化學(xué)藥品注射劑密封性驗(yàn)證研究

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摘要:結(jié)合藥品生產(chǎn)企業(yè)化學(xué)藥品注射劑密封性驗(yàn)證實(shí)例，通過(guò)模擬樣品制備、微生物侵入試驗(yàn)的總體效果進(jìn)行分析和總結(jié)，筆者認(rèn)為該密封性驗(yàn)證基本上能夠確保該生產(chǎn)線上焊蓋工序各項(xiàng)參數(shù)能夠有效保障產(chǎn)品的焊接密封性能，但應(yīng)更加重視按照新的注射劑仿制藥一致性評(píng)價(jià)技術(shù)要求進(jìn)行密封性驗(yàn)證研究，包括確定性的檢測(cè)方法選擇、最大允許泄露孔徑的合理性的選擇、檢測(cè)方法靈敏度測(cè)試、藥品全生命周期內(nèi)的密封性考察等。

關(guān)鍵詞:藥品;注射劑;密封性;泄露;靈敏度

注射劑在注射給藥后直接進(jìn)入人體組織、甚至直接進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，所以對(duì)于注射劑的安全性要求更加嚴(yán)格，并且注射劑在開(kāi)啟使用之前必須保證其無(wú)菌特性，以確保在注射劑的藥品生產(chǎn)、運(yùn)輸、儲(chǔ)存和臨床配制應(yīng)用，包括產(chǎn)品有效期內(nèi)的全生命周期，以確保病人用藥安全［1］，要做到這一點(diǎn)，必須有容器完整性的驗(yàn)證和監(jiān)測(cè)，才能確保不會(huì)受到微生物的污染。本文就某一企業(yè)化學(xué)藥品注射劑密封性驗(yàn)證實(shí)例進(jìn)行探討分析，并結(jié)合作者自己的幾點(diǎn)思考，與業(yè)內(nèi)各位專家同仁、以及企業(yè)各位同行老師進(jìn)行分享。現(xiàn)將企業(yè)對(duì)于其化學(xué)藥品注射劑密封性驗(yàn)證的具體情況報(bào)道如下。

1基本情況簡(jiǎn)介

本次驗(yàn)證前該車(chē)間的工藝用水系統(tǒng)、HVAC系統(tǒng)和壓縮空氣系統(tǒng)均通過(guò)相關(guān)驗(yàn)證并處在受控狀態(tài);包括制袋灌裝機(jī)、水浴滅菌柜在內(nèi)的所有生產(chǎn)設(shè)備均已完成相關(guān)驗(yàn)證;本驗(yàn)證前有關(guān)計(jì)量?jī)x器、儀表均經(jīng)校驗(yàn)合格;所需的原輔料已檢驗(yàn)合格，所需生產(chǎn)設(shè)備、工器具均已清潔，所有的操作人員均已進(jìn)行各項(xiàng)培訓(xùn)，滿足GMP標(biāo)準(zhǔn)。本次容器密封系統(tǒng)的完整性試驗(yàn)采用三層共擠輸液用袋包裝材料，利用生產(chǎn)線上的制袋灌裝機(jī)制備三層共擠輸液袋，同步灌裝相應(yīng)裝量的胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基溶液，焊接組合蓋封口、經(jīng)水浴滅菌柜高溫高壓滅菌后，最后進(jìn)行微生物侵入試驗(yàn)，試驗(yàn)分為4組，A1和A2組為正常的微生物侵入試驗(yàn)組，B1和B2組為微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)組，以驗(yàn)證包裝材料的無(wú)菌可靠性是否能夠滿足無(wú)菌保障要求，并對(duì)所有的試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總分析，以此驗(yàn)證該車(chē)間制袋、焊蓋工序?qū)ψ⑸鋭┟芊庑缘谋Ｕ夏芰Γ_保產(chǎn)品無(wú)菌性能。

2培養(yǎng)基靈敏度試驗(yàn)

