細胞形態學在急性白血病的診斷符合率

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【摘要】目的探究細胞形態學對急性白血病診斷符合率的影響。方法選取2017年2月至2020年2月我院急性白血病患者132例，分析細胞形態學分型、免疫學分型、細胞遺傳學分型、分子生物學分型及聯合分型診斷符合率。結果細胞形態學分型：M13例，M225例，M328例，M46例，M516例，急性髓細胞白血病（AML）未分型12例，急性淋巴細胞白血病（ALL）36例，急性白血病（AL）6例，診斷符合率分別為80.3%（106/132）；免疫學分型：M01例，M13例，M233例，M328例，M44例，M55例，AML未分型14例，ALL37例，AL6例，急性混合細胞白血病（MAL）1例，診斷符合率82.6%（109/132）；細胞遺傳學分型：M327例，M42例，AML未分型4例，AL7例，其他異常染色體核型17例，正常核型75例（56.8%），診斷符合率24.2%（32/132）；分子生物學分型：M328例，M43例，AML未分型5例，AL9例，其他相關融合基因10例，融合基因陰性77例，診斷符合率25.8%（34/132）；MICM（形態學、免疫學、細胞遺傳學和分子學）綜合診斷符合率97.7%（129/132），高于各分型單純診斷（P＜0.05）；形態學分型診斷符合率高于細胞遺傳學分型、分子生物學分型（P＜0.05）；形態學、免疫學分型診斷符合率差異無統計學意義（P＞0.05）。結論細胞形態學是急性白血病診斷基礎，與免疫學分型診斷價值相當，應給予充分重視，而MICM綜合診斷可提高最終診斷率。

【關鍵詞】細胞形態學；細胞遺傳學；免疫學；分子生物學；診斷

急性白血病（acuteleukemia，AL）是最常見血液系統惡性疾病，發病迅速，且病程通常較短，平均生存期僅3個月左右[1，2]。AL準確分型對指導臨床治療和預后預測具有重大意義。隨流式細胞術發展及世界衛生組織（WHO）白血病分型的提出，免疫分型臨床應用日益廣泛[3]。現階段，細胞形態學（morphology）、免疫學（immunology）、細胞遺傳學（cytogenetics）和分子生物學（molecularbiology）分型即MICM分型已得到臨床高度認可，但很多基層醫院及部分三級醫院受儀器、試劑等的限制而應用受阻，尤其分子生物學、細胞遺傳學分型[4，5]。基于形態學的法、美、英分型系統（French-American-Britishclassificationsystems，FAB分型法）是傳統分型方法，操作簡便，在急性白血病的診斷中仍具有較高診斷價值及不可替代作用[6]。近年來，關于形態學、免疫學分型的對比研究主要探討免疫學的診斷價值，對形態學診斷價值的研究較少。基于此，本研究選取我院AL患者132例，探究細胞形態學對AL診斷符合率的影響，現報告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料：選取2017年2月至2020年2月我院AL患者132例，均符合白血病診斷標準[7]，其中急性髓細胞白血病（AML）：M01例（0.8%），M14例（3.0%），M241例（31.1%），M328例（21.2%），M46例（4.6%），M511例（8.3%），未分型3例（2.3%），急性淋巴細胞白血病（ALL）37例（28.0%），急性混合細胞白血病（MAL）1例（0.8%）。男性73例，女性59例，年齡18～78歲，平均（47±10）歲。1.2方法：儀器與試劑：珠海貝索生物技術有限公司瑞氏-姬姆薩染色液試劑盒；廣東西隴化工股份有限公司醋酸萘酚酯酶（NAE）、過碘酸-雪夫反應（PAS）、過氧化物酶（POX）染色試劑；美國BectonDickinson公司FACSCantoⅡ型流式細胞儀、溶血素、破膜劑及單克隆抗體；天津瑞愛金生物科技有限公司秋水仙胺、細胞染色體培養液；美國Life公司ABI7500型聚合酶鏈反應（PCR）儀；法國Lourmat公司Vilber凝膠分析系統；金砂廣播儀器廠DY-600型中壓電泳儀；上海博迅實業有限公司醫療設備廠SSW-420-2S型電熱恒溫水浴箱；華美生物工程公司淋巴細胞分離液；上海源奇生物醫藥科技有限公司白血病相關融合基因檢測試劑盒。①細胞形態學：取骨髓涂片進行瑞氏-姬姆薩染色（骨髓小粒多、涂片好），油鏡下分類計數200個有核細胞并行細胞化學染色，包括PAS、POX、NAE+氟化鈉抑制（NaF），計數陽性率并觀察酶型，按FAB標準分型。②免疫學分型：取肝素抗凝骨髓液1～2mL，用流式細胞儀測定，分出幼稚與成熟細胞群（CD45/SSC設門），進行免疫表型及抗原表達分析，陽性：膜抗原＞20%，CD34和胞質內抗原＞10%，類型判斷依據歐洲白血病免疫學分類協作組（EGIL）積分標準。③染色體核型：取肝素抗凝骨髓液2～5mL，接種于細胞染色體培養液（2×106/mL細胞），終止培養前1h加入秋水仙胺（0.05μL/mL），離心收獲細胞，固定液固定，滴片，行核型分析（R顯帶法）。④分子生物學：取2～3mL抗凝骨髓液，0.9%氯化鈉注射液稀釋（等體積），分離單個核細胞并裂解，提取總RNA，逆轉錄得到cDNA，行多重巢式PCR反應，反應產物電泳（1.5%瓊脂糖凝膠），觀察分析結果。1.3觀察指標：①細胞形態學分型；②免疫學分型；③細胞遺傳學分型；④分子生物學分型；⑤4種分型與聯合分型診斷符合率。1.4統計學處理：運用SPSS21.0分析，計數資料以例數和百分比（%）表示，行χ2檢驗，以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1細胞形態學分型：132例AL中，M13例（2.3%），M225例（18.9%），M328例（21.2%），M46例（4.6%），M516例（12.1%），AML未分型12例（9.1%），ALL36例（27.3%），AL6例（4.6%）。2.2免疫學分型：132例AL經流式細胞儀診斷為M01例（0.8%），M13例（2.3%），M233例（25.0%），M328例（21.2%），M44例（3.0%），M55例（3.8%），AML未分型14例（10.6%），ALL37例（28.0%），AL6例（4.6%），MAL1例（0.8%）。2.3細胞遺傳學分型：M327例（20.4%），t（15；17）（q22；q21）；M42例（1.5%），inv（16）（q13；q22）；AML未分型4例（3.0%），t（8；21）（q22；q22）；AL7例（5.3%），t（9；22）（q34；q11）；其他異常染色體核型17例（12.9%）；正常核型75例（56.8%）。2.4分子生物學分型：M328例（21.2%），PMLRARa融合基因；M43例（2.3%），AML未分型5例（3.8%），AL9例（6.8%），其他相關融合基因10例（7.6%），融合基因陰性77例（58.3%）。2.54種分型與聯合分型診斷符合率：形態學分型80.3%（106/132）、免疫學分型82.6%（109/132）、細胞遺傳學分型24.2%（32/132）、分子生物學分型25.8%（34/132）、聯合分型診斷符合率97.7%（129/132）。聯合分型與形態學、免疫學、細胞遺傳學、分子生物學分分型診斷符合率差異有統計學意義（χ2=267.799，P＜0.01）；形態學分型診斷符合率高于細胞遺傳學分型、分子生物學分型（χ21=83.142，P1＜0.01；χ2=78.835，P2＜0.01）；形態學、免疫學分型診斷符合率差異無統計學意義（χ2=0.226，P=0.635），見表1。

