透析五味保肝丸定性定量實驗

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摘要：目的建立五味保肝丸定性定量質量標準。方法薄層色譜法定性鑒別五味子和丹參的存在，高效液相色譜法確定降酶丸中五味子甲素含量。結果定性鑒別五味子和丹參，方法簡便，圖譜清晰；高效液相色譜法測定含量，結果準確，陰性無干擾。結論該實驗方法可作為降酶丸的定性定量質量標準指標。

關鍵詞：五味保肝丸；薄層色譜；高效液相色譜；五味子甲素

五味保肝丸由五味子、丹參等中藥組成，是我院傳統中藥自制制劑(魯衛藥制字Z02080175)，具有斂陰、活血、降酶功效，用于乙型肝炎、轉氨酶升高等病癥，臨床應用近30年，療效確切。為控制該制劑質量，除常規檢測項目外，實驗研究五味子、丹參兩味藥的薄層色譜法鑒別方法，以及該制劑主要藥效成分五味子甲素含量范圍，為該制劑質量控制指標提供定性定量實驗依據。

1主要儀器、試劑與藥材

1.1主要儀器

Agilent1100型高效液相色譜儀(美國)，JA2003型電子分析天平(上海)，KQ100型超聲波清洗器(昆山)。

1.2主要試劑

五味子甲素對照品(中國藥品生物制品檢定所)，甲醇為色譜純(美國)，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

1.3主要藥材

五味保肝丸由本院制劑室提供，其他實驗用藥材取自本院中藥庫，經鑒定五味子為木蘭科植物五味子Schisandchinensis(Turcz.)Bail的干燥成熟果實，丹參為唇形科植物丹參SalviamiltiorrhizaBge.干燥根及根莖。陰性對照品實驗時現制。

2薄層色譜定性鑒別

2.1五味子定性鑒別

取五味保肝丸2g，研碎，加氯仿30ml，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加氯仿1ml使溶解，作為供試品溶液；另取缺五味子的處方比例量的其他藥材細粉2g，按上述方法，制成五味子陰性對照液。再取五味子甲素對照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；吸取上述三種溶液各10μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(30℃～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，五味子陰性對照液無此斑點。

2.2丹參定性鑒別

取五味保肝丸3g，研碎，加乙醚20ml，超聲處理10min，過濾，濾液揮干，殘渣加甲醇1ml溶解，作為供試品溶液；另取缺丹參的處方比例量的其他藥材細粉2g，按上述方法，制成丹參陰性對照液；再取丹參酮ⅡA對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述3種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯(19：1)為展開劑，展開、取出、晾干。日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，丹參陰性對照液無此斑點。

3五味子甲素含量測定

3.1色譜條件

色譜柱：AgilentODS柱(4.6mm×150mm，5μm)。柱溫：30℃，流動相：甲醇-水(80：20)，流速：1.5ml/min，檢測波長：250nm。理論板數按五味子甲素計應不低于3000，五味子甲素峰與相鄰峰分離度符合要求。

3.2對照品溶液制備

精密稱取減壓干燥至恒重的五味子甲素對照品6.32mg，加甲醇使溶解，并定容至25ml；制成濃度為0.2528mg/ml的對照品溶液。

3.3樣品液制備

取五味保肝丸適量，粉碎過四號篩，置硅膠于干燥器中干燥24h后備用。取樣品粉末約2g，精密稱定，置150ml具塞三角燒瓶中，準確加入氯仿50ml，稱重，超聲提取40min，水浴溫度45℃。提取液放至室溫，再稱定重量，用氯仿補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液10ml，置水浴上蒸干，殘渣加甲醇分次溶解定溶于10ml容量瓶中，得樣品液。

3.4陰性對照溶液制備

取不含五味子的處方比例量的其他藥材細粉，照“2.3”項方法制成陰性對照溶液。

3.5系統適應性試驗

按“2.1”項下條件，將對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液分別進樣10μl進行測定，結果對照品溶液和供試品溶液色譜圖在相應的保留時間處均有最大吸收峰，供試品溶液相鄰峰無干擾；陰性樣品色譜圖中，在與對照品色譜相應的保留時間處無色譜峰出現，表明該制劑中其他組分對五味子甲素的測定無干擾。

3.6線性關系考察

精密量取“2.2”步對照品溶液2ml，加甲醇定容10ml。分別準確吸取上述溶液2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0μl依次進樣，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，五味子甲素進樣量(μg)為橫坐標，繪制標準曲線?；貧w方程為:五味子甲素Y=2643.253X-3.756，r=0.9999(n=5)，線性范圍0.1264～1.5168μg。

3.7精密度試驗

精密吸取“2.2”步對照品溶液(濃度為0.2528mg/ml)2μl，按“2.1”色譜條件連續進樣5次，測定峰面積RSD為1.42%(n=5)。精密度良好。

3.8穩定性考察

精密吸取對照品溶液(濃度為0.2528mg/ml)2μl，分別于配制后0、2、4、8、16、24h進樣，測定面積的RSD為1.81%，表明供試品溶液在24h內穩定。

3.9重復性試驗

精密稱定研細的同一批(090901)樣品粉末2.0g共5份，按“2.3”項方法制備5份樣品溶液，各吸取10μl進樣，測定面積的RSD值為0.99%(n=5)。表明方法重復性較好。

3.10加樣回收率實驗

精密量取已知含量五味子樣品液(五味子甲素濃度為0.04136μg/μl)5.0ml6份，分別精密加入濃度為0.2528mg/ml的對照品溶液0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，并分別用甲醇定溶至10.0ml。分別進樣10μl，測定，并計算回收率。結果見表1。表1加樣回收測定結果

3.11樣品含量測定結果

取5批五味保肝丸(降酶丸)樣品，批號分別是：100312、100427、100604、100712、100802，按“2.3”步方法分別制備樣品液，并進樣，測定，計算，5批樣品五味子甲素含量分別為0.3075、0.3121、0.2976、0.2684、0.2713mg/g。按5批樣品含量測定結果，暫定降酶丸中五味子甲素含量不低于0.250mg/g。

4討論

五味保肝丸的主要藥效成分為五味子，其主要有效成分為五味子甲素、五味子乙素?！吨袊幍洹芬晕逦蹲蛹姿睾孔鳛槲逦蹲铀幉馁|量的評價指標[1]，因此，以五味子甲素含量作為該制劑的制備工藝和質量控制指標是可行的。

五味子甲素為脂溶性成分，能溶于乙醇、甲醇，極易溶于苯、氯仿、乙醚。因此，在提取樣品中一般都采用乙醚、氯仿、石油醚等有機溶劑超聲提取后，揮干有機溶劑，殘渣加甲醇定容來制備樣品溶液。本實驗采用氯仿超聲提取，甲醇定容來制備樣品溶液，五味子甲素加樣回收率為97.64%，RSD=1.41%(n=6)，效果滿意。

HTLC法測定五味子及其制劑中有效成分常用的流動相多用不同比例的甲醇-水[2～4]，也有用乙腈-水[5，6]，乙腈-甲醇-水[7]和甲醇-四氫呋喃-水[8]。對比試驗結果表明，選用甲醇-水(80：20)，供試品溶液相鄰峰分離度能滿足實驗要求。

參考文獻：

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