細胞免疫范文
時間：2023-04-05 13:31:41
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篇1
1.紅細胞免疫的物質基礎
紅細胞的胞質和細胞膜上存在許多與免疫有關的物質，主要包括：I型補體受體（CR1）、CR3、CD58、CD59、CD55、CD44、NK細胞增強因子（natural killer enhancing factor，NKEF）、過氧化物酶、過氧化物歧化酶（SOD）、降解加速因子（DAF）、阿片肽受體、人類補體膜輔助因子蛋白（MCP）以及紅細胞趨化因子受體等。
1.1CRl CRl又名CD35，是一種單鏈膜糖蛋白，在多種細胞表面均有表_，其相對分子質量具有多態性。不同相對分子質量的CRl在功能上無差別。CRl是紅細胞發揮免疫黏附功能的主要物質基礎。紅細胞通過CRl黏附CIC，將其運輸到肝臟等處后與之解離，CIC被單核細胞清除。CRl表達降低會導致紅細胞黏附能力下降，引起機體免疫功能低下。研究紅細胞CRl介導的免疫黏附功能對評價機體天然免疫功能狀況具有十分重要的意義。
1.2CD58 CD58又名淋巴細胞功能相關抗原3（LFA-3），除分布于紅細胞外，還廣泛分布于各種免疫細胞、上皮細胞、結締組織、血小板等。CD58是CD2的天然配體，與CD2分子高度同源，兩者結合可促進細胞間黏附和信號轉導。
1.3CD59 CD59又稱攻膜復合體（Membrane Attack Complex，MAC）抑制物，其主要功能是在補體系統酶級聯反應終末階段抑制MAC的形成，進而保護宿主細胞免受MAC導致的細胞裂解效應。此外，CD59還通過提高淋巴細胞釋放干擾素、白細胞介素-2等免疫調控細胞因子的能力，促進T細胞發揮免疫功能；參與B細胞和NK細胞的增殖分化；參與細胞的凋亡信號等。
1.4CD44 CD44是一種廣泛分布于白細胞、上皮細胞、紅細胞以及某些腫瘤細胞上的高異質性單鏈跨膜蛋白，其主要功能是參與細胞一細胞，細胞一基質之間的黏附。某些CD44變異體的表達還與腫瘤的擴散和轉移有關。
1.5紅細胞NK細胞增強因子 NKEF存在于紅細胞胞質內，是由兩組基因編碼的小分子二聚體蛋白質。NKEF可保護機體蛋白質及核酸等物質免遭氧化劑損傷，還能選擇性地提升NK細胞毒性作用從而殺傷腫瘤細胞，此外，NKEF還能介導細胞對親炎癥分子的反應而起到抗感染作用。
1.6紅細胞趨化因子受體 紅細胞趨化因子受體是一種糖基化膜蛋白及部分趨化因子的非特異性受體，在炎癥調節及抗腫瘤免疫反應等方面發揮重要作用。
2.各種因素對紅細胞免疫的影響
2.1遺傳因素的影響 紅細胞CRl具有密度多態性，不同人的基因組中含有不同密度的CRl相關基因，這就導致了不同人紅細胞膜上CRl有高、中或低表達類型。此外紅細胞CRl的活性還受ABO血型的影響，正常血型人群中紅細胞功能較弱的是B型和AB型。
2.2生理因素的影響 紅細胞免疫功能差異存在于不同物種、型間，同時還受性別和年齡的影響，隨著年齡的增長，紅細胞免疫功能逐漸衰退。此外，同一個體在一天內不同時期的紅細胞免疫活性有所不同，是因為其存在晝夜活性差異。
2.3光波因素的影響 在一定的條件下，紅外線照射可以提高機體免疫功能，但若超過了適當的范圍，則會降低免疫功能，甚至給機體造成損傷。適宜的紫外線照射能改善紅細胞免疫功能及提高全血的抗氧化能力。還有動物實驗發現激光照射能改善動物的紅細胞免疫功能。
2.4氧氣濃度因素影響 當平原人群進人高原環境后，在適應過程中體內紅細胞受低氧、血流應切力和高輻射的影響，紅細胞免疫功能降低。但這種變化與性別、年齡的關系目前意見不一。另有研究證實，在快速低氧環境的刺激下，紅細胞免疫系統并不是持續在低水平，其免疫黏附功能的變化并不均一，先是表現降低趨勢，繼而快速下降，之后又回升并與高原世居者相接近或者恢復到之前正常水平。
2.5其他 其他因素如運動、藥物、疾病等也能影響紅細胞免疫功能。
3.紅細胞免疫功能的檢測方法
3.1紅細胞C3b受體（CRl）的測定 紅細胞C3b受體花環率（RBC-C3bRR）及免疫復合物花環率（RBC-ICR）是兩個最常用于檢測紅細胞免疫功能的指標，多使用郭峰法或郭峰改良法檢測。改良法的先進之處在于其是利用自身血漿對酵母菌進行致敏，即取即用，無須再制備致敏酵母菌試劑，減少步驟并使實驗成本明顯下降，檢測結果更加準確可靠。紅細胞C3b受體測定的意義在于若兩項指標都低下，則判為原發性紅細胞免疫功能低下。若RBC-C3bRR降低而RBC-ICR增高，則為繼發性。若兩項指標都上升，則判斷為紅細胞天然免疫功能亢進。
3.2紅細胞CRl密度相關基因多態性測定方法目前多用PCR及HindⅢ內切酶技術進行CRl基因多態性分析。PCR上下游引物分別為5’-CCT-TCAATGGAATGGTGCAT-3’，5’-CCCT-FGTAAG-GCAAGTCTGC-3’。CRl基因可分為高表達型（HH）、中表達型（HL）及低表達型（LL），正常人以HH型為主。
3.3紅細胞表面各種CD分子的檢測方法 目前多用流式細胞儀測定方法或細胞免疫酶分析法檢測紅細胞表面CD分子的數量。流式細胞儀法采用鼠抗人紅細胞CRl單抗與一定量待y紅細胞反應，再加入羊抗鼠IgG熒光標記抗體反應后，上流式細胞儀測定，其結果能更為客觀地反映紅細胞免疫功能狀況，對臨床輔助診斷及療效指標都具有重要應用價值。
4.紅細胞免疫功能與疾病的關系
疾病的易感性或抗性通常是由于多種因素共同作用的結果，越來越多的研究表明許多疾病跟患者的紅細胞免疫功能失衡有關。
4.1腎臟疾病 腎臟作為清除體內代謝產物及某些廢物、毒物的重要器官，每時每刻都在過濾著流經的血液。有研究表明，紅細胞免疫功能的改變也許參與了某些腎臟疾病的發病機制。慢性腎衰竭的發生與紅細胞CRl表達數量和黏附活性有關，慢性腎衰竭患者的紅細胞CRl表達量、黏附活性均明顯低于正常值。慢性腎小球腎炎患者紅細胞CRl數量表達和黏附活性均低于健康人，且主要是由后天因素引起。兒童紫癜性腎炎的發生、發展過程中存在紅細胞膜上CRl及腎組織CRl的表達水平下降，檢測紅細胞膜CRl水平可間接反映腎組織中CRl的表達情況和腎損傷的程度。在c3腎小球腎炎的治療中，可溶性CRl可改善補體調節。
4.2系統性紅斑狼瘡 系統性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）病因至今尚未肯定，大量研究顯示SLE的發病與遺傳、內分泌、感染、免疫異常和一些環境因素有關。在各種因素相互作用下，SLE患者T淋巴細胞減少、T抑制細胞功能降低、B細胞過度增生，產生大量的自身抗體，與體內相應的自身抗原結合后形成相應的免疫復合物，過量的免疫復合物沉積在皮膚、關節、腎小球等部位。而有清除免疫復合物功能的紅細胞是否也影響SLE的發病呢？目前國內外研究發現，SLE患者紅細胞CRl分子水平及功能低下，CRl表達變化與SLE病情活動有明顯的相關性，可作為評判SLE病情活動的指標之一。紅細胞CRl基因rs4844600G>A、rs3818361C>T、rsllll8167T>C等3個SNP位點與SLE發病關聯。對SLE患者進行血漿置換后，他們的紅細胞CRl表達升高，且其對循環免疫復合物的結合位點增多，而免疫復合物和自身抗體的水平有所降低。刺激有貧血和狼瘡腎炎患者紅細胞生成，其紅細胞CRl表達下降與功能低下得以改善。
4.3阿爾茨海默病 阿爾茨海默病（AD）作為一種起病隱匿的進行性發展的神經系統退行性疾病，其病因迄今未明，可能因素和假說多達30余種，而免疫系統的進行性衰竭也可能是該病的病因之一，近幾年對CRl在AD中的作用的研究中人們有了新的發現。許多基因研究均指出CRl基因在多個國家多個種族中與AD之問有著密切的關系，尤其是晚發型阿爾茲海默病（LOAD）。CRl基因突變可能通過影響B-淀粉樣蛋白的清除而導致LOAD發病，而rs6656401的A等位基因是我國漢族人患LOAD的重要危險因素
4.4腫瘤與癌癥 癌細胞在體內作為一種抗原，可以激活補體，刺激機體產生相應的抗體，抗原抗體結合后使得患者血液中免疫復合物增多，大量的紅細胞CRl黏附免疫復合物后，其活性降低。多項研究表明，紅細胞CRl減少常見于多種腫瘤或癌癥，這一方面使得紅細胞調理促吞噬癌細胞的功能降低，另一方面導致循環免疫復合物清除率下降，而增多的循環中免疫復合物又加重破壞了機體抗腫瘤的免疫能力，使腫瘤細胞能逃避機體免疫系統攻擊而得以生長繁殖和轉移。如結腸癌細胞通過補體旁路途徑激活大量的c3、c4，進而促進免疫復合物的形成，這加重了紅細胞CRl黏附免疫復合物的負荷，降低其活性，與此同時結腸癌細胞還釋放一種能使CRl分子數量降低的免疫抑制因子，導致紅細胞黏附循環免疫復合物的能力愈發下降。造成結腸癌患者紅細胞免疫功能低下的可能原因還有CRl密度基因的中、低表達多于正常人。在癌癥患者的基因水平上，也有研究發現紅細胞CRl單核苷酸多態性與腫瘤發病有關聯，如肝細胞癌患者CRl基因SNP位點rs4844600G>A：非小細胞肺癌患者CRl基因SNP位點rs7525160G>C。
篇2
【關鍵詞】 自然流產;死胎;封閉抗體;淋巴細胞免疫治療