為確定胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)能夠支持較寬的微生物菌譜范圍，能促進(jìn)革蘭氏陽(yáng)性、革蘭氏陰性，酵母菌和霉菌的生長(zhǎng)，對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行靈敏度試驗(yàn)。

2．1培養(yǎng)基的配制

準(zhǔn)確稱量胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)適量(參照計(jì)算比例為3．0g)，用適量注射用水溶解并定容至擬定的體積(參照計(jì)算比例為加注射用水至100mL)，搖勻配制成3%的胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基溶液備用。121℃，15分鐘進(jìn)行滅菌，PH值控制在(7．3±0．2)分裝至11支25mL的試管中，每支10mL，加塞將試管口密封。

2．2培養(yǎng)基微生物生長(zhǎng)試驗(yàn)

將培養(yǎng)基分為二組并將每組試管編號(hào)(第一組6支，第二組4支，空白對(duì)照1支，每支數(shù)量10mL，且不得超過(guò)試管高度的2/5)，第一組接種100CFU/支的細(xì)菌類;第二組接種100CFU/支的霉菌類;金黃色葡萄球菌、白色念珠菌等細(xì)菌和黑曲霉菌，每個(gè)菌種兩支，加塞蓋好后在23～28℃培養(yǎng)72小時(shí);空白對(duì)照1支。

2．3靈敏度試驗(yàn)結(jié)果

培養(yǎng)基微生物生長(zhǎng)試驗(yàn)培養(yǎng)記錄見(jiàn)圖1。圖1培養(yǎng)基微生物生長(zhǎng)試驗(yàn)培養(yǎng)記錄截圖根據(jù)以上結(jié)果，接種試管中每組全部出現(xiàn)微生物生長(zhǎng)現(xiàn)象，空白對(duì)照管無(wú)菌生長(zhǎng)，判定該培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)試驗(yàn)合格，滿足培養(yǎng)基靈敏度要求。

3試驗(yàn)樣品制備

準(zhǔn)備驗(yàn)證需要用到的物料及器具，具體為培養(yǎng)基:胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基干粉1250g;250mL三層共擠膜輸液用袋:400個(gè)左右;塑料輸液容器用聚丙烯接口:400個(gè)左右;塑料輸液容器用聚丙烯組合蓋:800個(gè)左右，備用。稱取胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基1250g配制成3%溶液41666mL，除菌過(guò)濾至潔凈容器中，在車(chē)間正常的生產(chǎn)環(huán)境下，模擬車(chē)間正常生產(chǎn)的各項(xiàng)工藝參數(shù)，將胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基罐裝入已制好的三層共擠輸液用袋中，灌裝體積為100mL，使用制袋罐裝焊蓋生產(chǎn)線上的自動(dòng)焊蓋將之密封，每臺(tái)灌裝機(jī)至少焊接200個(gè)樣品;并將每臺(tái)灌裝機(jī)制作好的樣品做標(biāo)記，在115℃、30min條件下滅菌。

4微生物侵入試驗(yàn)

