大程度限制了臨床用藥的安全性和質(zhì)量可控性，故加強對中藥毒性機制的研究，提高臨床用藥的安全性和質(zhì)量可控性，將是今后研究止痛中藥的又一個方向；④對原材料在止痛過程中究竟能釋放多少有效成分、如何加強對有效成分的釋放、多種有效止痛成分的疊加和拮抗作用的研究較少，而這些研究將直接影響其止痛作用，故在保證原藥材多種止痛成分的情況下，如何提高其有效止痛成分的釋放以及多種止痛成分的疊加作用，將是我們今后研究止痛中藥的另一方向。

參考文獻：

［1］ 劉麗.先秦及秦漢原創(chuàng)性單味鎮(zhèn)痛中藥微米粉末噴灑用于肛腸病術(shù)后創(chuàng)面鎮(zhèn)痛的實驗研究［D］.長沙：湖南中醫(yī)藥大學碩士論文，2008.

［2］ 成立祥.魏晉至五代十國原創(chuàng)性單味鎮(zhèn)痛中藥微米粉末噴灑用于肛腸病術(shù)后創(chuàng)面鎮(zhèn)痛的實驗研究［D］.長沙：湖南中醫(yī)藥大學碩士論文，2008.

［3］ 宋艷.宋金元原創(chuàng)性單味鎮(zhèn)痛中藥微米粉末噴灑用于肛腸病術(shù)后創(chuàng)面鎮(zhèn)痛的實驗研究［D］.長沙：湖南中醫(yī)藥大學碩士論文，2008.

［4］ 李敏.明清至民國原創(chuàng)性單味鎮(zhèn)痛中藥微米粉末噴灑用于肛腸病術(shù)后創(chuàng)面鎮(zhèn)痛的實驗研究［D］.長沙：湖南中醫(yī)藥大學碩士論文，2008.

［5］ 劉揚.1949年以來原創(chuàng)性單味鎮(zhèn)痛中藥微米粉末噴灑用于肛腸病術(shù)后創(chuàng)面鎮(zhèn)痛的實驗研究［D］.長沙：湖南中醫(yī)藥大學碩士論文，2008.

［6］ 山脅忠昭.Geraniolの藥理作用［J］.第一版.日本藥理學雜志，1960，56（6）：210.

［7］ 山脅忠昭.Geraniolの藥理作用［J］.日本藥理學雜志，1962，58（4）：394.

［8］ 劉劍.花椒醋浸液及蛋清外用治療間擦型足癬27例［J］.中國民間療法，2005，13（1）：25.

［9］ 金國章，胥彬.延胡索的藥理研究Ⅰ、延胡索甲、乙和丑的鎮(zhèn)痛作用［J］.生理學報，1957，21（2）：150.

［10］ 蔣彝榮，吳慶仙，李煥亭，等.延胡索治療冠心病的藥理實驗研究［J］.中草藥通訊，1978，（11）：27.

［11］ 馬勝興.延胡索堿對家兔心電圖的影響及其對量效關系的觀察［J］.中西醫(yī)結(jié)合志，1986，6（12）：743.

［12］ 趙桂芬，靳國君，戴玉潔.外用延胡索浸泡液致過敏反應1例［J］.中國中藥志，1994（6）：56.

［13］ 萬文珠，婁紅祥.沒藥的化學成分和藥理作用［J］.國外醫(yī)藥•植物藥分冊，2005，20（6）：236-241.

［14］ 蘇雅，李勤華，張寶恒.三七絨根提取物（76017）對心血管的作用［J］.藥學學報，1979，14（6）：321.

［15］ 郝朝慶，楊帆.三七總皂甙的抗炎作用［J］.中國藥理學報，1986，7（3）：252.

［16］ Kaku T，Miyata T，Uruno T，et al.Chemico-pharmacological studies on saponins of panax ginseng CA Meyer Ⅱ Pharmacological part［J］.ArzneiForsch，1975，25（4）：539.

［17］ 陰健，郭力弓.中藥現(xiàn)代研究與臨床應用［M］.第一冊.北京：學苑出版社，1993.

［18］ 周曉明.三七總皂甙注射液致11例遲發(fā)型藥疹分析［J］.中國現(xiàn)應用藥學雜志，2006，23（1）：43.

［19］ 劉桂紅，陳凌波.血塞通注射液不良反應1例［J］.Chinese Journal of Clinical Healthcare，2006，9（6）：548.

［20］ 吳剛勇，宗剛軍，等. 三七總甙注射液致大皰性表皮松解壞死型藥疹1例［J］.醫(yī)藥導刊報，2007，26（4）：349.

篇7

[關鍵詞]擴張術(shù)；修復；手術(shù)

[中圖分類號]R622 [文獻標識碼]A [文章編號]1008－6455(2007)06－0774－03

1976年Radovan發(fā)明可控式擴張器以來，皮膚軟組織擴張術(shù)已被廣泛應用于臨床，使過去一些難治性疾患(如瘢痕性禿發(fā)、面頸部瘢痕等)經(jīng)擴張后皮瓣修復后，獲得了較好的療效。我國于1985年引進該項技術(shù)，20年來發(fā)表的實驗研究、臨床應用、并發(fā)癥防治等相關論文近千篇。然而，臨床應用的論文討論重點多以擴張器取出、皮瓣轉(zhuǎn)移的文章居多，而對擴張Ⅰ期置入術(shù)重視不夠，論文較少，甚至有不少中青年醫(yī)師都認為擴張器Ⅰ期術(shù)是非常容易的手術(shù)。但通過我們20余年的臨床經(jīng)驗則發(fā)現(xiàn)，擴張器Ⅰ期置入術(shù)十分重要，影響Ⅱ期術(shù)的效果及手術(shù)最終結(jié)果。若擴張器Ⅰ期置入位置不恰當，則給Ⅱ期術(shù)帶來困難，并難以達到預期的效果。下面就擴張器Ⅰ期術(shù)中筆者的經(jīng)驗予以探討總結(jié)。

