中藥制首烏質量評價論文

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1儀器與試藥

1．1儀器

Waters515高效液相儀，Waters2487雙波長檢測器，WatersN3000色譜工作站，色譜柱ThermoHypersilC18（250×4．6mm，5μm）；BP211DSartoriu電子分析天平；DXF－10A粉碎機（廣州市大祥電子機械設備有限公司）；GSY－Ⅱ恒溫水浴鍋（北京市醫(yī)療設備廠）。

1．2試藥

制首烏樣品分別購自于陜西渭南、廣西玉林、寧夏銀川、河南新鄉(xiāng)、貴州安順、安徽六安、云南大理、云南玉溪、云南曲靖，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室主任黃海波老師鑒定均為蓼科植物何首烏的炮制加工品。對照品2，3，5，4’－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷（批號：82373－94－2）購自成都瑞芬思生物科技有限公司，大黃素（批號：110756－200110）、大黃素甲醚（批號：110758－201114）均購于中國藥品生物制品檢定所。甲醇、乙腈為色譜純（美國Fisher公司）；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2．1性狀質量比較

2010版《中國藥典》對制首烏的性狀質量要求為：呈不規(guī)則皺縮狀的塊片，厚約1cm；表面黑褐色或棕褐色，凹凸不平；質堅硬，斷面角質樣，棕褐色或黑色；氣微，味微甘而苦澀。收集到來自全國各地的制首烏九批，其外觀特征，見圖1；從內外部顏色、粉末顏色以及氣味上對各制首烏分別進行比較，并根據(jù)各制品的粉末顏色深淺程度進行分級（表1）。從圖1和表1可以看出，市售制首烏飲片的外觀顏色與其粉末顏色均存在一定的差異。根據(jù)各市售的粉末顏色深淺程度進行分級的結果可知，安徽六安的樣品粉末顏色為棕黑色，顏色等級最高“＋＋＋＋”；其次為顏色等級“＋＋＋”的粉末，包括陜西渭南深棕褐色、貴州安順褐色、云南大理棕色、云南曲靖棕褐色；廣西玉林、云南玉溪及寧夏銀川的粉末顏色分別為淡棕褐色、淡棕色與棕綠色，顏色等級“＋＋”；粉末顏色最淺的為河南新鄉(xiāng)，棕紅色，顏色等級“＋”。造成市售制首烏飲片粉末顏色的差異可能主要受炮制程度因素影響的原因。

2．2有效成分含量比較

2．2．1二苯乙烯苷含量測定2．2．1．1色譜條件色譜柱ThermoHypersilC18（250×4．6mm，5μm）；流動相：乙腈－水（25：75）；流速：1．0mL／min；檢測波長：320nm；柱溫：25℃。圖1各市售制首烏性狀質量圖2．2．1．2線性關系考察精密稱取二苯乙烯苷對照品，于棕色量瓶中用稀乙醇配制成每1mL含215μg的對照品溶液。分別吸取1、5、10、15、20μL注入液相色譜儀，以測得的峰面積積分值為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪制標準曲線（表2）。表明二苯乙烯苷在0．215～4．30μg之間具有良好的線性關系。2．2．1．3供試品溶液的制備按藥典法進行［1］。取各制首烏粉末（過四號篩）約0．2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25mL，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，靜置，上清液濾過，取續(xù)濾液，即得供試液。2．2．1．4精密度試驗精密吸取同一樣品溶液重復進樣6次，二苯乙烯苷峰面積積分值的RSD為1．53％。2．2．1．5重現(xiàn)性試驗精密稱取同一樣品6份，按供試品溶液制備方法處理，進行含量測定，二苯乙烯苷含量的RSD為2．41％。2．2．1．7二苯乙烯苷含量測定取適量供試品溶液，用0．45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液10μL進樣，測定峰面積，計算樣品中二苯乙烯苷含量。9個市售制首烏樣品二苯乙烯苷含量測定結果（表3）。根據(jù)表3的結果，市售制首烏中二苯乙烯苷與蒽醌類成分含量存在著明顯差異。9個市售制首烏中二苯乙烯苷的含量大部分符合現(xiàn)版《藥典》對其含量限度的規(guī)定（制首烏不得少于0．70％），其中含量最高的為云南大理3．31％；而只有河南新鄉(xiāng)的含量為0．24％，低于藥典規(guī)定。2．2．2游離蒽醌含量測定2．2．2．1色譜條件色譜柱ThermoHypersilC18（250×4．6mm，5μm）；流動相：甲醇－0．1％磷酸溶液（85：15）；流速：1．0mL／min；檢測波長：254nm；柱溫：25℃。2．2．2．2線性關系考察精密稱取大黃素對照品、大黃素甲醚對照品，精密稱定，加甲醇分別制成每1mL含大黃素48．0μg、大黃素甲醚21．2μg的溶液。分別吸取1、5、10、15、20μL注入液相色譜儀，以測得的峰面積積分值為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪制標準曲線（表2）。表明大黃素在48．0～960ng之間具有良好的線性關系，大黃素甲醚在21．2～424ng之間具有良好的線性關系。2．2．2．3供試品溶液的制備按藥典法進行［1］。供試品溶液的制備，取本品粉末（過四號篩）約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，加熱回流1小時，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試液。2．2．2．4精密度試驗精密吸取同一樣品溶液重復進樣6次，大黃素、大黃素甲醚峰面積積分值的RSD分別為1．67％、2．03％。2．2．2．5重現(xiàn)性試驗精密稱取同一樣品6份，按供試品溶液制備方法處理，進行含量測定，大黃素、大黃素甲醚含量的RSD分別為2．18％、2．43％。2．2．2．6回收率試驗精密稱取同一樣品6份，分別精密分別加入大黃素、大黃素甲醚對照品，按供試品溶液處理，進行含量測定，計算回收率分別為98．92％、101．24％，RSD分別為1．79％、2．21％。2．2．2．7游離蒽醌含量測定取適量供試品溶液，用0．45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液10μL進樣，測定峰面積，分別計算樣品中大黃素、大黃素甲醚含量。9個市售制首烏樣品大黃素、大黃素甲醚含量測定結果（表3）。符合現(xiàn)版《藥典》對游離蒽醌含量限度的規(guī)定（游離蒽醌類成分不得少于0．10％）的樣品，包括陜西渭南0．16％、安徽六安0．15％、云南大理0．48％等3個市售，其他的6個市售制首烏的含量均低于藥典規(guī)定的樣品。造成市售制首烏中成分含量的差異可能是受產(chǎn)地、生長年限、采收季節(jié)、炮制程度等因素影響的原因［5］。