自然流產的發生與母體缺乏封閉抗體有關,流產次數越多的患者,其體內封閉抗體缺乏的可能性越大,80%～90%封閉抗體陰性,封閉抗體的產生不足,母體對胎兒產生強烈的排斥現象,發生于孕早期可出現反復自然流產,孕晚期則可出現妊娠高血壓疾病、胎兒宮內生長受限、甚至出現胎死宮內。淋巴細胞免疫治療亦稱淋巴細胞主動免疫,是從丈夫或無血緣關系的健康第三者血液中提取少量淋巴細胞,注射給妻子,這種異體血液制品可刺激妻子體內產生一種保護性抗體,保護胎兒免受母體的免疫攻擊。廣東省茂名市婦幼保健院婦產科自2009年6月至2010年2月共收治封閉抗體陰性,曾有自然流產史或死胎史患者49例,其中19例已妊娠,均給予淋巴細胞免疫治療,現報告如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料 2009年6月至2010年2月在本院就診,月經規則,夫妻雙方染色體核型分析正常,夫妻身體健康,乙肝表面抗原陰性,肝功能正常,沒有血液傳染性疾病,妻子內分泌檢查正常,無生殖器畸形,沒有婦科合并癥,無感染,妻子封閉抗體陰性,血液IgG抗體正常,封閉抗體檢測陰性有自然流產或死胎,未懷孕30例,早孕19例;年齡20～41歲,平均28.1歲。
1.2 方法
1.2.1 一般情況了解 詳細詢問患者過去史,現病史,月經生育史,家族史及配偶的一般情況。
1.2.2 常規檢查 行夫妻雙方染色體婦科,妻子盆腔B型超聲,宮腔鏡檢查,丈夫檢查未見異常。RT、BC,細菌培養+藥敏,支原體培養+藥敏,衣原體檢查,淋病奈瑟氏菌PCR,性激素六項及甲狀腺功能測定等,排除原因明確流產或死胎。
1.2.3 49例患者均在實施免疫治療前及27例未妊娠患者治療后1療程或2療程后2周,各行1次封閉抗體檢測,觀察并記錄妊娠情況,新生兒出生時情況,(如孕周,體質量,有無畸形等)
1.2.4 免疫治療 采用無菌法,取丈夫或(若丈夫血液不適宜,無血源關系,無血液性傳染病的健康第三者)靜脈血20 ml加入肝素鈉抗凝,按1:1取淋巴分離液20 ml,將分離液放于試管下,將血液置于淋巴分離液上方,第一次離心,2000 r/min,離心30 min,離心后離心管由上至下細胞分四層: 一層:血漿或漿液層;二層為環狀棉絮樣乳白色細胞層;三層為透明分離液層;四層為紅細胞層。用無菌吸管吸出第二層細胞,置入另一管,加入0.9% 氯化鈉注射液至12 ml,用無菌吸管混勻,第二次離心,1800 r/min,離心20 min,離心后倒掉上清液,加入0.9%氯化鈉注射液12 ml用無菌吸管混勻,第三次離心,1800 r/min,離心10 min,離心后倒掉上清液,加入0.9%氯化鈉注射液12 ml用無菌吸管混勻,第四次離心,1800 r/min,離心10 min,離心后倒掉上清液,加入0.9%氯化鈉注射液2 ml洗滌,分別注入1 ml注射器2個,于妻子兩側上臂皮下注射,每側注射三個點,每4周1次,連續3次,2周后復查封閉抗體,若封閉抗體仍陰性,再重復1個療程(為每4周1次,共3次),陽性后懷孕,妊娠后再同法免疫治療3次。
1.3 統計方法 所有資料均采用χ2檢驗
2 結果
2.1 免疫治療后封閉抗體陽性情況 30例未懷孕者,26例陽性,3例無復查;19例妊娠者無復查,陽性率80%。
2.2 30例未妊娠患者免疫治療后, 8例再次妊娠,現無流產征象,繼續免疫治療。
2.3 19例妊娠者,免疫治療后,16例妊娠成功,3例自然流產,3例已孕足月順產,新生兒體質量正常,無畸形,13例繼續妊娠,定期產檢,無早產征象,B超監測胎兒無異常,妊娠成功率84.2%,無妊娠并發癥。
2.4 免疫治療后49例均無不良反應。
3 討論
未行免疫治療前,患者由于封閉抗體陰性,使胎兒易受母體細胞免疫應答,發生母體免疫系統排斥胎兒的反應,導致流產,用丈夫或健康第三者的淋巴細胞抗原,對妻子進行主動免疫治療3個月后,患者封閉抗體陽性率明顯提高,使胎兒不易受母體免疫系統排斥,胎兒形成耐受,因而可在母體環境中存活下來,使妊娠成功率提高,主動免疫治療后無FGR,無低出生體質量兒及畸形兒,母親亦無因治療后發生一些新的免疫系統方面及傳染病方面的疾病,副反應小。已有大量臨床資料證實,淋巴細胞免疫治療可減少流產率及免疫排斥反應,提高妊娠成功率,此法安全可行。免疫治療技術安全、痛苦小、療效確切,有效地避免了傳統淋巴免疫治療母親對輸入的紅細胞或血小板抗原致敏感的危險,減少了并發癥。成功受孕率可以達95%以上。自1981年Taytor和Beer等創立了自然流產淋巴細胞主動免疫療法,經過20余年的臨床研究表明,免疫治療確能有效阻止封閉抗體缺乏性自然流產。國內外不同學者對原因不明性反復自然流產患者進行淋巴細胞免疫治療后,妊娠成功率達72.73%～86.2%,且未發現對母、兒的副反應,封閉抗體的陽性率明顯高于治療前,而封閉抗體陽性者再次妊娠的成功率明顯高于陰性者。大量研究證實淋巴細胞免疫治療自然流產有效安全,并且封閉抗體對再次妊娠結局有良好價值。
參 考 文 獻
[1] 樂杰.自然流產,婦產科學.人民衛生出版社,2008:83.
[2] 廖丹,李鳳英,譚秋慧.淋巴細胞免疫治療反復早期自然流產53例.臨床醫學院,2009,29(1):75-76.
[3] 孟慶勇,林萍,王鳴,等.配偶淋巴細胞免疫治療反復自然流產91例分析.中國優生與遺傳雜志,2005(12).
[4] 徐嵐,張新能,張永鳳,鄭燕鑾 .細胞免疫功能的變化與原因不明習慣性流產的關系.中國實用婦科與產科雜志,2006(5).
篇3
【摘要】
目的： 研究高氧液對實驗矽肺家兔紅細胞免疫功能的影響. 方法： 采用非暴露式氣管注入法復制家兔矽肺模型；實驗分為空白對照組、染塵對照組和染塵+高氧液組，光鏡下觀察各組肺組織病理改變，并比較各組間家兔紅細胞受體花環率及免疫復合物花環率. 結果： 高氧液能顯著提高染塵家兔紅細胞受體花環率、降低免疫復合物花環率， 并減輕染塵矽肺的病理學改變. 結論： 高氧液能提高實驗性矽肺家兔紅細胞免疫功能，可延緩或抑制矽肺病變的發展，具有一定的臨床應用價值.
【關鍵詞】 高氧液；矽肺；紅細胞；免疫功能
【Abstract】AIM: To explore the effect of hyperoxygenated solution (HOS) on immune function of red blood cells in silicosis rabbits. METHODS: The silicosis rabbit models were prepared by injection of nonexposure bronchus， and then the rabbits were pided randomly into 3 groups: control group， silica group and silica + HOS group. Pathological changes of lung were observed under light microscopy， and red blood cell C3b receptor rosette rate (RCR) and immune complex rosette rate (ICR) were determined. RESULTS: Compared with the silica group， pathological changes of lung were ameliorated， RCR was significantly higher and ICR was lower in silica + HOS group. CONCLUSION: HOS can enhance immune function of red blood cell in silicosis rabbits and partly restrain the development of silicosis.
【Keywords】 hyperoxygenated solution; silicosis; erythrocytes; immune function
0引言
近年來，矽肺的發病與免疫的關系日趨受到關注，在矽肺的發病過程中伴隨著肺局部及全身免疫功能改變［1］. 在矽肺患者早期細胞免疫功能便出現減退，此種免疫損傷先于形態學的改變，其可能是組織結構改變的先兆，并與矽肺病變的進展起協同作用. 本實驗我們通過建立家兔矽肺模型，觀察紅細胞免疫功能的改變及高氧液的治療作用.
1材料和方法
1.1材料
高氧液用西安高氧醫療設備有限公司研制的“高氧醫用液治療儀”（專利號：922412936）. 對液體進行光量子溶氧活化處理，操作過程按照使用說明進行，選用氧流量3 L/min，溶氧10 min制成高氧液（HOS）. 標準石英粉塵由中國預防醫學科學院勞衛所提供，含SiO298%以上，≤5 μm微粒占99%.
1.2方法
1.2.1動物分組及處理健康家兔24只，由本校實驗動物中心提供. 按照處理因素不同隨機分成3組，分別為空白對照組、染塵組及染塵高氧液組，自由進食喂養. 自耳緣靜脈給予染塵高氧液組家兔高氧平衡鹽液100 mL靜滴， 2次/d，并于2，4，6，8 wk后檢測各組家兔紅細胞受體花環率(RBCC3bRR)及紅細胞免疫復合物花環率（RBCICR）.
1.2.2矽肺模型復制采用非暴露式氣管注入法，注入120 g/L的無菌石英混懸液1.0 mL，1次/d，持續2 mo.
1.2.3觀察指標觀察RBCC3bRR及RBCICR. 肺組織病理切片采用蘇木精伊紅（HE）染色.
統計學處理： 所有數據采用方差分析及LSDt檢驗，P
2結果
2.1矽肺家兔的肺組織病理染塵組和染塵高氧液組織病理切片均可見Ⅱ型（纖維細胞）和Ⅲ型（纖維細胞）矽結節病變存在，但染塵高氧液組中有部分Ⅰ型（細胞性）病變存在，其中可見較多的成纖維細胞；空白對照組則無上述病理改變（圖1）.
A： 空白對照組；B： 染塵組；C： 染塵高氧液組.