1 擴張部位的選擇

擴張部位的選擇一般在鄰近組織缺損的正常皮膚軟組織下，設計時一定要考慮Ⅱ期術(shù)時皮瓣轉(zhuǎn)移的位置與方向，采用皮瓣逆行設計的方式，需要擴張部位有多少皮膚可供使用，轉(zhuǎn)移后供區(qū)有無缺損，會不會形成新的切口線，不可避免形成的切口線是否隱蔽，是否順皮紋，與修復后的效果比較是得大于失，還是失大于得，都要全面權(quán)衡。如皮膚軟組織缺損周圍有可供擴張的正常皮膚，最好在擴張后設計直接滑行推進皮瓣修復，它有切口少、能充分利用擴張后的皮膚，無供區(qū)缺損的優(yōu)點；而且設計方便，使手術(shù)變得簡單。這需要在置入擴張器時，能按我們預定方案實施，使擴張器不移位，有目的的定向、定位擴張。這需要術(shù)者在手術(shù)時，剝離的腔隙合適，并注意不會因不同部位組織張力不同及擴張器注水不可避免的重力作用使其下移。如胸三角皮瓣預擴張時，由于肩部組織致密，而胸部近血管蒂部組織疏松，注水后擴張器重力作用，使擴張器常常向內(nèi)、向下移位，肩胸區(qū)則擴張不充分，給Ⅱ期皮瓣轉(zhuǎn)移帶來諸多不便。據(jù)以上特點，在Ⅰ期術(shù)中一定將三角肌區(qū)剝離充分，同時將置入在肩三角肌區(qū)的擴張器閥門固定在肩背區(qū)，使其對擴張器有一牽拉作用。在胸前區(qū)，由于組織疏松，故剝離的腔隙不要大于擴張囊，使腔隙相對狹小些，并將閥門置入頸部鎖骨上區(qū)，對擴張囊也有牽拉固定作用。在術(shù)中注意防止擴張囊移位的同時，我們囑患者在胸部用彈力繃帶固定在擴張的皮膚下方，與術(shù)中采取的措施同時起作用，將擬擴張的皮瓣擴張充分，為Ⅱ期術(shù)帶來便利。

對于較小的瘢痕，準備將擴張囊置入瘢痕下時需要選用較大擴張囊，否則將瘢痕擴大，但正常皮膚擴大不足，很難達到預期效果。

皮膚軟組織擴張Ⅱ期術(shù)，如Ⅰ期置入得當，則相對簡單，多數(shù)為拉攏縫合。只有在Ⅰ期置入不當，才需更多設計，更多切口。對于頦部瘢痕，多采用頜底或頸部皮膚擴張，如頜底有較多正常皮膚時，多采用頜底擴張，在置入擴張器時，擴張器剝離的范圍不應超越頸頜角，否則在擴張時，擴張器注滿了液體，只是單純將頸頜角擴起，即將頸頜角的凹陷填平，但并未充分使皮膚擴張，術(shù)后上提皮膚，則頸頜角消失，頸部失去了優(yōu)美的曲線，同時擴張后皮膚回縮，下唇則外翻，雖將頦部的瘢痕切除了，但又造成了新的畸形。而不超越頜頸角將擴張器置入頜底，由于頸頜角的限制作用，則將頜底的皮膚充分擴張，術(shù)后不會致頜頸角消失和下唇外翻，則效果滿意。

2　擴張器容量的選擇

據(jù)我院的臨床經(jīng)驗，在頭部每修復1cm×1cm禿發(fā)區(qū)，則需要擴張器容量為3.5～4.0ml；面部修復1cm×1cm瘢痕，則需要6～8ml擴張器容量；頸部為8～12ml，軀干和四肢介于兩者之間。近年我們對以上容積又有了新的認識，對于非功能部位，非器官集中部位，則置入相對缺損所需修復面積推算后容量較大的擴張器，這樣將皮膚充分擴張，并將術(shù)后回縮計算到擴張面積中去，術(shù)后由于皮膚組織量充裕，術(shù)后切口松弛則瘢痕細小。而對于器官較集中的面部，不但要考慮到修復缺損，同時要考慮到不使口、鼻、眼移位、變形及面部雙側(cè)輪廓的對稱。故此時要充分考慮到影響因素，權(quán)衡利弊，這樣才能達到良好的效果。

3　手術(shù)方法的探討

擴張器Ⅰ期手術(shù)切口的選擇，可選在正常皮膚、正常皮膚與病損交界及病損上，根據(jù)具體的患者采用個性化方案。切口可采用平行于擴張器的長軸或垂直于擴張器長軸。與擴張器長軸平行的切口，有利于擴張器腔隙的止血，而垂直于擴張器的切口，可以早期注水，減少擴張器外露的機會。但現(xiàn)在多用平行于擴張器長軸的切口，垂直切開到埋植擴張器的層次，然后剝離皮瓣，防止皮瓣邊緣過薄。對于擴張器置入的層次問題，頭面部大家有一致的看法，即頭部置入帽狀腱膜下，面部則置入皮下，SMAS筋膜淺層。對于頸部，為使皮膚充分擴張，最好置入頸闊肌下，因為頸闊肌下層次清楚，皮瓣較厚，利于充分擴張，擴張后期雖皮膚變薄，但亦不致外露。而軀干和四肢，最好將擴張器置入深筋膜下，置入時，深筋膜下層次清楚，不會剝離時深淺不一，故擴張器不易外露。術(shù)中徹底止血十分必要，術(shù)中認真止血，結(jié)扎較大的活躍出血，電凝較小滲血，注意基底出血的同時，不可忽視皮瓣上滲血，因為我們常將引流管放于低位，擴張囊與基底之間，而擴張囊與皮瓣之間則通常無引流管，這樣皮瓣上滲血可積于擴張囊與皮瓣之間，擴張囊較小則可流入基底被引流管引出，而擴張囊較大又注液較少時，則會積于擴張囊及皮瓣之間，不能被及時引出而形成凝血塊，凝血塊機化分解使皮瓣血運下降，甚至皮膚破潰。故切口不必太小，影響操作和止血，靠過量注水，加壓包扎來止血都不可靠，同時術(shù)畢尤其是面部，最好用生理鹽水將囊腔沖洗干凈，將小的顆粒狀脂肪清除，防止其堵塞引流管，致引流不暢。放置的負壓管必須保持引流通暢，使?jié)B出充分引出，防止血腫形成。有些患者血液處于高凝狀態(tài)，出血后很快凝結(jié)成塊，故一定保持持續(xù)負壓，否則形成了血凝塊則無法引出。所以術(shù)中注意剝離層次，徹底止血，術(shù)后充分引流，各個環(huán)節(jié)都十分必要。

擴張閥門置放的位置，應有利于注液，處于明顯易尋找的位置，否則閥門尋找困難，給注液帶來諸多不便，故一般放在正常皮膚，平坦部位，不放在瘢痕下。縫合切口時，在距皮瓣邊緣約1.0cm處，先將皮瓣與基底固定數(shù)針，這樣能減輕皮瓣邊緣的張力，防止擴張器游移到切口下，減少外露的機會。縫合切口時應防止過密，否則可致皮瓣邊緣血運障礙，延遲愈合。

篇8

[關鍵詞] 口腔鱗狀細胞癌；胰腺癌缺失基因；B淋巴細胞瘤-2基因；綜述

[中圖分類號] R78 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2013）06（a）-0028-02