3討論

目前，形態學分型仍是白血病診斷基礎，其結合細胞形態學和化學染色特征進行白血病亞型診斷[8，9]。盧興國[10]指出，基于外周血細胞形態學檢驗是所有白血病的診斷起點，所得信息具有重要臨床價值。本研究顯示，M3、M4EO等AL類型有典型形態學特征，可依靠形態學明確診斷，也可依靠分子生物學或細胞遺傳學直接診斷，但后者受試劑、儀器等的限制而應用受阻，且檢測時間較長。細胞形態學具有免疫分型等不可替代的優勢，包括以下幾個方面：①外周血檢驗可立即發現血細胞計數低的白血病，如AML-M3，且具有典型形態學特征，明確診斷，為患者救治爭取時間；②操作簡便、快捷、分析直觀、分型標準明確；③流式細胞術對原始細胞的計數受操作、稀釋等因素影響，故原始細胞百分比較免疫表型更為準確；④流式細胞術檢測免疫分型時，以形態學為依據選擇單克隆抗體；⑤骨髓細胞形態學可直觀明確淋巴瘤患者臨床分期，利于早期診斷；⑥流式細胞術對粒、單白血病分型存在一定困難，而細胞形態學觀察化學染色表現，尤其酯酶染色，具有診斷價值[11]。本研究數據顯示，形態學分型診斷符合率80.3%高于細胞遺傳學分型24.2%、分子生物學分型25.8%（P＜0.05），且接近免疫學分型診斷符合率82.6%（P＞0.05），提示細胞形態學與免疫學分型診斷價值相當，與既往文獻[12]研究一致。MICM綜合診斷符合率97.7%（129/132），高于各分型單純診斷（P＜0.05），提示MICM綜合診斷可提高最終診斷率，對AL臨床治療具有一定指導價值。綜上可知，細胞形態學是AL診斷基礎，與免疫學分型診斷價值相當，應給予充分重視，而MICM綜合診斷可提高最終診斷率。

參考文獻

[1]ShapiroRM，KimDDH.Next-generationsequencing-basedminimalresidualdiseasemonitoringinpatientsreceivingallo-geneichematopoieticstemcelltransplantationforacutemyeloidleukemiaormyelodysplasticsyndrome[J].CurrOpinHematol，2018，25（6）：425-432.

[2]張斌，蔡艷霞，張素貞，等.顆粒性急性B淋巴細胞白血病形態學及流式散點圖特點[J].檢驗醫學，2017，32（2）：118-121.

[3]趙莉，高吉照，李艷，等.50例兒童急性淋巴細胞白血病免疫分型、染色體核型及融合基因與預后分析[J].中國小兒血液與腫瘤雜志，2019，24（2）：95-99.

[4]秦亞溱.白血病診治中的分子學檢測及其臨床意義[J].中國生物工程雜志，2019，39（9）：98-102.

[5]劉倩，莫霖，黃先巧，等.某醫院810例兒童白血病流行病學特征分析[J].重慶醫科大學學報，2020，45（10）：1442-

作者：田霞