圖1各組肺組織病理切片
2.2各組RBCC3bRR及RBCICR 染塵高氧液組及對照組與染塵組相比，4，6，8 wk的RBCC3bRR均升高（P
轉貼于
3討論
矽肺的發病過程與免疫的關系日益受到關注. 相關研究發現患者的細胞免疫較正常人為低，并隨著病變的發展而加劇，尤其晚期存在著較為嚴重的細胞免疫功能紊亂. 紅細胞免疫系統觀點提出后，得到了較快的發展. 現已發現紅細胞具有清除免疫復合物、病原體及腫瘤細胞，識別、儲存、提呈抗原，促進T，B淋巴細胞免疫應答，增強巨噬細胞吞噬功能和NK，LAK細胞的殺傷力等免疫功能. 因而研究矽肺患者紅細胞免疫的變化及高氧液對矽肺患者紅細胞免疫系統的影響在臨床上具有發病機制的探討療效觀察、判定預后及診斷等方面的重要意義.
在正常情況下，紅細胞攜帶的免疫復合物很少．而在某些疾病時這種攜帶功能就會增加3～5倍. 當紅細胞免疫復合物增加時，其RBCC3bRR的水平降低［3］. 本研究我們發現矽肺家兔RBCC3bRR降低，RBCICR升高，紅細胞免疫水平繼發性降低；造成這種水平低下的原因是因為矽肺家兔由于肺組織損傷、肺泡破環、體內各組織供血供氧不足、新陳代謝失調、生理功能發生改變，導致細胞膜上受體功能改變；吸入體內的二氧化硅塵粒進入機體后吸附于細胞表面的蛋白上并使其變性、以自家抗原形式刺激機體產生相應的抗體，使循環中的免疫復合物增多，而眾多的復合物占據了大量的RBCC3b受體，使細胞免疫功能下降［4］.
高氧液是經高氧醫用液體治療儀溶氧活化生理鹽水、葡萄糖液和平衡鹽液等制備而成的含有高濃度溶解氧(O2)且有高氧分壓的液體，其治療缺血缺氧的作用已被大量基礎和臨床研究所證實. 本研究我們發現經高氧液治療后矽肺家兔的RBCC3bRR顯著升高，同時降低了矽肺家兔的RBCICR，于治療后4 wk RBCC3bRR出現顯著升高，而RBCICR開始明顯降低，治療 8 wk后得到進一步改善，表明高氧液對矽肺家兔紅細胞免疫功能的治療作用具有時間依賴性；其可能為高氧液血氧彌散半徑大，是正常動脈血的2倍，近似于2個大氣壓時高壓氧倉中動脈血的氧彌散半徑［5］，易于進入缺血缺氧組織［6］，從而改善了矽肺家兔各組織的缺氧狀況，穩定了體內的生理功能，一定程度上保護了細胞膜表面的受體，有關分子機制及信號轉導途徑還不清楚，尚有待于進一步研究.
【參考文獻】
［1］黃署海. 游離二氧化硅致免疫功能異常機理探討［J］. 中國職業醫學， 2000， 27(2): 43-45.
［2］郭珍. 紅細胞免疫功能及其檢測的臨床意義［J］. 西安醫科大學學報， 1990， 11(3)：282.
［3］郭峰. 紅細胞免疫學新探［M］. 南京: 南京大學出版社， 1993: 1-5.
［4］李宇飛，任峰玲. 矽塵對人體紅細胞免疫功能的影響［J］．工業衛生與職業病， 1997， 23(1): 16.
篇4
關鍵詞：老年人；非小細胞肺癌；T細胞亞群；自然殺傷細胞；放射治療
中圖分類號： R734.2 文獻標識碼： A 文章編號： 1008-2409(2007)06-1185-03
Analysis of cellular immune function before and after undergoing radiotherapy in elderly patients with non-small-cell lung carcinoma/DENG Yan-nong,CHEN Long.∥Beihai People's Hospital,Beihai 536000,China
Abstract:Objective:To study the change of cellular immune function in elderly patients with non-small-cell lung carcinoma(NSCLC) before and after undergoing radiotherapy.Methods:172 cases with NSCLC were randomly divided into 3DCRT group and conventional radiotherapy group.The curative effect of two groups and the levels of the peripheral blood T cell subgroups and NK before and after radiotherapy 7d,15d,30d,45d were compared. Results:①The difference of curative rate between the two groups was significant statistically (χ2=6.8910，P=0.0086).②The levels of the peripheral blood T cell subgroups and NK before and after radiotherapy 7d,15d,30d,45d of two groups,showed the significant difference statistically（P
Key words:aged；non-small-cell lung carcinoma；T cell subgroup；NK cell；radiotherapy
肺癌患者機體的免疫系統均受不同程度的影響[1]，觀察肺癌患者的免疫功能，對分析腫瘤的發展、判斷預后和治療效果均有重要的臨床意義。筆者總結2004年1月至2006年1月我院收治的172例老年人非小細胞肺癌（NSCLC）放療前后細胞免疫功能的變化，探討其與放射治療效果的關系。
1 資料與方法
1.1 一般資料
172例患者中，男124例，女48例，年齡60～86歲，平均（70.5±3.5）歲。全部患者均經組織學（纖維支氣管活檢）或細胞學（痰脫落細胞學）明確診斷，按1997年WHO臨床分期標準[2]分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期46例，Ⅲ期102例，Ⅳ期16例。隨機[3]將患者分為觀察組和對照組各86例，觀察組86例中男63例，女23例；年齡60～85歲，平均（70.5±2.5）歲；腫瘤臨床分期：Ⅰ期4例，Ⅱ期24例，Ⅲ期50例，Ⅳ期8例。對照組男61例，女25例；年齡61～86歲，平均（71.0±3.5）歲；臨床分期：Ⅰ期4例，Ⅱ期22例，Ⅲ期52例，Ⅳ期8例。兩組患者性別、年齡、分期等比較差異無統計學意義（P
1.2 方法
①放療方法：觀察組給予三維適形放射治療（3DCRT），先在治療床上做好真空墊體模固定器，在患者體表設立定位標記，以螺旋CT定位掃描，層厚5mm，然后在三維治療計劃系統（TPS）內勾畫靶區，制定放射治療計劃并進行劑量優化，設非共面同中心照射野5~7個，以90%等劑量覆蓋靶區，根據計算機打印出的圖紙，制作出適形低熔點鉛擋塊，最后用8-MVX直線加速器進行照射，5次/周，2～4GY/次，總劑量為50～66GY，平均劑量61.25GY。對照組采取常規分割照射，照射野包括肺部原發病灶、同側肺門及縱隔淋巴結引流區，5次/周，2GY/次，總劑量為60～70GY，平均劑量66GY。②檢測方法：放療前及放療開始后7d，15d，30d，45d分別抽取患者靜脈血，采用流式細胞術、間接免疫熒光法測定T細胞亞群和自然殺傷細胞（NK）。
1.3 觀察指標
①近期療效：根據WHO標準判定，分完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、無變化（NR）、進展（PD）四級，CR+PR為有效；②放療前后T淋巴細胞亞群及NK水平變化。
1.4 統計學處理
采用SPSS10.0軟件進行統計分析，計數資料采用χ2檢驗，計量資料數據以±s表示，采用t檢驗。
2 結果
2.1 近期療效：觀察組CR39例，占45.3%；PR44例，占51．2%；NC2例，占2.3%；PD1例，占1.2%，總有效率96.5%。對照組CR31例，占36.1%；PR42例，占48.8%；NC10例，占11．6%；PD3例，占3.5%，總有效率84.9%。兩組總有效率比較差異有統計學意義（χ2=6.8910，P
2.2 兩組放療前后T細胞亞群和NK水平變化比較見表1。表1 兩組放療前后T細胞亞群和NK水平變化比較（±s）
3 討論
隨著分子免疫學的迅速發展，T細胞和NK細胞在機體腫瘤免疫中的重要作用已逐漸被人們認識。T細胞介導的細胞
免疫是機體抗腫瘤免疫的主要機制，而外周血T細胞亞群是反映機體細胞功能的較好指標和參數[4]。CD+4為輔細胞亞群，能影響輔T細胞和抑制性T細胞的成熟，影響B細胞抗體的產生，活化后
細胞亞群具有免疫抑制作用，可抑制抗體的產生及同種異體抗體所誘導的細胞增殖反應，抑制CD+4T細胞產生細胞因子，從而抑制Tc細胞的活性。CD+4/ CD+8是反映細胞免疫平衡與否的敏感指標[6]，其值下降表示患者處于免疫抑制狀態，是腫瘤發生、發展的原因之一。NK細胞能直接或分泌細胞毒因子而殺傷腫瘤細胞，其值降低往往是腫瘤發展和發生遠處轉移的重要原因。國內外研究[1,7,8]已經證實，肺癌患者的免疫功能明顯降低，說明肺癌患者免疫功能出現不同程度的抑制，降低了清除腫瘤細胞的能力，使腫瘤得以持續生長。本研究結果顯示，放療開始后7d，15d兩組患者細胞免疫指標較放療前降低（P＜0.05），提示放療對患者細胞免疫有一定的負面影響。由于觀察組采用的是3DCRT，而3DCRT具有定位精確、靶區劑量集中、對周圍組織損傷小的特點[9]，為提高靶區劑量、增加局部控制率、減少細胞免疫的負面影響提供了可能性[8]，故觀察組放療開始后7d，15d細胞免疫指標下降水平與對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.001），表明3DCRT對老年人NSCLC患者細胞免疫的負面影響，明顯低于常規分割放療的負面影響。放療開始后30d，45d兩組患者細胞免疫指標恢復并超過放療前水平，可能與以下兩方面因素有關[10]：一是放療對患者細胞免疫負面作用逐漸減弱；二是放療殺傷腫瘤細胞，消除了腫瘤對機體免疫的抑制作用。本資料觀察組的CR占45.3%，PR占51.2%，總有效率達96.5%；對照組的CR占36.1%，PR占48.8%，總有效率為84.9%，兩組總有效率比較差異有統計學意義。而觀察組放療開始后30d，45d患者的細胞免疫指標明顯高于放療前和對照組，表明患者細胞免疫指標越高，其療效越好。因此，對于老年人NSCLC在放射治療前或放療同時給予免疫調節劑，可增強機體抗腫瘤免疫能力，提高放療效果，增加患者的存活時間和生存質量。
參考文獻：
［1］ 洪豐,熊剛,張瑞祥.中晚期肺癌患者手術前后細胞免疫功能變化［J］.中國病理生理雜志,2005,21(6)：1213-1215.