口腔癌的發(fā)生及進展和多種遺傳學改變有著密切關系，其中涉及多種基因的異常包括原癌基因、抑癌基因等，這些基因?qū)谇火つだw維化甚至口腔癌的發(fā)生以及進展有十分重要的作用。牙齦癌是口腔頜面部常見的鱗狀細胞癌之一，在口腔鱗癌中居第二或第三[1]。牙齦癌按病理分化程度可分為低分化、中分化及高分化牙齦癌。男性多于女性。其中高分化牙齦癌最常見，以潰瘍性為主，生長緩慢。目前仍以手術(shù)切除為主。手術(shù)治療會不可避免地造成患者顏面部的缺損，無形中給患者心理和生理上帶來了極大的痛苦。本研究就其中代表基因Bcl-2和DPC4進行研究，臨床早期準確診斷口腔癌、評價預后以及基因治療具有十分重要的臨床意義。隨著細胞生物學以及分子生物學技術(shù)的不斷發(fā)展，對于口腔癌的遺傳基礎和發(fā)病機制已經(jīng)有了比較廣泛且深入的了解，口腔癌和大多數(shù)其他癌癥均是由原癌基因、抑癌基因、癌轉(zhuǎn)移基因等決定，同時與環(huán)境因素以及致癌因子綜合作用進而發(fā)生癌癥[2]。因此，研究和識別這些基因，對于臨床早期診斷以及評價預后有著十分重要的臨床意義。

1 Bcl-2的功能

近年來，一些研究報道稱Bcl-2為原癌基因，具有阻止細胞凋亡的作用，已經(jīng)有許多國內(nèi)外學者研究其發(fā)生凋亡的機制，并報道其主要生理功能是阻遏細胞凋亡，從而延長細胞生存時間，但是不影響細胞的分化和周期。

1.1 抑制細胞凋亡

Bcl-2具有抗氧化功能，細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核膜、線粒體外膜均存在Bcl-2蛋白，且這些部位均能產(chǎn)生活性氧（ROS），目前國內(nèi)外許多學者研究關于Bcl-2和活性氧在細胞凋亡過程中的相互作用關系[3]。通過研究觀察到Bcl-2具有抗t-丁基、H2O2、甲萘醌誘導細胞凋亡的作用。這些低濃度的氧化物借助細胞凋亡的途徑滅殺細胞。線粒體內(nèi)膜釋放細胞色素C，阻斷電子向下游傳遞，會危及整個呼吸鏈的功能，同時還能加速產(chǎn)生超氧陰離子[4]。Bcl-2有抑制細胞色素C釋放的功能進而阻礙超氧陰離子的產(chǎn)生。同時有研究發(fā)現(xiàn)Bcl-2還能降低細胞內(nèi)還原型谷胱甘肽含量及拮抗制劑誘發(fā)的凋亡作用。

1.2 Bcl-2和細胞增殖

Bcl-2蛋白在組織細胞凋亡的調(diào)控過程中具有重要的作用，同時Bcl-2蛋白在轉(zhuǎn)基因動物以及細胞系中的高度表達也提示它參與調(diào)控細胞增殖的過程。細胞凋亡通常有兩條通路，即內(nèi)源性通路和外源性通路，它們在Bcl-2家族蛋白是否參與以及最后是否由caspase作為凋亡關鍵執(zhí)行者方面都有區(qū)別。內(nèi)源性通路一般是在細胞毒性和各種發(fā)育性信號刺激下誘發(fā)，如DNA損傷，生長因子剝奪，受到Bcl-2家族蛋白的嚴密調(diào)控。內(nèi)源性凋亡通路大多數(shù)導致caspase-9的激活。由于該通路導致細胞色素C從線粒體中釋放，進而誘導下游一系列凋亡，所以又叫線粒體通路[5]。外源性凋亡通路又叫死亡受體通路，含有死亡結(jié)構(gòu)域的死亡受體觸發(fā)，這些死亡結(jié)構(gòu)域可通過細胞表面的受體蛋白Fas相關死亡結(jié)構(gòu)域招募并且激活caspase-8，隨后導致下游的效應子如caspase-3，6，7的激活，該通路沒有Bcl-2家族蛋白的參與。Muchmore等通過研究發(fā)現(xiàn)，Bcl-2在G2/M期發(fā)生的磷酸化主要是通路為SKI/JUKA，使用微觀損傷劑——帕尼特西對細胞進行處理后捕獲的G2/M期細胞中可以發(fā)現(xiàn)凋亡細胞[6-7]。大量的試驗也證實了Bcl-2能延長細胞生存期，同時可以抑制生物、物理以及化學等因素對細胞凋亡的誘導作用。

2 Bcl-2與腫瘤的關系

近年來通過研究發(fā)現(xiàn)腫瘤組織內(nèi)的細胞凋亡與增殖失衡，腫瘤組織增殖較快，而細胞凋亡減少。細胞凋亡是指細胞的程序性死亡（它不同于細胞的被動壞死過程），是受多種基因調(diào)控的細胞自主性死亡，由此細胞凋亡對腫瘤的產(chǎn)生起負向作用[8]。Bcl-2蛋白產(chǎn)物在人體細胞中的表達量與細胞生存的長短有著密切關系。免疫組織化學顯示，在淋巴濾泡中心以及皮質(zhì)層高水平表達的B細胞能長期存活，低水平細胞則凋亡。目前已經(jīng)證實多種腫瘤中可以檢測到Bcl-2。一般情況下，Bcl-2陽性的腫瘤預后明顯好于陰性。Bcl-2在組織細胞中的異常表達與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展具有一定的關系，但是其不能對所有的細胞凋亡產(chǎn)生抑制。Bcl-2能抑制由眾多不同信號以及細胞內(nèi)傳導途徑造成的細胞凋亡，提示Bcl-2抗凋亡的作用應位于多個信號匯集后的某些環(huán)節(jié)，但是目前尚不清楚具體的環(huán)節(jié)[9]。因此細胞凋亡可能與多個下游途徑進行調(diào)控有關，盡管目前還不能確定其遏制凋亡的具體機制，但是已經(jīng)明確Bcl-2可以延長非增殖期細胞的生存時間，抑制增殖細胞的凋亡。