3討論

炮制對何首烏的影響現(xiàn)代文獻表明，生首烏經(jīng)炮制以后，其外表的顏色隨炮制時間的延長而加深［6］。對化學成分而言，二苯乙烯苷的含量隨著炮制時間的延長而減少［7］；大黃素、大黃素甲醚等游離蒽醌類成分的含量隨著炮制時間的延長而增多，但炮制一定時間后，隨著炮制時間的增加，其含量反而降低［8～10］。從結果可知，制首烏市售商品質量參差不齊，提示藥品監(jiān)管部門需加強對市場商品制首烏的質量監(jiān)管，為臨床用藥安全、有效提供可靠的保障。結合表1與表3可知，河南新鄉(xiāng)粉末顏色為棕紅色，與藥典規(guī)定的性狀質量要求不符；且其二苯乙烯苷的含量也偏低，分析原因可能是其原藥材質量較差。粉末顏色為等級“＋＋＋＋”的安徽六安，以及顏色等級“＋＋＋”的云南大理、陜西渭南、貴州安順、云南曲靖，符合藥典規(guī)定的性狀質量要求，但貴州安順與云南曲靖的樣品中蒽醌成分含量低于0．10％，分析原因可能也是這2個市售的原藥材質量較差；顏色較深的安徽六安，其二苯乙烯苷含量遠高于陜西渭南，但蒽醌成分類含量低于陜西渭南，分析原因可能是安徽六安的樣品炮制時間過長，從而導致其蒽醌成分類含量降低了。粉末顏色為等級“＋＋”的樣品，二苯乙烯苷含量均遠高于0．7％，但蒽醌成分類含量均低于藥典的規(guī)定，分析原因可能是炮制時間不夠所致。河南新鄉(xiāng)粉末顏色等級為“＋”，與藥典規(guī)定的性狀質量要求不符；且其二苯乙烯苷與蒽醌成分類含量也均低于藥典的規(guī)定，可能是其原藥材質量較差。同時也提示，在炮制原理研究的基礎上，應制定統(tǒng)一規(guī)范的炮制技術參數(shù)和飲片質量評價標準。以上說明制首烏的有效成分含量與其性狀有一定的相關性，提示可以通過制首烏的粉末顏色判斷其炮制程度深淺，從而初步辨別其質量好壞。但有效成分含量高低還受產(chǎn)地、生長年限、采收季節(jié)等因素的影響，僅靠肉眼無法辨別，因此，在對飲片進行質量考察的時候，僅僅從外觀性狀來看是不全面的，而且要結合成分檢測。

作者:莫志敏黃海波陳明權單位:海口市中醫(yī)醫(yī)院