［2］ 陸蔚萱.呼吸系統疾病診斷與診斷評析［M］.上海：上海科學技術出版社,2004：435-452.
［3］ 胡修周.醫學科研方法與知識產權［M］.北京：華夏出版社,1998：137.
［4］ 徐進志,金維澍,徐廣全,等.非小細胞肺癌綜合治療期間免疫功能動態監測［J］.中國腫瘤,2003,12(8)：482-484.
［5］ 劉思海,朱瑞霞,吳曉阜,等. 立體定向適形放射治療煤工塵肺合并肺癌對外周血細胞免疫功能影響［J］. 中國職業醫學,2006,33(2)：114-115.
［6］ 王愛華,李全新.肺癌患者T細胞亞群、SIL-2R及NK活性的觀察［J］. 河北醫藥,1998,20(4)：195-196.
［7］ GILBERTO F,NICOLE SF.CD+8 T suppressor cells are back to the game：are they players in autoimmunity?［J］.Autoimmunity Reviews,2002,1(5)：279-283.
［8］ GRILLS I S,YAN D,MARTINEZ A A,et al.Potential for reduced toxicity and dose escalation in the treatment of inoperable non-small-cell lung cancer：a comparison of intensity-modulated radiation therapy(IMRT),3D conformal radiation, and elective nodal irradiation［J］.Int J Radiat Oncol Bio Phys,2003,57(3)：875-890.
［9］ 趙玉霞,蔡峰,王志宇,等.肺癌患者體液免疫狀態與放療效果的臨床分析［J］.大連醫科大學學報,2006,28(3)：195-197.
［10］ 劉穎,趙翠蘭,李冉冉.小細胞肺癌患者化療前后細胞免疫功能變化分析［J］.腫瘤防治研究，2005,32(10)：670.
篇5
[關鍵詞] 慢性阻塞性肺疾病；胸腺肽；細胞免疫力
[中圖分類號] R563 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2011）19-86-02
Effect of Thymosinα1 on Cell Immune Functions in COPD Patients
WENG Weiwen
Guangdong Province Lianzhou People's Hospital，Lianzhou 513400，China
[Abstract] Objective To study the effect of thymosin α1 on cellular immune function of COPD patients. Methods 60 cases of COPD patients were divided into control group and treatment group，30 patients in each group. Control group received conventional treatment；Patients in the treatment group were treated with conventional treatment plus thymosinα1，2 times per week for 4 weeks. Results In treatment group after treatment by thymosinα1，CD4+，and CD4+/CD8+ increased and CD8+ decreased，there were statistical differences between before and after treatment（P＜0.01）；PaO2 and FEV1% increased significantly，PaCO2 decreased significantly after treatment，there were statistical differences between treatment group and control group after treatment（P＜0.01）. Conclusion Thymosin enhances chronic obstructive pulmonary disease cell immunity and can reduce the frequency of acute attacks.
[Key words] Chronic obstructive pulmonary disease；Thymosin；Cellular immunity
以氣流受阻呈現不可逆進行性發展特征的慢性阻塞性肺病（COPD）疾病，其對氣體及有害顆粒呈現過度的炎癥癥狀，并且常伴隨全身系統性的炎癥癥狀[1]，因具有患病人數多、死亡率高的特點，被社會所關注[2]。COPD分為急性加重期與穩定期，急性加重期常常伴隨長時間的病程，給患者身心帶來極大傷害，而胸腺肽作為對其免疫力與急性發作有影響的藥物，正為廣大的醫療工作者所關注。
1 資料與方法
1.1一般資料
入選60例COPD急性加重期患者，均符合慢性阻塞性肺疾病全球創議（GOLD）診斷標準，即應用支氣管舒張劑后患者FEV1/FVC＜70%，排除對胸腺肽α1有過敏史、有嚴重肝腎功能損害者、病情危重或有嚴重并發癥影響治療效果者。按隨機數字表法分為兩組：治療組30例，男19例，女11例，平均年齡（62.6±7.8）歲；對照組30例，男16例，女14例，平均年齡（60.3±8.8）歲。兩組患者的性別、年齡差異均無統計學意義（P＞0.05）。
1.2治療方法
兩組均進行常規的抗感染（應用3代頭孢菌素，同時進行痰培養+藥敏，后根據藥敏應用抗生素）。治療組同時應用胸腺肽α1治療，每周2次，共4周；后分別檢測其外周血T淋巴細胞亞群及NK細胞值，并進行前后動態的比較。同時與對照組對比，用以找出上述指標于慢性阻塞性肺疾病過程中的轉化規律。同時檢查患者PaO2、PaCO2、FEV1%判斷治療效果。
1.3指標的檢測
以德國耶格公司出產的肺功能儀分別對健康組、治療前及治療后的NK細胞值進行測定；同時以免疫熒光標記法檢測T細胞亞群CD3+、CD4+及CD4+/CD8+值。
1.4統計學處理
采取SPSS13.0軟件，計量資料以均數±標準差表示，多組樣本均數對比采取單因素方差分析及q檢驗。
2結果
2.1治療組治療前后T淋巴細胞亞群與對照組比較
治療組治療前T細胞亞群計數與對照組治療前比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。治療后治療組T細胞的亞群計數與對照組比較，差異具有統計學意義（P＜0.01）。見表1。
2.2 治療組治療前后血氣分析與對照組比較
治療前兩組的PaO2降低、PaCO2升高、FEV1%降低，治療后兩組的PaO2均有升高、PaCO2均有降低、FEV1%均有升高，與治療前比較差異均具有統計學意義（P＜0.01）。并且，治療組治療效果明顯優于對照組，差異具有統計學意義（P＜0.01）。見表2。
注：與治療前比較，*P＜0.01；與對照組治療后比較，P＜0.01
3討論
NK具有免疫調節、廣譜抗腫瘤及抗感染的功能。大量臨床研究顯示，慢性阻塞性肺病患者急性加重期以及緩解期NK表達皆顯著低于健康人[3，4]。慢性阻塞性肺病患者的NK細胞百分數在急性發作期治療前有所降低，治療后有所升高，結果顯示胸腺肽α1對NK的提升效果明顯。慢性阻塞性肺疾病發作時，PaO2 與FEV1%明顯降低、PaCO2顯著升高，治療后PaO2 與FEV1%明顯升高，PaCO2明顯降低，且治療組的治療效果明顯優于對照組，差異具有顯著性（P＜0.01），結果顯示胸腺肽α1對COPD患者氣血指標的平衡具有顯著作用。
慢性阻塞性肺疾病并急性發作時機體的免疫力失調[5]，經T淋巴細胞亞群檢測主要呈現CD3+、CD4+及CD4+/CD8+等值的變化。實驗結果顯示，慢性阻塞性肺疾病并急性發作時，其外周血CD4+值下降，而CD3+沒有顯著變化，提示CD4+值下降也許為致使CD3+陽性率同CD4+/CD8+比值轉變的主要因素；CD4+值的下降不只降低了自身機制，亦破壞了免疫調節內同CD8+的動態平衡，導致免疫抑制因素占有了相對優勢，所以當下相關文獻的報道廣泛認為慢性阻塞性肺疾病急性發作期外周血T淋巴細胞此種轉化實際上說明慢性阻塞性肺疾病患者細胞免疫系統遭到損傷，其直接反映就是免疫力下降及失調[6-8]。CD4+值的下降以及CD4+/CD8+比例上的失調皆可影響其免疫力，為慢性阻塞性肺疾病并發感染的重要誘因。
實驗證明，通過胸腺肽α1治療慢性阻塞性肺疾病并急性加重期患者氣道里的CD4+、CD8+細胞轉化明顯。胸腺肽α1擁有胸腺肽V組分具有的全部免疫活性，可以增強機體免疫力。作為T的輔助細胞與誘導細胞的CD4+的指標提高可誘發機體免疫力的增強。相關專家研究顯示，胸腺肽α1能夠促進T細胞的分化成熟，提高T細胞的前體數目，增強自身殺傷細胞的分化及活性，令機體可以更出色地發揮免疫保護功能。胸腺肽α1對CD4+/CD8+的比值起到平衡作用，對機體T細胞亞群的調節作用亦非常顯著，起到令機體細胞的免疫維持健康水平，實現抗感染及腫瘤的作用。通過跟蹤隨訪，治療組患者（胸腺肽α1）發生急性加重的天數與人數比對照組均明顯較低，提高了患者的生活質量。以上表明，胸腺肽α1對COPD的治療與預防有重要作用，能夠減輕呼吸道感染，病情很容易得到控制，能降低COPD患者急性加重期的嚴重性與發病的頻率。
[參考文獻]
[1] 中華醫學會呼吸病學分會慢性阻塞性肺疾病學組. 慢性阻塞性肺疾病診治指南（2007年修訂版）[S]. 中華結核和呼吸雜志，2007，30（1）：8-17.
[2] 劉秀珍，吳巖. 慢性阻塞性肺疾病的健康教育[J]. 中外醫學研究，2010，8（12）：149-150.
[3] 劉杜姣，歐劍峰，趙麗，等. 老年COPD疾病患者T淋巴細胞亞群的臨床治療[J]. 中國實用內科雜志，2009，25（6）：44-46.
[4] 林如龍，田莉. 慢性阻塞性肺疾病急性發作期的臨床治療[J]. 中國醫學，2008，（6）：28-30.
[5] 劉德厚，李田力，張利山. 胸腺肽α1對穩定期中重度阻塞性肺疾病患者的臨床治療與分析[J]. 臨床肺科雜志，2009，11（8）：954-955.
[6] 李淑云，孫曉曉，王艷秋. 臨床中過敏性哮喘激發試驗后血內T淋巴細胞亞群的變化研究[J]. 西北國防醫學雜志，1998，（4）：24-26.
[7] 馮云路，任遠方，田四海. 胸腺肽α1對慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者的臨床治療與研究[J]. 四川大學學報醫學版，2009，38（3）：580-582.
[8] 張樹鋒，段曉，陳英. 胸腺肽對老年呼吸道感染免疫功能的影響[J]. 廣西醫學，2010，32（3）：283-284.