3 DPC4和腫瘤的關系

DPC4蛋白首次發(fā)現(xiàn)于胰腺癌，由此命名為胰腺癌缺失基因DPC4。其編碼的蛋白Samad4是TGF-β信號傳導途徑的中心分子，其生物效應均是由于與不同Smads蛋白相互作用的結(jié)果[10]。腫瘤的發(fā)生與發(fā)展是多基因參與的病理過程，癌基因的激活與抑癌基因的缺失導致細胞異常增殖則是腫瘤的發(fā)生病理過程中的重要分子機制[11]。Shen等[12]將含有DPC4的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染至人胰腺癌細胞株BXPC-3中，發(fā)現(xiàn)DPC4能夠抑制腫瘤細胞生長，且抑制其侵襲轉(zhuǎn)移。TGF-β是具有調(diào)節(jié)細胞生長、增殖、分化、凋亡等多種生理功能的細胞因子，TGF-β RⅠ和TGF-β RⅡ下調(diào)p53基因?qū)е聀53基因編碼的蛋白表達減少，抑制細胞生長周期過渡到G1/S期，引發(fā)細胞DNA損傷，最終導致細胞凋亡，DPC4蛋白發(fā)生突變則立即失去了調(diào)控TGF-β的作用[13]，影響細胞凋亡過程，引起腫瘤的發(fā)生。

4 腫瘤的耐藥性

Bcl-2蛋白可以抑制細胞凋亡，它不但與許多腫瘤的發(fā)生相關，并且對腫瘤化療耐藥也起著非常重要的作用。因此，通過抑制Bcl-2蛋白在組織中的表達能治療部分惡性腫瘤。為了加速細胞凋亡，使其在惡性腫瘤細胞中表達降低，需要阻斷任何一個環(huán)節(jié)的轉(zhuǎn)錄和翻譯。因此這些轉(zhuǎn)錄形成的小雙鏈RNA能靶向作用于Bcl-2蛋白的mRNA，阻斷其翻譯的過程[14]，進而達到降低表達的效果，有效治療腫瘤。

細胞凋亡在人體的正常發(fā)育以及健康的過程中起著重要作用，細胞凋亡功能紊亂與許多疾病的發(fā)生關系密切。近年來，國內(nèi)學者對于細胞凋亡的機制研究逐步加深，但是對于細胞凋亡級聯(lián)反應過程中許多環(huán)節(jié)以及其具體的作用機制仍不明確。各種影響因素的作用方式也需要進一步的研究[15]，口腔黏膜鱗癌細胞凋亡的分子機制以及其在疾病治療過程中的臨床意義也尚不明確。隨著人們對生命科學的認識不斷加深，相信細胞凋亡在口腔癌發(fā)生、發(fā)展中的相關性研究會有更大進步。

[參考文獻]

[1] 邱蔚六. 口腔頜面外科學[M]. 6版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：274-275.

[2] 唐巍，王文梅，鄭際烈，等. 口腔癌前病變及鱗癌組織Bcl-2和P53表達的研究[J]. 廣東牙病防治，2003，11（1）：31-32.

[3] 陳江，溫玉明，李龍江，等. 口腔癌凋亡相關基因bcl-2、bax表達的初步研究[J]. 福建醫(yī)科大學學報，2001，35（1）：21-23.

[4] 李洪平. 口腔扁平苔蘚和口腔鱗狀細胞癌中KGF、KGFR、Bcl-2表達的研究[D]. 瀘州：瀘州醫(yī)學院，2010.

[5] 范媛，彭濤，詹瑧，等. 口腔癌前病變細胞凋亡狀況及Bcl-2、Bax表達的研究[J]. 口腔醫(yī)學研究，2004，20（4）：354-358.

[6] 耿莉，王莉紅，曹雷，等. p53和Bcl-2蛋白在舌鱗癌組織中的表達及意義[J]. 山東醫(yī)藥，2007，47（33）：17-18.

[7] 王文梅，黃曉峰，蔣文暉，等. 口腔異常增生上皮及鱗癌組織中Fas、FasL及Bcl-2的研究[J]. 臨床口腔醫(yī)學雜志，2004，20（3）：137-139.

[8] Li Long-Jiang，Wang Li-Juan，Li Yi，et al. A combination therapy of rAd-p53 with chemotherapy for advanced oral carcinoma by selective intraarterial infusion[C]. 第三次全國口腔頜面—頭頸腫瘤綜合治療研討會暨中華口腔醫(yī)學會外科專委會口腔頜面-頭頸腫瘤內(nèi)科協(xié)作組成立大會論文集. 北京，2007：2-7.

[9] 林閩，高文信，孫淑芬，等. 金黃地鼠頰囊癌變過程中DPC4的表達特征[J]. 實用口腔醫(yī)學雜志，2006，22（5）：596-598.

[10] Zhan Hua，Yuan Chunzhang，Xiao Minghu，et al. Loss of DPC4 expression and its correlation with clinicopathological parameters in pancreatic carcinoma[J]. 2003，9（12）：2764-2767.

[11] 朱小三. 大腸癌相關抑癌基因的研究進展[J]. 軍醫(yī)進修學院學報，2011，32（5）：536-538.

[12] Shen W，Tao GQ，Li DC，et al. Inhibition of pancreatic carcinoma cell growth in vitro by DPC4 genetransfection[J]. World J Gastroenterol，2008，14（40）：6254-6260.

[13] 周國雄，李兆申，許國銘，等. 胰腺癌DPC4/Smad4基因突變及表達[J]. 世界華人消化雜志，2002，10（3）：328-332.

[14] 吳和順，曾昭孟，陳樹添，等. 抑癌基因DPC4蛋白在大腸癌組織中缺失表達及臨床意義[J]. 廣東醫(yī)學，2010，31（9）：1111-1113.

篇9

【關鍵詞】 三棱； 婦產(chǎn)科; 藥理

三棱為黑三棱科黑三棱屬植物黑三棱 Sparganiun stoleniferum Buch.-Ham 的干燥塊莖，首載于《本草拾遺》。味苦、性平，入肝、脾經(jīng)，具有破血行氣、消積止痛等功能。化學成分主要包括黃酮和黃酮苷、苯丙素苷、甾體及其苷、有機酸等化合物。研究表明，三棱具有多種藥理活性，并在婦產(chǎn)科中應用廣泛。筆者就近年來與三棱在婦產(chǎn)科臨床應用相應的藥理研究綜述如下，以供參考。

1 藥理活性

1.1 調(diào)節(jié)免疫及特異性免疫作用丁永芬等［1］將由三棱、桂枝、附子等組成的桂附膠囊給36位子宮內(nèi)膜異位癥(寒凝血虛證)患者服用，觀察治療前后外周血抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)、腫瘤壞死因子-α、腫瘤相關因子125、自然殺傷細胞活性的變化。結(jié)果顯示總有效率為91.67%，治療后EMAb陽性率、腫瘤壞死因子-α水平明顯下降，而外周血腫瘤相關因子125水平也下降，自然殺傷細胞活性則提高。可見，三棱與桂枝、附子等同用可從多方面調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜異位癥(寒凝血虛證)患者體內(nèi)存在的免疫功能失調(diào)。另外實驗研究表明三棱能改變血液流變性［2，3］，改善微循環(huán)，加速血液流動速度，運輸血液的免疫細胞，加速自身異物的清除，同時也改善組織營養(yǎng)，促進病變恢復，因此具有特異性免疫作用。黨春蘭［3］認為三棱活血祛淤的藥理作用機理為血細胞壓積及血沉速率的顯著減少而導致全血黏度降低，從而起到活血祛淤的功效。