4．1試驗(yàn)預(yù)培養(yǎng)操作步驟

在兩臺(tái)灌裝機(jī)生產(chǎn)的所有樣品中取樣，取樣數(shù)量必須大于50個(gè)，分別掰去雙閥，并在試驗(yàn)操作時(shí)確保不能破壞密封口，如有不慎損壞容器密封性的應(yīng)剔除，確保去除雙閥后密封口完好的樣品不能少于50個(gè)。將正常試樣和去除雙閥的試樣倒置侵入配制好的菌溶液中，使培養(yǎng)基與容器表面充分接觸，并保持豎放狀態(tài)，在30～35℃環(huán)境條件下培養(yǎng)14天。培養(yǎng)過(guò)程中密切觀察所有試樣均不應(yīng)長(zhǎng)菌，第14天時(shí)隨機(jī)取40支雙閥完好的試樣(兩臺(tái)灌裝機(jī)灌裝的樣品各20袋)，在每個(gè)試樣內(nèi)均接種銅綠假單胞菌(CMCC(B)10104)菌液，接種體積為0．1mL，菌液濃度應(yīng)滿足每0．1mL含菌量為10～100CFU的濃度要求，置30～35℃溫度條件下再培養(yǎng)7天。再次培養(yǎng)至第7天時(shí)，鑒定并確認(rèn)試樣容器內(nèi)生長(zhǎng)的菌是否為接入的銅綠假單胞菌，鑒定試驗(yàn)依據(jù)為銅綠假單胞菌經(jīng)革蘭氏染色后肉湯在紫外燈下應(yīng)顯藍(lán)綠色熒光，鑒定結(jié)果均符合預(yù)期要求，并在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)特性符合銅綠假單胞菌的特有結(jié)構(gòu)特征，證明容器內(nèi)生長(zhǎng)的菌即為人工接入的銅綠假單胞菌，且生長(zhǎng)良好。試樣預(yù)培養(yǎng)和營(yíng)養(yǎng)試驗(yàn)觀察記錄見(jiàn)圖2。根據(jù)以上結(jié)果，所有接種的銅綠試樣，容器內(nèi)生長(zhǎng)的菌均為銅綠假單胞菌，且微生物都生長(zhǎng)良好，則培養(yǎng)基的促進(jìn)生長(zhǎng)能力判斷合格，預(yù)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)滿足預(yù)期要求。

4．2微生物侵入試驗(yàn)操作步驟(應(yīng)進(jìn)行三次，驗(yàn)證重現(xiàn)性)

每臺(tái)灌裝機(jī)生產(chǎn)的樣品各取50個(gè)試樣(將每臺(tái)灌裝機(jī)生產(chǎn)的樣品分別分組，1號(hào)灌裝機(jī)生產(chǎn)的為A1組，2號(hào)灌裝機(jī)生產(chǎn)的為A2組)，同時(shí)在每臺(tái)灌裝機(jī)生產(chǎn)的樣品中另外各取25個(gè)試樣，并掰去除雙閥(1號(hào)灌裝機(jī)生產(chǎn)的為B1組，2號(hào)灌裝機(jī)生產(chǎn)的為B2組)，將新鮮的銅綠假單胞菌(CMCC(B)10104)的菌懸液倒入合適的容器中，將A1、A2和B1、B2試樣的外表面完全泡在菌懸液中，并確保試樣容器內(nèi)的無(wú)菌培養(yǎng)基充分接觸容器的封口內(nèi)表面，保持上述狀態(tài)，并將上述4組試樣在菌懸液中持續(xù)浸泡約4小時(shí)。浸泡操作的設(shè)施和方法見(jiàn)圖3。圖3浸泡設(shè)施和方法示意圖浸泡4小時(shí)后，從菌懸液中取出試樣，擦干試樣容器外殘余的菌懸液，然后用75%酒精溶液消毒容器外表面，操作中應(yīng)注意不要損壞B1、B2組無(wú)雙閥試樣膠塞的密封性，置30～35℃培養(yǎng)7天，觀察檢查試樣容器內(nèi)培養(yǎng)基中微生物的生長(zhǎng)情況。A1、B1組記錄為1－A1～1－A50、1－B1～1－B25，A2、B2組記錄為2－A1～2－A50、2－B1～2－B25，所有樣品均應(yīng)無(wú)微生物生長(zhǎng)，記錄觀察結(jié)果。同法進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn):在準(zhǔn)備A1、A2組和B1、B2組試樣的同時(shí)每組多準(zhǔn)備2個(gè)，不經(jīng)菌懸液浸泡，將其接種10～100CFU銅綠假單胞菌(CMCC(B)10104)，在30～35℃下培養(yǎng)7天，或者培養(yǎng)到所有試樣都呈陽(yáng)性結(jié)果，培養(yǎng)后進(jìn)行的A1、A2組和B1、B2組的營(yíng)養(yǎng)性試驗(yàn)及鑒別，所有微生物都生長(zhǎng)良好，且均為銅綠假單胞菌，A1、B1組記錄為1－A1～1－A15，A2、B2組記錄為2－A1～2－A15。微生物侵入試驗(yàn)和陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)觀察記錄見(jiàn)圖4。