篇6
【關鍵詞】 矽肺； 肺結核； 細胞免疫
矽肺是由于長期吸入游離二氧化硅粉塵所致的，以肺部彌漫性纖維化為主的全身性疾病。其常見的并發癥為肺結核。據統計，矽肺并發肺結核的平均合并率分別為：Ⅰ期矽肺為20%，Ⅱ期矽肺為30%，Ⅲ期矽肺50%，兩病合并存在，相互影響，相互促進，加快病變進展。機體對結核的免疫作用由細胞免疫完成，體液免疫作用有限[1]，據此推測矽肺患者易并發肺結核的原因可能與細胞免疫變化相關，本實驗是通過對矽肺患者及健康人群的細胞免疫水平進行檢測，探討細胞免疫水平在矽肺并發肺結核中的作用。
1 一般資料
1．1 研究對象 健康組：選取在沈陽市第九醫院體檢正常的退休人員30例，年齡60～75歲。矽肺組：選取在本院收治的矽肺患者50例，年齡60～75歲，并嚴格排除糖尿病、腫瘤等影響細胞免疫水平的疾病患者。其中Ⅰ期矽肺30例，Ⅱ期矽肺12例，Ⅲ期矽肺8例。
1．2 藥品及試劑 TRITEST試劑，免洗溶血素均由美國BECTONDICKINSON公司提供。
1．3 實驗儀器 美國BECTONDICKINSON公司的流式細胞儀由中國醫科大學附屬第一醫院3P實驗室提供。
2 實驗方法
2．1 研究對象分組 健康組：60～75歲的健康體檢者30例，Ⅰ期矽肺組30例，Ⅱ期矽肺12例，Ⅲ期矽肺8例。上述矽肺組患者年齡均在60～75歲，矽肺分期診斷標準按照國家制定的［塵肺病診斷標準（GBZ70-2002）］。
2．2 標本采集及檢測 采集試驗者靜脈血2 ml，乙二胺四乙酸（EDYA）抗凝，防振蕩，采血后立即送檢，提取淋巴細胞，在室溫下避光反應20 min后，用美國BECTONDICKINSON公司的流式細胞儀進行檢測。
2．3 觀察指標 矽肺組與健康組外周血T淋巴細胞亞群比較。
2．4 統計學方法 計量數據用均數±標準差（x±s）表示，兩組間均數比較采用t檢驗，用統計軟件SPSS13．0分析處理，相關性處理采用直線相關分析。
3 實驗結果
將矽肺組50例與正常組30例進行比較，矽肺組的CD4百分數較健康組明顯下降，CD8百分數較健康組明顯上升， CD4/ CD8比值較健康組明顯下降，以上三組數據比較，P
4 討論
矽肺是由于長期大量吸入含游離二氧化硅粉塵所引起的以肺部彌漫性纖維化為主的全身性疾病。肺結核是矽肺最長見的并發癥，是威脅矽肺患者生命的最主要原因。有研究表明矽肺的發展與肺結核的發生發展之間有著互為因果的關系，矽肺病變給肺結核的預防和治療增加了困難，而結核病的發生又進一步加劇了矽肺間質纖維化的發展[2]。肺結核主要的免疫保護機制是細胞免疫，因而筆者推測矽肺患者可能存在著細胞免疫狀態的改變，而矽肺易于并發肺結核的原因可能與此有關。
T淋巴細胞是一個不均一的群體，存在許多功能和分化抗原方面均不相同的亞群。淋巴細胞按其表面標志和功能不同，分為CD4和CD8兩大亞群[3]。CD4淋巴細胞亞群中主要有遲發型超敏反應淋巴細胞和誘導-輔淋巴細胞。CD8淋巴細胞亞群中包括抑制性淋巴細胞和殺傷性淋巴細胞[4]。各亞群淋巴細胞的功能表現為以下幾方面，殺傷靶細胞作用：主要由T淋巴細胞中CD4-、CD8+完成。介導遲發性超敏反應：在CD4+、CD8-淋巴細胞亞群中，有一類細胞可分泌巨噬細胞活化因子、巨噬細胞移動抑制因子等細胞因子，可活化巨噬細胞，使其集中在病原體入侵局部，并增強巨噬細胞功能；參與免疫調節：CD4+、CD8-淋巴細胞的主要功能是通過其分泌的淋巴因子，增強和擴大免疫應答過程，而具有免疫抑制作用的CD4-、CD8+淋巴細胞，可抑制T細胞和B細胞的功能，從而抑制免疫應答過程，兩種作用迥異的T細胞借其相互拮抗作用調節著免疫應答過程，以保持免疫功能的平衡[5]。
本實驗通過對矽肺組與健康組外周血T淋巴細胞亞群檢測，發現矽肺組的CD4百分數較健康組明顯下降，CD8百分數較健康組明顯上升，CD4/ CD8比值較健康組明顯下降，證明矽肺患者的細胞免疫水平明顯下降，推測矽肺患者易并發肺結核可能與此有關。因此，臨床上治療矽肺時，通過聯合應用免疫增強劑治療，提高矽肺患者的細胞免疫水平，有可能提高矽肺治療的療效，并減少矽肺合并肺結核的可能。
參考文獻
［1］ 朱元鈺，陳文彬.呼吸病學. 人民衛生出版社，2003：1564-1576.
［2］ Hongkong Chest Service/Tuberculosis Reserch Centre. Madras/British Medical Research Council. A double-blind placebo-controlled clinical trial of three antituberculosis chemoprophylaxis regimens in patients with silicosis in Hongkong . Am Rev Respir Dis,1992,145(1):36-41.
［3］ Viret C, Janewany CA Jr. Self-specific MHC class Ⅱ-restrictedCD4-CD8- T cells that escape deletion and lack regulatory activity. J Immunol,2003,170(1):201-209.
篇7
在肝癌的治療中，T細胞免疫在腫瘤免疫中起著重要的作用。盡管肝癌組織存在淋巴細胞的浸潤，但是這并沒有使肝癌的病情進展速度減緩。所以關于淋巴細胞在腫瘤患者體內的功能變化特別是T淋巴細胞在肝癌患者體內的免疫作用值得進一步的研究。目前，一直缺少一個有效而且特異性強的研究模型。從而造成研究的影響宿主免疫狀態因素增多，增加了研究的難度。本研究在裸鼠體內建立起一個以T細胞免疫功能重建為基礎的模型，為進一步進行免疫與腫瘤的轉移和復發的關系提供實驗平臺。
1資料和方法
1.1細胞系與培養 小鼠高淋巴高轉移潛能細胞株（Hca-P）和低轉移潛能細胞株（Hca-F）購于大連醫科大學。在含有10%小牛血清的RPMI1640（Invitrogen，LifeTech.，美國）中，置于37℃、含有5%CO 2 溫箱中常規培養、傳代。或者接種于615小鼠腹腔，4天后形成腹水，取腹水，分離腫瘤細胞傳代。
1.2動物的飼養 BALB/c nu/nu雄性裸小鼠，4-6周齡，體重20g左右，置于層流式超凈架內的有機玻璃飼養盒內（5只/盒），在恒溫（25-27℃）、恒濕（45-50%）、無特殊病原菌（SPF）級環境下飼養。滅菌處理的水和飼料供動物自由攝入。
615小鼠，雄性，4-6周齡，體重20g左右，飼養于復旦大學中山醫院實驗動物中心。
1.3小鼠T淋巴細胞的提取 取2只4周齡Balb/c雄性小鼠，引頸處死，無菌取胸腺，放于不含小牛血清的RPMI1640中，于200目金屬網上研壓，收集網下細胞懸液注入無菌離心管中，用不完全培養液洗滌2次并重新懸浮。
將懸浮的細胞再次離心，計數，與淋巴細胞分離 液（1.077A，批號:10110487，AXIS-SHIELD PoC AS，Norway）按照細胞懸液:分離液=2∶1的體積小心將細胞懸液加于分離液上方，分層放置。再于600g水平離心20min。小心取出離心管，吸取中間的單個核細胞層，用PBS重新懸浮，并計數。
將分離的單個核細胞用T淋巴細胞分離柱（CEDARLANE，Canada）進行分離，方法詳見說明書。收集分離到的T淋巴細胞，進行下一步的實驗。
1.4 T淋巴細胞免疫體系在裸鼠體內的建立 取42只Balb/c nu/nu雄性裸小鼠，分為4組。分別是高轉移重建組（P1），高轉移未重建組（P2），低轉移重建組（F1），低轉移未重建組（F2）。第1天取T淋巴細胞分別經尾靜脈注入小鼠體內。每只小鼠0.3ml，含細胞數量為（6～8）×10 6 個。此后，每周尾靜脈注射T淋巴細胞1次，3周后處死小鼠。
1.5 T細胞免疫功能重建效果的評價 淋巴細胞表型的鑒定:分別取高、低轉移組的小鼠的外周血淋巴細胞以及脾細胞（分離方法同上），配制成大約1×10 6 /ml，按照10 6 細胞量加入10μl小鼠CD3、CD4、CD8流式抗體（eBioscience Inc.），避光反應30分鐘后，流式細胞儀（Becton Dickinson，USA）檢測CD3、CD4、CD8細胞的百分比。每組隨機抽取7例樣本進行檢測。
1.6淋巴細胞功能的檢測 采用混合淋巴細胞反應，進行體外實驗。分別于無菌條件下取兩只免疫重建后的裸鼠脾臟以及未進行免疫功能重建的裸鼠脾臟，按照上述程序分離單個核細胞。進行混合淋巴細胞反應。
1.7統計方法 采用SPSS11.0對實驗結果進行單因素方差分析以及秩和檢驗。
2結果
2.1 T細胞免疫功能重建前后細胞表面標志物的變化 裸鼠T細胞免疫功能重建后的CD4/CD8與對照組相比有明顯的差異（P
圖1 流式細胞儀檢測T細胞免疫功能重建前后裸鼠外周血淋巴
細胞標志物變化
2.2 T細胞免疫功能重建前后免疫細胞功能檢測見表2。免疫功能正常的接種高（P）、低（F）轉移細胞株的T細胞與相應的腫瘤細胞進行混合淋巴細胞反應后，其cpm值均低于未重建組的cpm值。其中在高轉移組（P組）的cpm值明顯小于對照組（P
3討論
腫瘤的轉移與免疫之間的關系一直是研究的熱點之一。肝癌的轉移和復發與基因的突變有關，也與機體的免疫狀態有關 ［1，2］ 。肝癌復發轉移的研究將建立在生物學的基礎上，在治療方面，肝癌根治性切除 后生物治療可能占重要地位，尤其是在提高機體免疫功能方面。不論從整體角度研究免疫治療還是在微觀角度研究，對肝癌而言，均需要建立一個可以進行研究的模型。
目前，研究者建立了各種模型進行腫瘤轉移的研究 ［3-8］ 。關于肝癌轉移研究的模型也進行了探討 ［9］ ，但是關于肝癌免疫研究的模型目前尚缺乏。本研究利用T細胞免疫功能重建在裸鼠體內建立起一種新型研究的模型。該模型利用正常Balb/c小鼠的胸腺細胞建立在無胸腺的Balb/c nu/nu裸鼠體內，具有以下特點:①兩種小鼠種系相同，高、低轉移的細胞株亦是小鼠來源，排除了MHC限制性對研究的影響;②本模型在裸鼠體內較為單純地模擬了T細胞免疫功能的重建，經過流式細胞儀檢測裸鼠的外周血和脾臟T淋巴細胞的表達，證實了該免疫重建模型的有效性;③本研究利用胸腺細胞進行免疫功能重建，可以較好的模擬免疫環境，便于深入進行研究。可以為今后進一步進行腫瘤免疫方面的研究提供參考。
但是在研究中我們發現，免疫重建后裸鼠外周血及脾臟T淋巴細胞絕對比例數值不高，淋巴細胞殺傷腫瘤細胞功能并不理想。分析可能系以下原因:①采集標本的時間與重建時間間隔較長或免疫功能重建所用胸腺中native T細胞進行陽性選擇大量死亡所致;②肝癌細胞是否存在殺傷免疫細胞的機制尚不清楚，但是腫瘤細胞對免疫細胞的抑制作用已經有大量的研究 ［10，11］ ;③本免疫重建模型建立的方法還不夠完善，有待于進一步摸索。此亦為今后模型進一步改進的方向。但是，該模型的建立為深入研究肝癌轉移的免疫學因素及手段提供了實驗平臺。
【參考文獻】
1TaborE.Livertumors andhostdefense.SeminLiverDis，1997， 17（4）:351-355.