1.2 抑制乳腺增生作用李湘奇等［4］采用苯甲酸雌二醇聯(lián)合黃體酮造模，用乳癖康合劑(三棱、柴胡、莪術(shù)等)治療，結(jié)果提示乳癖康合劑能夠降低乳腺增生病大鼠血清雌二醇、垂體促乳素及促卵泡成熟激素含量， 升高孕激素的含量。可見乳癖康合劑可通過調(diào)節(jié)乳腺增生的性激素水平、影響VEGF的活性、抑制腺體新生血管的形成、改善腺體的微循環(huán)而逆轉(zhuǎn)乳腺腺體的增生，這與三棱在乳腺增生病中的廣泛應用一致。

1.3 鎮(zhèn)痛及抗凝血作用三棱的鎮(zhèn)痛及抗凝血作用在實驗研究中已被廣泛證實。鄧英君［5］、邱魯嬰等［6］采用小鼠扭體法及熱板法，對三棱不同提取物進行鎮(zhèn)痛及抗凝血作用研究，結(jié)果表明，三棱不同提取物都能明顯降低因醋酸刺激引起的扭體反應次數(shù)，提高小鼠因熱刺激引起疼痛反應的痛閾值，有明顯的鎮(zhèn)痛作用，對小鼠凝血時間也有顯著影響。金志春等［7］通過對盆腔舒膠囊(水蛭、三棱、莪術(shù)、元胡、桂枝等) 的藥效學研究，觀察該藥對小鼠痛閾的影響，并與婦科千金片、阿斯匹林作比較，結(jié)果提示其鎮(zhèn)痛作用強于婦科千金片接近阿斯匹林。

1.4 誘導乳腺癌細胞凋亡張瑾峰等［8］運用EPICS-ELITE型流氏細胞儀研究莪術(shù)、三棱、IL-6對人乳腺癌細胞凋亡的誘導作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們對人乳腺癌細胞的凋亡都有明顯的誘導作用，誘導凋亡可能是其抑殺腫瘤的作用機制之一。

1.5 抑制異位子宮內(nèi)膜細胞增殖余曉輝［9］為探討活血化瘀中藥對子宮內(nèi)膜異位癥( EMT)模型大鼠異位子宮內(nèi)膜細胞的增殖的影響，制備活血化淤中藥（三棱、蒲黃、靈脂、莪術(shù)、玄胡）含藥血清，干預體外原代培養(yǎng)的大鼠異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜細胞，應用噻唑藍(MTT) 比色法比較活血化淤中藥含藥血清對二者增殖的影響。結(jié)果提示活血化淤中藥含藥血清對EMT模型鼠異位內(nèi)膜的增殖有顯著抑制作用，而對在位內(nèi)膜的增殖無明顯影響，為臨床用藥提供了實驗依據(jù)。

1.6 抗炎及抑制子宮平滑肌收縮作用金志春等［7］通過對盆腔舒膠囊(水蛭、三棱、莪術(shù)、元胡、桂枝等) 的藥效學研究，觀察該藥對塑料環(huán)所致大鼠子宮炎癥、大鼠腸系膜微循環(huán)、家兔離體子宮平滑肌收縮的影響，并分別與婦科千金片、山莨菪堿、阿托品等中西藥物作比較。結(jié)果提示盆腔舒膠囊具有良好的抗炎、抑制子宮平滑肌收縮、改善微循環(huán)的作用。

2 毒副作用

三棱的急性毒性實驗顯示，小鼠按480 g/kg生藥煎劑灌胃給藥7 d，藥后小鼠活動減少，靜臥不動，第2天恢復正常，未見死亡。小鼠腹腔注射LD50為（233.3±9.9）g/kg(生藥)，小鼠呼吸抑制而死亡，死亡前出現(xiàn)短暫的抽搐驚跳［10］。

苗曉玲等［11］為觀察部分破血活血中藥對妊娠早期小鼠流產(chǎn)及死胎的影響，選用桃仁、紅花、三棱、 赤芍、川芎、丹參6味中藥，分低、中、高劑量組及對照組，單味水煎劑給妊娠早期小鼠灌胃，觀察各組用藥后的流產(chǎn)數(shù)、死胎數(shù)、活胎數(shù)。結(jié)果顯示三棱高劑量組的流產(chǎn)率與對照組相比有顯著性差異。可見三棱可使妊娠早期小鼠流產(chǎn)和出現(xiàn)死胎，與劑量有一定的相關性，為中醫(yī)藥理論及婦產(chǎn)科臨床用藥提供了部分實驗研究依據(jù)。

另有報道，某藥劑師調(diào)配中藥處方時，只要接觸了三棱就會出現(xiàn)打噴嚏、不停地流鼻涕眼淚等不明原因的重感冒癥狀，此類過敏反應較少見，也未見有文獻報道，其機理有待臨床重視和探討［12］。

3 小結(jié)

綜上所述，三棱在婦產(chǎn)科中所表現(xiàn)的破血行氣，消癥化積等作用，已被實驗研究證實， 這為今后中醫(yī)藥防治婦科腫瘤、子宮內(nèi)膜異位癥等疑難疾病的研究提供了有益的啟示。隨著科學技術(shù)的日益發(fā)展，人們對三棱的研究日趨深入，研究領域日趨擴大，其藥理作用也正在被更多的挖掘出來并為人們所利用。但對其系統(tǒng)研究開發(fā)尚未見有更新的進展，特別是制劑方面，研究尚不充分，而且毒副作用的研究也不夠深入，有待于進一步研究。

【參考文獻】

［1］丁永芬，李光榮. 桂附膠囊對子宮內(nèi)膜異位癥(寒凝血虛證)外周血EMAb、CA125、TNF-α、NK細胞影響的臨床研究［J］. 新中醫(yī)，2005，37(9)：25.

［2］和 嵐，毛騰敏. 三棱、莪術(shù)對血淤證模型大鼠血液流變性影響的比較研究［J］. 安徽中醫(yī)學院學報，2005，24(6)：35.

［3］黨春蘭，辛小南. 三棱對家兔血液流變學的影響［J］. 河南醫(yī)科大學學報，1996，31(3)：31.