5結(jié)論

經(jīng)驗(yàn)證，所有樣品經(jīng)微生物侵入試驗(yàn)后，均無(wú)任何微生物生長(zhǎng)，表明容器密封性良好，能夠有效阻隔銅綠假單胞菌侵入容器內(nèi)，可有效保證產(chǎn)品無(wú)菌性能。并且，該培養(yǎng)基和菌液均經(jīng)各陽(yáng)性對(duì)照組驗(yàn)證，陽(yáng)性組內(nèi)各培養(yǎng)基微生物生長(zhǎng)良好，且均為銅綠假單胞菌，進(jìn)一步表明驗(yàn)證結(jié)果有效。

6討論

藥品包裝系統(tǒng)的密封完整性是指其能夠防止所承裝的藥品的損失，并能夠阻止微生物、有害氣體，或任何其他物質(zhì)的侵入污染，從而確保藥品持續(xù)保持安全和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求的能力，是藥品包裝系統(tǒng)保護(hù)性能的重要體現(xiàn)，也是能夠確保藥品在整個(gè)生命周期內(nèi)持續(xù)滿足質(zhì)量要求和安全性能的重要因素，一旦藥品一旦額的包裝系統(tǒng)密封完整性出現(xiàn)缺陷，極有可能會(huì)導(dǎo)致藥品出現(xiàn)質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)，并給患者生命和健康造成損害［2］。結(jié)合企業(yè)滅菌驗(yàn)證實(shí)例，根據(jù)國(guó)家局藥品審評(píng)中心在2020年相繼出臺(tái)的《化學(xué)藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)技術(shù)要求》和《化學(xué)藥品注射劑包裝系統(tǒng)密封性研究技術(shù)指南(試行)》，個(gè)人總結(jié)思考如下幾點(diǎn)與業(yè)內(nèi)各位同仁、企業(yè)各位同行分享:(1)密封性檢測(cè)方法應(yīng)首選確定性的檢測(cè)方法(如真空衰減法、高壓放電檢測(cè)法等)，結(jié)合微生物侵入法一并開(kāi)展驗(yàn)證研究。(2)最大允許泄露孔徑應(yīng)根據(jù)藥品特性來(lái)區(qū)別對(duì)待，如為一般化學(xué)藥品，其密封性滿足阻止微生物侵入即可，但對(duì)于某些對(duì)于氣體敏感的藥物，密封性即使?jié)M足無(wú)菌要求，但也可能會(huì)發(fā)生氣體交換，導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量和穩(wěn)定性出現(xiàn)問(wèn)題。(3)檢測(cè)方法靈敏度測(cè)試應(yīng)更加關(guān)注泄露孔徑方面的研究，尤其是要采用最大允許孔徑漏孔的陽(yáng)性樣品進(jìn)行對(duì)照研究，且其孔徑應(yīng)出具檢定報(bào)告，確保孔徑的準(zhǔn)確性，確保驗(yàn)證結(jié)果的有效性。(4)車(chē)間生產(chǎn)工序是保證產(chǎn)品無(wú)菌的基本要素，但僅能代表產(chǎn)品剛生產(chǎn)完的情況，密封性驗(yàn)證更要考察產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中、長(zhǎng)期穩(wěn)定性等全生命周期內(nèi)的研究考察，以確保產(chǎn)品質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

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［2］陸維怡．國(guó)內(nèi)外藥品包裝系統(tǒng)密封完整性研究與保障藥品質(zhì)量安全的思考［J］．中國(guó)藥事，2021，35(7):828－834．

作者：齊鶴 單位：黑龍江省藥品審核查驗(yàn)中心