篇8
[關鍵詞]結核病；γ干擾素釋放試驗分析技術；A.TB檢測
[中圖分類號] R52 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2016）10（c）-0146-03
[Abstract]Objective To compare the application value of specific cellular immune response to tuberculosis bacilli （A.TB detection） and Mycobacterium tuberculosis antibody in diagnosis of tuberculosis.Methods From July 2014 to December 2015，113 tuberculosis （TB） suspects who visited the infectious disease section of our hospital were recruited.During the same term，20 healthy volunteers were included as control.Of the 133 subjects，65 cases were in TB group，48 cases were in non-TB group and 20 cases were in control group.All subjects were tested by both A.TB and TB-Ab，while tuberculin skin test （TST） was performed among subjects in non-TB group and control group.Results The sensitivity and specificity of A.TB were 86.27% and 75.15%， respectively.While the sensitivity and specificity of TB-Ab were 73.91% and 59.46%，respectively.There were significant differences between those of A.TB and TB-Ab （χ2=3.941，P=0.047 and χ2=5.268，P=0.022，respectively）.Both A.TB and TB-Ab had positive correlation with TST results （r=0.280，P
[Key words]Tuberculosis；Interferon gamma release assay；A.TB detection
我國是結核病高發國家之一，每年新增結核病患者約150萬。因此結核病是我國重點控制的重大疾病之一，結核病的暴發將會給中國的公共衛生安全帶來極大的威脅[1-3]。在結核病防治中，如何快速準確地診斷結核是筆者面臨的最大難題之一。
目前常用于臨床診斷的方法無法及時、有效地對結核病進行診斷。近年來，γ干擾素釋放試驗分析技術（IGRA）被用于結核病的診斷，已有研究顯示出了良好的應用前景[4-5]。其中有兩種比較成熟的γ干擾素釋放試驗方法，即酶聯免疫吸附法（ELISA）和酶聯免疫斑點法（ELISPOT）[6]。本研究選用結核桿菌特異性細胞免疫反應檢測（A.TB）（酶聯免疫法）試劑，通過與傳統方法對比，探討其在臨床特別是在基層醫院中的應用價值。
1資料與方法
1.1一般資料
選取2014年7月～2015年12月來我院感染科就診的結核病或疑似結核病患者113例；同期招募在我院體檢中心的健康志愿者20名進行分組觀察及對照。
具體分為：①結核病組65例，年齡18～59歲，平均（37.50±10.20）歲；男42例，女23例；伴有空洞15例，為肺結核或肺外結核患者，有典型的結核臨床癥狀，細菌學、病理學和影像學明確診斷，抗結核治療有效，抗結核治療時間≤4周。②非結核病組48例，年齡17～63歲，平均（42.22±13.90）歲；男36例，女12例；伴有空洞7例，為疑似結核病經臨床或細菌學、病理學和影像學病理檢查排除結核病，無結核病史或接觸史，PPD試驗陰性。③健康志愿者組20例，年齡17～20歲，平均（18.39±1.14）歲；男12例，女8例；在我院體檢中心體檢，身體健康，無結核病史或接觸史，PPD試驗陰性。
納入標準：①符合“結核病”西醫診斷標準或排外診斷標準者；②年齡17～65歲者；③依從性良好并自愿簽署知情同意書者。
排除標準：①合并心腦血管、腎和造血系統等嚴重原發性疾病及精神病患者；②對本試驗用藥過敏者；③有人免疫缺陷病毒感染、急性病毒感染者；④有免疫抑制劑用藥史者；⑤妊娠婦女[7]。
診斷標準：依據《中華人民共和國衛生行業標準肺結核診斷標準（WS288-2008）》《中國結核病防治規劃實施工作指南（2008年版）》《臨床診療指南?結核病分冊》[8]。
所有受試者均同時進行A.TB和結核菌特異性抗體檢測，非結核病組和健康對照組還要進行PPD試驗，所有受試者遵守赫爾辛基宣言和臨床藥理試驗管理（GCP）規范，獲得南昌縣人民醫院倫理委員會批準。
1.2儀器與試劑
水浴鍋、酶標儀、A.TB試劑盒（海口維v璦生物研究院）、結合抗體試劑盒、結核菌素。
1.3方法
采用A.TB試劑盒進行IGRA檢測。將肝素鈉抗凝的全血4 ml顛倒混勻，分別吸取1 ml全血加入陰性刺激劑（N）、陽性刺激劑（P）、ESAT-6和CFP-10（T） 3個反應管中，將混勻后的N、P、T管在37℃水浴箱中培養22～24 h，取上清血漿50 μl分別加入已加好50 μl稀釋液的目標孔中，37℃孵育1 h后洗板，分別加入100 μl檢測抗體工作液，37℃孵育30 min后再次洗板，分別加入100 μl親和素-辣根過氧化物酶，37℃孵育30 min后洗板，然后加入混合好的底物A與底物B 100 μl，37℃避光孵育10 min后加入100 μl終止液。15 min內用酶標儀讀取450 nm處的OD值，然后代入標準曲線方程得到N、P和T 3個濃度值，再計算（T-N）/（P-N）值，當N
1.4統計學處理
采用SPSS 13.0統計軟件對數據進行分析，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料用百分率（%）表示，采用χ2檢驗，兩種檢測方法與PPD試驗結果的相關性采用秩和相關分析。以P
2結果
2.1 A.TB試驗檢測結果
對133例樣本進行A.TB試驗檢測，結核病組檢出陽性56例，非結核病組檢測陽性16例，健康志愿者組檢測1例陽性。A.TB檢測對結核病輔助診斷的陽性預測值為86.27%，陰性預測值為75.15%。
2.2 A.TB檢測與結核抗體結果的比較
A.TB檢測對結核病輔助診斷的敏感度為86.27%，特異度為75.15%，結核菌特異性抗體檢測分別為73.91%和59.46%；兩種方法敏感度和特異度比較，差異有統計學意義（χ2=3.941，P=0.047；χ2=5.268，P=0.022）。A.TB檢測及結核菌特異性抗體檢測均與PPD皮試結果呈正相關（r=0.280，0.253，均P
3討論
結核病是一種嚴重危害人民健康的慢性傳染病，我國是全球22個結核病流行嚴重的國家之一，同時也是全球27個耐多藥結核病流行嚴重的國家之一[9-10]。我國結核病患病人數居世界第二位，僅次于印度。結核病是我國重點控制的重大疾病之一，結核病的暴發會給中國的公共衛生安全帶來極大的威脅[11]。
結核病防治的最大挑戰之一是缺乏先進的診斷工具，目前用于臨床診斷的方法包括痰培養、痰涂片、結核菌素試驗、抗體檢測、PCR分子診斷、影像學檢查等，這些方法要么敏感度低，要么特異度低，無法有效地對結核桿菌的感染進行診斷[12-14]。因此，臨床上結核病的誤診和漏診非常普遍，基層醫院更是如此。結核病的預防和治療，均迫切需要更敏感和特異的診斷技術[15]。近年來，IGRA被用于結核病的診斷成為熱點[16]。IGRA是一種用于結核桿菌感染的體外免疫檢測的新方法。現有研究表明，IGRA不受卡介苗接種和非結核分枝桿菌感染的影響，在MTB感染（包括活動性結核病和潛伏感染）中的診斷價值較高[17]。美國CDC指南建議，在當前應用結核菌素試驗PPD的所有情況下均可采用IGRA替代，多個大型公共衛生機構已將結核菌素試驗PPD全部替換為IGRA。IGRA技術目前已獲得歐美國家FDA批準認證。
IGRA技術目前有2種，包括基于全血細胞培養的ELISA和基于外周血淋巴細胞培養的ELISPOT。已有研究表明，兩者診斷性能相似，顯示出了良好的應用前景。在2011年之前，全球僅有澳大利亞和英國以IGRA技術開發出來的產品。國內多個研究集中在ELISPOT檢測技術上，對ELISA檢測技術方法的研究報道極少，且IGRA技術在基層醫院幾乎沒有開展。
A.TB試劑盒是海口VTI生物研究院基于IGRA研發出的國內首款體外細胞免疫診斷試劑盒，為ELISA檢測技術，于2011年7月正式獲國家食品藥品監督管理局批準。首都醫科大學附屬北京胸科醫院高孟秋等[3]研究認為，A.TB（ELISA）和T-SPOT.TB（ELISPOT）檢測的整體診斷性能相似，A.TB檢測在操作和結果判讀方面明顯優于T-SPOT.TB檢測，且對操作者的技能和實驗室設備的要求較低。
本研究結果顯示，A.TB檢測對結核病輔助診斷的敏感度為86.27%、特異度為75.15%，結核抗體檢測分別為73.91%和59.46%；兩種方法的陽性預測值和陰性預測值比較，差異有統計學意義（χ2=3.941，P=0.047；χ2=5.268，P=0.022）。A.TB檢測及結核抗體檢測均與PPD皮試結果呈正相關（r=0.280，0.253，均P
綜上所述，A.TB試劑在結核病臨床輔助診斷中的應用價值顯著高于結核菌特異性抗體檢測，對結核病具有重要的輔助診斷價值，尤其適用于我國卡介苗接種的人群。對菌陰結核病，肺外結核和HIV/結核聯合感染，糖尿病合并結核病患者，以及結核病公共突發事件具有重要應用價值，且對操作者的技能和實驗室設備的要求也較低，適宜在基層醫院開展。
[參考文獻]
[1]劉萍萍，鐘耐容，林偉斌，等.不同取痰方式結核桿菌痰涂陽性率及其影響因素研究[J].現代醫院，2016，16（7）：999-1000.