［4］李湘奇，宮少波，魏 芳. 乳癖康合劑對乳腺增生病大鼠血清性激素及乳腺組織血管內(nèi)皮生長因子、微血管密度表達的影響［J］. 北京中醫(yī)藥大學學報(中醫(yī)臨床版)，2005，12(5)：1.

［5］鄧英君. 三棱不同提取物鎮(zhèn)痛及抗凝血作用研究［J］. 時珍國醫(yī)國藥，1999，10(12)： 883.

［6］邱魯嬰，毛春芹，陸兔林. 三棱總黃酮鎮(zhèn)痛作用研究［J］. 時珍國醫(yī)國藥，2000，11(4)：291.

［7］金志春，張敦蘭，譚宮屏，等.盆腔舒膠囊治療慢性盆腔炎的藥效學研究［J］. 上海中醫(yī)藥大學學報，2002，16（1）：56.

［8］張瑾峰，王 喆，劉 欣，等. 莪術(shù)、三棱、白介素-6對人乳腺癌細胞凋亡的誘導作用. 中國科協(xié)第五屆青年學術(shù)年會論文，2004：219.

［9］余曉輝，黃光英，陸付耳. 活血化淤中藥對大鼠異位子宮內(nèi)膜細胞增殖的影響［J］. 華中科技大學學報(醫(yī)學版)，2006，35(1)：93.

篇10

天花粉蛋白（Trichosanthin，TCS）是從葫蘆科科植物栝蔞的塊根中分離純化得到的一種堿性蛋白，屬于Ⅰ型核糖體失活蛋白（Ribosome Inactivating Proteins， RIPs）。TCS成熟肽是由247個氨基酸殘基組成，分子量約24 000，pⅠ=9.4，為不含糖的單鏈核糖體失活蛋白。天花粉蛋白一直以來多用于引產(chǎn)臨床治療婦科疾病，如宮外孕，葡萄胎，絨癌等。另外，因其具有 N2糖苷酶活性 ，能水解真核細胞核糖體的 28SrRNA 的 4324 位上的腺苷酸的 N-C糖苷鍵，使核糖體不可逆失活，從而抑制蛋白質(zhì)的合成，使得其應用范圍已涉及抗腫瘤、 抗病毒，免疫調(diào)節(jié)等方面。鑒于其越來越重要的研究地位，本文將對其作用機制展開綜述，為天花粉蛋白的進一步研究和臨床應用提供理論依據(jù)。

1 治療婦科疾病

天花粉自古在民間用來墮胎和治療胞衣不下，其有效成分TCS不但可以用于引產(chǎn)，還能治療葡萄胎，宮外孕，死胎，過期流產(chǎn)等婦科疾病。其原理是TCS可迅速引起胎盤的滋養(yǎng)層細胞變性壞死，壞死細胞的崩解碎片充斥在絨毛間隙，導致了血循環(huán)障礙，然后加速了絨毛組織退化壞死，造成胎兒死亡；同時，TCS引起的滋養(yǎng)葉細胞壞死， 導致HCG 和甾體激素迅速降低， 絨毛及蛻膜組織變性及進一步壞死， 激發(fā)內(nèi)源性前列腺素的合成與釋放， 繼而觸發(fā)宮縮、 誘發(fā)流產(chǎn)［1］。

2抗腫瘤

腫瘤是全世界范圍內(nèi)死亡率最高的疾病之一，目前的各種治療手段，效果不甚令人滿意。在世界范圍內(nèi)，中草藥在抗腫瘤的研究中越來越受關注。近年來通過對天花粉蛋白結(jié)構(gòu)和功能的深入研究，發(fā)現(xiàn)其對腫瘤也具有抑制作用 ，現(xiàn)就天花粉蛋白抗腫瘤的作用機制綜述如下。

2.1 抑制腫瘤細胞增殖，誘導腫瘤細胞凋亡凋亡是細胞在正常發(fā)展過程中或做出應激反應時表現(xiàn)出的生理性死亡過程。Caspase-3 是這個死亡程序的關鍵環(huán)節(jié)之一。研究人員發(fā)現(xiàn)天花粉蛋白可以通過抑制PKC和激活Caspase途徑誘導細胞凋亡。李潔等［2］將天花粉蛋白作用于人慢性髓性白血病細胞株K562，然后分別觀察了PKC和Caspase-3的激活劑和抑制劑的狀態(tài)與細胞凋亡的關系，得出TCS是通過抑制PKC和激活Caspase-3來誘導K562細胞凋亡。李潔等［3］還進一步對天花粉蛋白誘導的細胞凋亡進行了研究。他們把TCS作用于白血病HL-60細胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)首先Caspase-9依賴的線粒體途徑和Caspase-4依賴的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力激發(fā)途徑被激活，接著依賴Caspase-9和Caspase-4 的Caspase-8 被激活，以上一系列級聯(lián)反應最終直接或間接激活Caspase-3途徑，從而誘導細胞凋亡。

周欣陽等［4］觀察了天花粉蛋白對黑色素瘤凋亡的影響，結(jié)果顯示，天花粉蛋白可使黑色素瘤B-16細胞內(nèi)Ca2+，NO， ROS增加。Ca2+可以激活鈣依賴性酶活性和蛋白激酶PKC，引起離子通道改變G蛋白磷酸化，最終導致細胞凋亡。NO 增加，可抑制三羧酸循環(huán)，使ATP產(chǎn)生減少或可直接抑制線粒體呼吸，導致細胞內(nèi)ATP水平降低，從而誘導B-16細胞凋亡。ROS作為細胞內(nèi)第 2信使 ，在細胞內(nèi)酶的激活、 細胞生長和分化及細胞凋亡中起著非常重要的作用。

Bcl -2 基因家族在程序性細胞死亡的調(diào)控方面具有十分重要的作用，其結(jié)構(gòu)中包含一個可以控制其表達水平的轉(zhuǎn)錄因子-CREB （CRE -binding protein）。王平等［5］的研究發(fā)現(xiàn)CREB介導的單信號途徑調(diào)控Bcl-2 的表達，TCS 能夠通過抑制CREB的活性從而降低Bcl-2的表達，最終使hela細胞凋亡。王平實驗小組［6］又對TCS 抑制細胞增殖的信號途徑進行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TCS抑制Hela細胞增殖與細胞內(nèi)cAMP水平有關，它可以通過PKA介導的PKC/MAPK信號途徑來抑制Hela細胞增殖。

巨噬源性的NO被認為是T細胞增殖強烈的抑制劑。低濃度的NO可以促進細胞增殖，抑制細胞凋亡。機體內(nèi)細胞增殖和細胞凋亡處于一種平衡狀態(tài)，NO的升高恰好打破這個平衡，抑制了細胞增殖，促進細胞凋亡［7］。