[2]鄭團圓，王士列，沈小平，等.新型隱球菌性腦膜炎與結核性腦膜炎的臨床差異研究[J].中國當代醫藥，2014，21（30）：50-52.
[3]高孟秋，劉菲，紀濱英，等.兩種γ-干擾素釋放分析在結核病臨床診斷中的比較研究[J].中華結核和呼吸雜志，2012， 35（10）：762-765.
[4]宋其生，陳秀琴，趙琴，等.結核菌素純蛋白衍生物試驗凈增值與γ-干擾素釋放試驗在結核病群體感染中的診斷價值[J].中華結核和呼吸雜志，2012，35（9）：669-672.
[5]王旭洲，謝飛來，許文靜，等.EDTA修復肉芽腫組織中熒光定量PCR檢測結核桿菌的應用[J].臨床與實驗病理學雜志，2016，32（6）：665-668.
[6]許蘊怡，蔡杏珊，劉燕文，等.PCR線性雜交酶顯色法與BD960液體法在耐多藥結核桿菌藥敏結果的對比分析[J].現代醫院，2016，16（4）：529-531.
[7]董忠誼，鐘文昭.克隆源性腫瘤新抗原誘導T細胞免疫反應增強免疫檢查點抑制劑療效[J].循證醫學，2016，16（2）：67，69.
[8]王潔玲，唐余燕，張毅，等.結核分枝桿菌抗原Ag85B優勢誘導活動性結核患者Th1型細胞免疫反應研究[J].醫學研究雜志，2016，45（3）：77-82.
[9]劉曉慧，吳桂花，蘇慧婷.侵襲性肺曲霉菌病感染早期特異性T細胞免疫反應的變化及意義[J].中國醫師進修雜志，2015，38（11）：799-802.
[10]雷靜，李奕恒，劉旭昭，等.動物源Ⅰ型膠原蛋白可引起BALB/c小鼠細胞免疫反應和組織免疫毒性[J].中國組織工程研究，2015，19（34）：5506-5512.
[11]譚遙，陳婷，李亞偉，等.新疆維、漢族鼻咽癌患者LMP2A特異性T細胞免疫反應差異性研究[J].新疆醫科大學學報，2015，38（1）：1-5.
[12]任皎，趙莉，張卉，等.人瘤病毒11型L2NE7E6融合蛋白的原核表達及其誘發的T細胞免疫反應[J].生物技術通訊，2014，25（4）：474-478.
[13]鄧中華，謝志萍，姚立紅，等.人博卡病毒VP2病毒樣顆粒誘導特異性細胞免疫反應的研究[J].中華實驗和臨床病毒學雜志，2013，27（2）：141-143.
[14]趙煜，張濤，譚勇，等.IL-15對樹突狀細胞激活的T淋巴細胞免疫反應的作用觀察[J].中國腫瘤臨床，2013，40（3）：127-130.
[15]呂盈盈，王江蓉，廖晶，等.HIV/HCV共感染合并血友病患者利巴韋林聯合干擾素治療前后特異性細胞免疫反應的研究[J].臨床內科雜志，2011，28（12）：827-830.
篇9
關鍵詞 蜂膠黃酮 細胞免疫 小鼠
中圖分類號：GR587.1 文獻標識碼：A DOI：10.16400/ki.kjdks.2016.02.027
糖尿病（Diabetes mellitus，DM）是因胰島素絕對或者相對不足而引起的體內糖、蛋白質、脂質代謝紊亂的一種疾病，目前尚無有效的治療措施。隨著生活方式的改變和老齡化進程的加速，我國DM的患病率正在呈快速上升趨勢，成為繼心腦血管疾病、惡性腫瘤之后的另一種嚴重危害人民健康的慢性非傳染性疾病。①2007年全國成年人糖尿病調查顯示，糖尿病患病率為9.7%，估計我國現有糖尿病患者9240萬，居全球第l位。②長期的高血糖可導致CD4、CD4/CD8、B細胞、NK細胞顯著性減低，③機體免疫功能下降，從而引起糖尿病并發癥如肺結核、腎病等疾病的發生。糖尿病并發癥累及多個器官，致殘、致死率高，嚴重影響患者的身心健康，并給個人、家庭和社會帶來沉重的負擔。
蜂膠是蜜蜂采集植物的樹脂，并混和自身的唾液和蜂蠟，咀嚼而成的一種有粘性的膠狀物質。具有抗菌消炎、抗病毒、抗真菌、排除毒素、增強免疫、軟化血管、凈化血液、改善微循環、抗氧化、抗腫瘤、抗細胞毒素、局部麻醉、促進組織再生等廣泛的生物學作用。
本實驗以蜂膠類黃酮為處理因素，以糖尿病小鼠為實驗對象，觀察蜂膠類黃酮對糖尿病小鼠免疫系統調節機制的影響，以動物實驗為基礎，推論蜂膠對糖尿病患者的作用，為減少糖尿病及其并發癥的發生、發展提供科學依據。
1材料與方法
1.1 實驗動物與材料
以健康的清潔級CD-1昆明小鼠為實驗動物，全部為雄性，體重均為18～22g之間，以減少實驗中的誤差。
蜂膠軟膠囊為湖南明園蜂業生產的不含其他藥物成份的純蜂膠制劑，產品標準號為Q/OKDE 006，衛生許可證號為湘衛食準字[2006]第430000-000077號，安慰劑為湖南明園蜂業生產的不含蜂膠成分的蜂膠溶劑油膠囊。
1.2 試驗方法
（1）先將小鼠造模，造模采用試劑為四氧嘧啶，將小鼠禁食12小時后，腹腔注射四氧嘧啶185mg/Kg，一周后測血糖，隨機血糖>11.1mmol/L者為糖尿病小鼠，連續四周監測所有小鼠，直到所有小鼠出現糖尿病癥狀或者死亡。造模成功后，將糖尿病小鼠隨機分配到四個不同的處理組，以0.2ml/10g?BW的容量給小鼠灌胃，A組為對照組，對照組灌胃不含蜂膠的溶媒；B組、C組和D組分別灌胃低劑量（175mg/Kg?BW）、中劑量（350mg/Kg?BW）和高劑量（700mg/Kg?BW）的蜂膠，灌胃30天。
（2）實驗結束時，無菌取脾后制成細胞懸液，使用“MTT法”檢測淋巴細胞的增殖轉化能力。采用加ConA孔的光密度值D（570nm）減去不加ConA孔的光密度值D（570nm）指標表示。
（3）使用二硝基氟苯誘導小鼠的遲發型變態反應（DTH），比較各組小鼠耳廓腫脹度。具體步驟：在實驗結束前6d將小鼠腹部皮膚脫毛約3cm？cm的范圍，將DNFB均勻涂抹于小鼠脫毛部分的腹部皮膚致敏，6d后再次將DNFB涂抹于小鼠耳部，24h后處死小鼠，剪下小鼠耳殼，稱重，以小鼠耳殼的重量來表示遲發型變態反應是否發生及其發生程度如何。
1.3 統計學方法
收集到的資料類型為計量資料，采用SPSS17.0軟件進行分析，各組之間的比較采用方差分析的統計方法進行。
2 結果
2.1 小鼠初始體重的比較
在實驗前測量小鼠體重，比較各劑量組小鼠實驗前的體重均數，發現各組小鼠體重差異無統計學意義（P>0.05），小鼠初始體重在各組間分布均衡；造模后，由于糖尿病對小鼠的影響，小鼠出現體重比造模前減輕的情況。
2.2 蜂膠對小鼠遲發型變態反應的影響
從表1可見，各劑量組的耳廓腫脹度相比差別有統計學意義（P
2.3 蜂膠對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化能力的影響
如表2所示，比較四組差值d的大小，結果顯示四組差值總的來說有差別（P0.05），其余各組兩兩比較差異均有統計學意義（P
3 討論
蜂膠（Propolis）是醫學寶庫的古典名藥， 已有數千年的歷史。近年來許多科學家對蜂膠的成分進行了研究，發現蜂膠中包含300多種已知的物質，其主要成份為黃酮類、萜類 、酚類 、酯類 、礦物質、維生素、脂肪酸等。④⑤黃酮類物質是人體所必需的營養素之一，也是蜂膠最主要的活性成分種類之一。黃酮分子量小，易被人體吸收，能通過血管屏障，進入脂肪組織，它對人體的健康具有廣泛的作用，當體內缺乏黃酮時，易導致大腦和心臟功能不全，血管硬化，脆性增強。⑥⑦⑧糖尿病在全國乃至全世界已經逐漸成為一種嚴重危害人類健康的疾病，其并發癥累及多個器官，致殘、致死率高，嚴重影響患者的身心健康，并給個人、家庭和社會帶來沉重的負擔，因此尋求方法幫助糖尿病患者抵抗抵抗疾病本身及其并發癥成為了已經迫不及待。在本次研究旨在以動物為研究對象，目的是推斷蜂膠黃酮能否對糖尿病有積極的作用，在實驗中，我們將小鼠分成四組，分別以零劑量，低劑量（175mg/Kg?BW）、中劑量（350mg/Kg?BW）和高劑量（700mg/Kg?BW）的蜂膠黃酮灌胃，發現蜂膠黃酮確實對糖尿病小鼠的細胞免疫功能有提升的作用，它能促進小鼠的遲發型變態反應，且能促進脾淋巴細胞的轉化功能，且蜂膠黃酮對細胞免疫的提升作用隨著灌胃濃度的升高而上升。如果能證實蜂膠對人類也有相同的作用，那么蜂膠對細胞免疫的促進作用不僅能幫助糖尿病患者抵抗疾病，在許多其他的疾病治療中，如感染、惡性腫瘤、自身免疫系統疾病等，也會產生十分重要的影響。
我國是一個蜂膠產品生產的大國，資源豐富，這是蜂膠類產品生產的堅實基礎，但蜂膠成分復雜，在蜂膠的醫用道路上，還需要大量的研究。
注釋
① 羅美莊，魏高文，黃丹丹等.蜂膠軟膠囊輔助綜合干預對糖尿病高危人群生命質量的影響[J].實用預防醫學，2008.15（6）.