2.2 抑制腫瘤細胞蛋白質(zhì)的合成TCS能抑制真核細胞蛋白質(zhì)的合成，因而抑制細胞生長。天花粉蛋白是RNA N-糖苷酶型的核糖體失活蛋白，作用于核糖體大亞基rRNA中A4324特定位點，專一性的使真核細胞的核糖體失活，而阻斷其蛋白質(zhì)合成［8］。

2.3 對自然殺傷細胞及紅細胞免疫功能的作用實驗發(fā)現(xiàn)，天花粉蛋白在6 mg/kg和12 mg/kg劑量時能明顯促進小鼠NK細胞殺傷活性，提示TCS可通過促進小鼠NK細胞活性提高機體免疫力，從而增強機體抗腫瘤能力。另有報道稱TCS可使血液腫瘤患者的紅細胞免疫黏附功能明顯上升，其機理是天花粉蛋白與紅細胞膜上的糖蛋白受體結(jié)合激活紅細胞C3b 受體活性［8］。

2.4 對細胞因子及補體的作用白細胞介素在介導機體腫瘤免疫中發(fā)揮著重要作用。白細胞介素-2 (IL-2) 具有廣譜的免疫增強活性，可誘導 T、 B 細胞的增殖和分化，可促進細胞毒性 T細胞的前體細胞分化為細胞毒性 T 細胞 ，并增強其殺傷效應 ，還可促進NK細胞的功能及釋放干擾素。白細胞介素-6 ( IL-6)能誘導 B 細胞分化 ，促進漿細胞分泌免疫球蛋白 ，增強機體的免疫力。另有報道稱TCS可通過替代途徑激活補體系統(tǒng)，這個過程中TCS被分解成的兩個羥胺片段依然具有激活補體的作用，并能明顯提高補體介導的免疫復合物溶解能力，起到抗腫瘤作用。

3 抗病毒

天花粉蛋白作為一種單鏈核糖體失活蛋白只有活性鏈而無細胞結(jié)合鏈，只能選擇性的進入病毒感染的異常細胞內(nèi)，對正常細胞毒性很小，極具臨床應用價值。TCS除對多種植物病毒有效以外，體外實驗表明它還可以抑制流感病毒，乙腦病毒，科薩奇病毒，麻疹病毒，單純皰疹病毒，脊髓灰質(zhì)炎病毒，肝炎病毒及腺病毒以及T淋巴細胞內(nèi)HIV病毒的復制［9］。對單核、巨噬細胞內(nèi)的HIV也有抑制作用［10］。陳光福等［11］進行了TCS對單純皰疹病毒-1DNA復制的影響的研究，結(jié)果顯示天花粉蛋白對體內(nèi)外HSV-1 DNA復制有抑制作用。其作用機制可能與抑制病毒DNA聚合酶或具有核酸內(nèi)切酶活性有關。黃海等［12］研究了天花粉蛋白對HSV-1感染的細胞的作用，發(fā)現(xiàn)HSV-1感染的細胞內(nèi)P38 MAPK和Bcl-2增加，而TCS可以抑制此二者的增加，從而影響病毒復制。

天花粉蛋白的抗HIV作用一直是人們關注和研究的重點。天花粉蛋白可抑制HIV活性 ，它的抗HIV作用主要表現(xiàn)在: 抑制受HIV感染的細胞合成HIV復制所需要的酶及蛋白質(zhì) ，從而干擾HIV的復制；能選擇性的殺死受HIV感染的細胞 ，從而降低機體的感染程度 ，并且不易產(chǎn)生抗藥性［13］。TCS的抗HIV活性機制很可能包含了對絲裂原活化蛋白激酶 (MAPK)信號通路下游蛋白的參與 ，因為 c - Jun蛋白激酶抑制劑可以中和天花粉蛋白的抗HIV活性［14］。同時 TCS還可有效引起HIV - 1感染細胞的凋亡［15］。McGrath等發(fā)現(xiàn)TCS對抑制單核巨噬細胞內(nèi)HIV復制特別有效，其原因可能是TCS能選擇性地和 HIV 感染的巨噬細胞相結(jié)合并被攝入胞內(nèi)之故。Ferrari 等發(fā)現(xiàn) ，TCS能夠抑制合胞體(由于 HIV 的感染而造成多個 CD4 細胞融合而成的融合體) 的生成 ， 從而抑制HIV 的復制。王媛媛等［16］報道了關于TCS增加HIV感染細胞凋亡的行為。其通過實驗進一步證明TCS抗病毒活性是通過誘導凋亡實現(xiàn)的。上海細胞所的研究小組通過大量的實驗發(fā)現(xiàn)，天花粉蛋白能與人體細胞表面的趨化因子受體相互作用，并導致一系列的細胞反應，從而達到抑制 HIV病毒的作用［9］。王建華等［15］的研究表明天花粉蛋白抗HIV-1的特性與其核糖體失活活性有關。核糖體失活蛋白可誘導HIV-1細胞凋亡，誘發(fā)活性氧的產(chǎn)生及抑制HIV-1整合酶，從而起到抗HIV的作用。

4 免疫調(diào)節(jié)

天花粉蛋白對人體免疫系統(tǒng)具有增強和抑制兩方面的作用。目前對其機理做了如下一些研究。周宏等［17］進行的關于天花粉蛋白的研究表明TCS可以通過激活IL-4/IL-10分泌性T細胞來誘導HLA相關的免疫抑制。周曉蓉等［18］進行的研究說明天花粉蛋白是通過抗原提呈依賴方式誘導免疫抑制的。樹突狀細胞是最有效的抗原提呈細胞，源于樹突狀細胞的IL-10啟動此免疫抑制。周蕓等［19］還通過實驗證實 TCS針對體外人體淋巴細胞增殖的免疫機制是由CD8 Tc2細胞介導的。

TCS 對 T 淋巴細胞的增殖具有顯著的抑制作用。 其作用機制可能是 TCS作用于核糖體 ，阻滯蛋白質(zhì)的合成 ，導致免疫細胞不能增殖。李芳等的實驗表明，天花粉蛋白可以抑制同種異體抗原和 CD3 單抗經(jīng)由TCR/ CD3復合結(jié)構(gòu)所介導的 T細胞活化途徑 ，并檢出其中胞漿鈣離子濃度及 PKC轉(zhuǎn)位變化 ，而對 PMA等 PKC活化的作用途徑無效 ，由此明確提示天花粉蛋白是通過干擾 TCR/CD3 信號傳導途徑發(fā)揮免疫抑制作用［20］。另有學者認為 ， TCS是通過作用于抗原提呈細胞(APC ，主要是B 細胞和單核細胞)來誘導免疫抑制的。王保龍等［21］用低劑量的TCS（1～500 ng/ml）小鼠各增殖系統(tǒng)，分析結(jié)果低劑量 TCS對可溶性抗原 OVA 誘發(fā)的 T增殖具有強烈的抑制作用 ，對 ConA 增殖系統(tǒng)抑制較弱;而對 CD3聯(lián)合 CD28 McAb及 IL-2增殖系統(tǒng)的T細胞增殖幾乎無抑制作用。這一現(xiàn)象與 4 個增殖系統(tǒng)所需的 APC量相平行 ，表明 TCS 對 T細胞增殖的抑制依賴于 APC 的參與。天花粉蛋白還可通過改變不同功能的免疫調(diào)節(jié)T細胞的比例，以增強體液免疫功能，還可通過增大T淋巴細胞膜上電壓依賴性鉀離子通道電流強度及促進PBMC分泌IL-2和IL-6，增強機體免疫功能［22］。另外 ，TCS對 T 淋巴細胞的分化具有一定的誘導作用，它能通過影響巨噬細胞分泌細胞因子的格局 ，來誘導功能性 T 細胞亞群向 Th2方向分化［23］。

5 問題及展望

綜上所述，天花粉蛋白具有治療婦科疾病、抗腫瘤、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)等生物學作用，其大部分作用機制尚不完全明確，現(xiàn)在所進行的研究都處于探索階段。我國是舉世公認的天然藥物大國， 用中草藥治病歷史悠久， 所以在中草藥中篩選新藥具有得天獨厚的優(yōu)勢。作為一種植物蛋白，有廉價、易獲得、生物作用廣泛等特點，使其具有了良好的研究前景及實用價值。但天花粉蛋白本身具有抗原性，以及在人體內(nèi)半衰期較短［10］， 提取效率低等特點，都限制了它的推廣應用。機制的研究是從根本上解決這些問題的關鍵，本課題對天花粉蛋白的作用機制做出綜述，將為天花粉蛋白機制的進一步研究及其開發(fā)和臨床應用提供有利的依據(jù)。

參考文獻

［1］李枝玲，丁 玉，白云峰，等. 天花粉蛋白的藥用研究概況［J］ . 中國藥房，2007，18（36）：2868.

［2］Jie Li， Xuechun Xia， Huiling Nie， et al. PKC inhibition is involved in trichosanthin-induced apoptosis in human chronic myeloid leukemia cell line K562 ［J］. Biochimica et Biophysica Acta ，2007，1770：63.

［3］Jie Li， Xuechun Xia， Huiling Nie， et al. Trichosanthin induced apoptosis in HL-60 cells via mitochondrial and endoplasmic reticulum stress signaling pathway ［J］. Biochimica et Biophysica Acta， 2007，1770：1169.

［4］周欣陽，張?zhí)煲唬櫨唬?天花粉蛋白誘導黑色素瘤凋亡機制的研究 ［J］. 中國病理生理雜志，2007，23 （11）：2258.

［5］Ping Wang ， Hui Yan， Ji-Cheng Li， et al. CREB-mediated Bcl-2 expression in trichosanthin-induced Hela cell apoptosis［J］ . Biochemical and Biophysical Research Communications. 2007， 363:101.

［6］Ping Wang， Li-Li Chen， Hui Yan， et al. Trichosanthin suppresses Hela cell proliferation through inhibition of the PKC/MAPK signaling pathway［J］. Cell Biol Toxicol ， 2008， Aug 28.

［7］Fang Li，Yunhua Mei， Ying Wang， et al. Trichosanthin inhibits antigen-speciWc T cell expansion through nitric oxide-mediated apoptosis pathway ［J］. Cellular Immunology ， 2005， 234 : 23.

［8］高富紅，孫 健，吳國娟.天花粉蛋白抗腫瘤作用機理研究概況［J］. 動物醫(yī)學進展，2005，26（11）：5.

［9］李雪梅，黃利鳴.天花粉蛋白的研究進展［J］.河北醫(yī)藥，2006，28（4）：322.

［10］Lee KM， Wong KB， Shaw PC. Recent advances in trichosanthin， a ribosome-inactivating protein with multiple pharmacological properties［J］. Toxicon ， 2005， 45（6）: 683.

［11］陳光福 ，尹飛 ，張紅媛 ，等.天花粉蛋白對單純皰疹病毒- 1DNA復制的影響［J］.實用兒科臨床雜志，2007，22（22）：1693.

［12］Hai Huang， Herman Chan， Yuan-Yuan Wang， et al. Trichosanthin suppresses the elevation of P38 MAPK ， and Bcl-2 induced by HSV-1 infection in Vero cells［J］. Life Science ， 2006，79:1287.

［13］查樹偉，查 佶. 抗生育中草藥的抗HIV研究現(xiàn)狀和展望 ［J］. 中國計劃生育學雜志，2007，138 (4) :250.

［14］Ouyang DY， Chan H， Wang YY， et al. An inhibitor of c - Jun N -terminal kinases (CEP - 11004) counteracts the anti -HIV - 1 action of trichosanthin. Biochemical and Biophysical Research Communications ， 2006， 339 ( 1 ) : 25.

［15］王建華，歐陽東云，王媛媛，等. 核糖體失活蛋白抗HIV-1失活作用的研究進展［J］. 動物學研究，2006，27（5）：541.

［16］Yuan-Yuan Wang ， Dong-Yun Ouyang ，Hai Huang ，et al. Enhanced apoptotic action of trichosanthin in HIV-1 infected cells［J］. Biochemical and Biophysical Research Communications， 2005，331 (4):1075.

［17］Hong Zhou，Zhijun Jiao，Jijun Pan， et al. Immune suppression via IL-4/IL-10-secreting T cells: A nontoxic property of anti-HIV agent Trichosanthin ［J］. Clinical Immunology， 2007， 122: 312.

［18］Xiaorong Zhou ， Neng Yang ，Liming Lu ，et al. Up-regulation of IL-10 expression in dendritic cells is involved in Trichosanthin-induced immunosuppression ［J］. Immunology Letters，2007，110：74.

［19］周蕓，周洪，王保龍，等.天花粉蛋白通過激活CD8 Tc2亞群誘導人體免疫抑制 ［J］.現(xiàn)代免疫學，2005 ，25 :11.

［20］李芳. 天花粉蛋白對淋巴細胞功能的調(diào)節(jié)作用［J］. 現(xiàn)代免疫學， 2005， 25 (5) :438.

［21］王保龍 ，周 蕓 ，江 陽 ，等. 天花粉蛋白抑制 T 細胞增殖的免疫學機制研究［J］.中華微生物學和免疫學雜志， 2005 ，25 (1) :64.