② 魏高文，馮務群，夏曉凱等.蜂膠軟膠囊對小鼠糖尿病預防作用的實驗研究[J].實用預防醫學，2007.14（2）：530-531.
③ 毛達勇，周有利，朱名安等.2型糖尿病伴感染患者細胞免疫和體液免疫的研究[J].鄖陽醫學院學報，2003.22（5）：274-277.
④ 高暢，楚勤英，唐志雄等.蜂膠對糖尿病大鼠創面愈合的影響[J].感染、炎癥、修復，2008.9（1）：25-28.
⑤ 李雅晶，茹建甫.蜂膠桑葉復合片對2型糖尿病病人糖脂代謝的調節作用[J].安徽農業科學，2010.38（36）：20611-20613.
⑥ 孔慶峰，許志形，鄧玉文.國內蜂膠黃酮的藥理學研究近況[J].實用醫藥雜志，2006.23（8）：1003-1004.
篇10
[關鍵詞] 體液免疫；病情轉歸；手足口病；T細胞亞群
[中圖分類號] R725.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）10（a）-0108-03
手足口病（HFMD）是臨床常見的嬰幼兒傳染性疾病[1]。發病人群多為5歲以下兒童，臨床癥狀主要有手、足、口腔等部位的皰疹或者是破潰性潰瘍等，少數患兒可引發腦膜炎、心肌炎以及肺水腫等并發癥。近幾年來，HFMD的發病率逐年升高，如何在發病早期進行有效評估并對重癥患兒危險性給予及時干預，改善患兒病情預后，一直的臨床研究的重點[2]。目前實驗室T細胞亞群及免疫球蛋白等免疫學檢測指標，在一定程度上可有效反映HFMD患兒的機體免疫狀態[3]。該次研究抽選2010年7月―2014年5月175例HFMD患兒，對其不同病程患兒血清免疫球蛋白指標及T細胞亞群相關指標進行分析，并與健康患兒進行對比，旨在探討HFMD患兒病情進展與細胞及體液免疫水平的關系，以及機體免疫水平在HFMD患兒病情進展中的作用，現報道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
隨機抽選該院收治的175例HFMD患兒，診斷均符合《手足口病診療指南》[4]的診斷標準，其中男92例，女83例，年齡5個月～8歲，平均（2.85±1.07）歲；根據臨床表現和病情發展分型：輕癥型63例，其中男42例，女21例，年齡5個月～7歲，平均（2.79±1.09）歲；重型60例，其中男32例，女28例，年齡6個月～8歲，平均（2.83±1.05）歲；危重型52例，其中男18例，女34例，年齡5個月～7歲，平均（2.80±1.11）歲；所有患者均未合并其他慢性疾病史，輕癥型組均治愈好轉，重型組病例中死亡3例，危重型組死亡6例。同時抽選同期131例健康體檢兒為對照組，其中男75例，女60例，年齡4個月～7歲，平均（2.88±1.06）歲；各組間性別、年齡比較差異無統計學意義（P>0.05）。
1.2 重型及危重型HFMD患兒臨床特性
重癥均有如單純腦炎、腦炎合并肺炎及其他上呼吸道感染等并發癥。重型組指有發熱、皮疹以及神經系統受累癥狀，表現為嗜睡、肢顫、陣發性抽搞、易驚嚇等。危重型組臨床表現為持續性高熱（基礎體溫≥39.0℃），持續時間大約為2～7 d；病情危重，頻繁抽搐以及有嚴重意識障礙，亦有循環、呼吸系統受累癥狀。
1.3 檢測方法
各組患兒入院后2 h內（未進行治療前）抽取靜脈血送檢。采用免疫比濁法、HITACHI7600全自動特定蛋白分析儀檢測IgM、IgG、IgA等體液免疫功能，試劑從ORION DIAGNOSTICA公司（芬蘭）選購，采用BD FACSCalihur型號的流式細胞儀（FCM）檢測CD3+、CD4+、CD8+等細胞免疫功能指標，取肝素抗凝新鮮全血1 mL， 然后再50 μL的樣品試管中分別加入10 μL劑量的相應單克隆抗體，充分混勻后室溫避光放置15 min，采用PACS做溶血，FCM分>10 000個細胞，儀器和試劑購自BD Biosciences公司（美國）。
1.4 觀察指標
包括各組患兒臨床一般情況、表現、病情變化、體液免疫（IgM、IgG、IgA）及細胞免疫（CD3+、CD4+、CD8+）結果，判斷疾病預后。
1.5 統計方法
采用SPSS17.0軟件對數據進行統計分析，計量資料以（x±s）表示，兩組間采用t值檢驗，3組均數采用F值檢驗。
2 結果
2.1 HFMD患兒與健康對照組各免疫指標比較
HFMD患兒細胞免疫（CD3+、CD4+、CD8+等T細胞亞群）水平均顯著低于健康對照組（P
2.2 HFMD患兒不同病情程度各免疫指標比較
隨著病情嚴重程度的加重，輕癥型、重型、危重型患兒的CD3+、CD4+、CD8+水平不斷降低，IgM、IgG、IgA水平升高，3組比較差異有統計學意義（P
3 討論
手足口病（HFMD）是因感染腸道2病毒而導致的一種傳染性疾病，可引發HFMD的腸道病毒多達20多種類型，其中以CoxA16及EV71最為常見。多數患兒感染HFMD后預后良好，有少部分重癥患兒可并發腦膜炎、心肌炎以及肺水腫等并發癥，個別重癥患兒由于病情發展快速，搶救無效而發生死亡。有學者[5]認為HFMD的病情轉歸與人體免疫功能可能存在重要相關性。
目前，臨床通常采用T細胞亞群測定來準確判斷病人機體細胞免疫功能。越來越多的研究[6-7]表明，T細胞在人體腸道病毒感染后起著重要的免疫介導作用，可釋放出多種細胞因子，在機體抗感染、抗病毒感染免疫應答機制中發揮重要作用。CD4+、CD8+能夠調節T細胞的免疫功能，其中CD4+對B淋巴細胞分化功能具有調節作用，刺激產生抗體；而CD8+對抗體合成以及分泌具有抑制作用，同時可抑制T細胞增殖，兩者的協調作用使機體免疫應答維持正常。T細胞亞群中的CD3+表達水平代表外周血成熟T細胞總數，CD3+可通過向T細胞內傳導TCR雙識別信號而促進T細胞活化，分布于所有活化T細胞表面。CD4+又稱為Th細胞，是一種輔助誘導性T細胞亞群，CD4+上的TCR能夠識別出抗原肽-II類分子復合物，從而參與Th2細胞激活。CD8+是一種抑制性（Ts）以及細胞毒性（Tc）細胞亞群，可識別并結合抗原肽-II類分子，激活細胞毒性T細胞。CD4+與CD8+的比值能夠反映出Th與Tc功能間的動態平衡狀態，是機體免疫內環境穩定的一項最重要的監測指標，其比值下降，則表示機體免疫力下降[8]。該研究HFMD患兒細胞免疫（CD3+、CD4+、CD8+等T細胞亞群）水平均顯著低于健康對照組（P
免疫球蛋白可使體液免疫增強，IgA、IgG能夠增強巨噬及NK細胞的免疫吞噬功能，IgA通過經典途徑還能對補體系統產生激活作用，使得機體免疫應答反應明顯增強。有研究顯示，HFMD患兒體液免疫亢進，并且同病情程度存在相關相關性，重癥患兒體液免疫亢進表現更為明顯，可能與HFMD患兒機體防御有關。本研究中，HFMD患兒體液免疫（IgM、IgG、IgA）水平明顯高于健康對照組（P
綜上所述，HFMD患兒尤其是有腦炎合并癥的重癥患兒會出現顯著的細胞及體液免疫功能低下及調節紊亂，與疾病嚴重程度存在相關性。
[參考文獻]
[1] 周杰林.不同病程的手足口病患兒體液免疫狀況分析[J].現代實用醫學，2012，24（8）：883-885.
[2] 熊金鳳，王云芬，楊興林，等.手足口病患兒免疫球蛋自檢測結果分析[J].檢驗醫學與臨床，2012，9（7）：837-838.
[3] 亞敏，王春妍，宋立文，等.手足口病患兒體液免疫檢測分析[J].臨床和實驗醫學雜志，2009，8（8）：73-74.
[4] 胡淑琴，李娜，王緒韶，等.手足口病患兒免疫球蛋自及補體檢測的臨床意義[J].中國中西醫結合兒科雜志，2012，4（5）：433-434.
[5] 李振華，周濤.手足口病患兒體液免疫功能與病情轉歸的關系[J].中國中西醫結合兒科學，2010，2（6）：510-511.
[6] 田健美，李健琴，孔小行，等. 144例手足口病患兒細胞和體液免疫變化及意義[J].床兒科雜志，2011，29（12）：1156-1158.
[7] 劉國軍，彭倩，鄭雪芳，等. 手足口病患兒細胞免疫水平臨床分析[J]. 中國熱帶醫學， 2013，13（11）： 1413-1414.
