小議胎兒性別鑒定辦法與現狀

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摘要：優生優育是當今社會提高人口質量的方針政策。如何實現優生優育是人類將長期研究的課題。隨著遺傳學與分子生物學研究進展，已發現許多遺傳性疾病與性別有關。所以，對有遺傳病傾向的胎兒實行性別鑒定，以便早期實行選擇性地終止妊娠，是降低此類遺傳病患病率，提高整個社會人口質量的途徑之一。目前，關于胎兒性別鑒定的方法有多種，本文主要介紹胎兒性別鑒定方法的基本原理、優缺點，為進一步探討胎兒性別控制提供參考。

關鍵詞：胎兒性別鑒定x-連鎖遺傳聚合酶鏈反應(PCR)

前言

迄今,已發現的x連鎖遺傳病有200多種。包括x連鎖隱性遺傳病和x連鎖顯性遺傳病。常見的x連鎖隱性遺傳病有血友病、紅綠色盲、假肥大型肌營養不良（DMD），先天性丙種球蛋白缺乏癥等。此類病的致病基因由攜帶者母親傳給兒子。攜帶者女性與正常男性所生的男孩一半發病，一半正常，而女孩表型一般正常，為預防患兒出生，可保留女胎，流產男胎。而x連鎖顯性遺傳病遺傳性腎病、抗維素D佝僂病，男性患者與正常女性結婚，兒子正常，女兒都患病，通過性別鑒定，可保留男胎，流產女胎[1]。產前胎兒性別早期鑒定具有重要的社會意義。

二、胎兒性別鑒定的標本種類目前用于細胞遺傳學性別鑒定的標本有多種。（1）羊水：可以在妊娠16-20周，經羊膜腔穿刺抽取10ml左右，收集羊水細胞。（2）絨毛膜細胞：可以在妊娠6-12周，經陰道取絨毛膜細胞。（3）臍帶血：可以通過在B超引導下抽取臍帶血[2]。（4）孕婦母親外周血：近來有人發現采集6-41周孕婦母親外周血5ml-10ml，進行連續密度梯度離心富集胎兒紅細胞[3]。

三、胎兒性別鑒定的方法：目前關于胎兒性別鑒定的方法主要有五種。（一）傳統的顯微鏡細胞染色質分析法[1,4]此種方法將胎兒細胞通過特殊甲苯胺蘭染色液或硫堇染色液和阿的平染色液染色，觀察細胞內有無X、Y染色體。核膜的內緣有無一塊染色較深、大小為1um左右呈半月形的小塊，緊靠核膜，即為x小體。如果細胞核中有一發熒光的圓形或橢圓形的亮點，有如初秋夜空的北斗星，直徑約0.3um，即為Y小體，Y小體陽性診斷為男胎。此種方法不需要特殊的儀器，但結果受取材中細胞數、培養與染色效果及觀察細胞的數量有關，不易標準化，靈敏度不高。（二）B超技術這種技術較為安全，通過B超儀直接觀察胎兒的生殖器，此方法有較高的準確性，但要求胎兒發育程度較高，生殖器基本形成，妊娠達4個月以上。（三）核型分析技術通過收集羊水細胞并對其人工培養，進行染色體顯帶，性染色體XX型為女性；XY型為男性。此方法取材不方便，有較大的風險，且費時，必須由訓練有素的人員完成。(四)熒光原位雜交技術(FISH)有人根據母胎之間存在有微量血液交換，母親體內存在有胎兒來源的有核紅細胞，而且胎兒紅細胞的形態、核形、胞漿著色與母親紅細胞不同，并有特異的血紅蛋白γ和ε鏈，通過X、Y染色體特異熒光標記探針可鑒定胎兒紅細胞是來源于男性胎兒還是女性胎兒。此方法的特異性可達100%，靈敏度隨孕齡增加而增加[5]。但此方法需要較昂貴的流式細胞分析儀，操作也不易掌握，只有特定的科研人員能完成。但也有人[6]認為從母親外周血中抽取胎兒細胞進行產前診斷的可能性很小,因為胎-母轉移細胞數少，僅占母親細胞的0.0035%-0.008%胎兒有核紅細胞到達母體需要的妊娠的時間也在10周以上。（五）PCR（聚合酶鏈反應）技術從醫學遺傳學的角度，性別是由個體性染體組成決定的，其中Y染色體起決定性的作用。這是因為Y染色體帶有睪丸決定因子。

90年代在Y染色體短臂上成功地定位和克隆了性別決定區（sexdetermineregionoftheYhromosome,SRY）基因[7]，近年來的研究表明，性別的決定與分化是一個以SRY基因為主導的多個基因參與的有序而復雜的調控過程，已發現參與這一過程的基因至少有7種，即SRY，SOX9,某種原因AMH,WT-1,SF-1,DAX-1,MIS基因，這些都為胎兒性別鑒定奠定了分子遺傳學基礎。隨著PCR技術的成熟，許多科研人員試圖應用PCR技術進行胎兒性別的鑒定。主要有如下幾種方法：（1）利用羊水或絨毛細胞，擴增Y染色體特異基因片斷如SRY、DYZ-1、DYS14、DAZ進行定性分析[8,9]；（2）根據母親外周中含有少量胎兒細胞，提取母親外周血有核細胞（淋巴細胞），利用特異引物擴增Y染色體上特異系列，如果有Y染色體特異系列產物，胎兒即為男性，否則為女性[10]。（3）利用母親外周血血細胞或血漿，擴增X、Y染色體同源性基因如Amelogenin，利用擴增片斷電泳條帶數量進行定性分析，兩條帶為男性，一條帶為女性[11]。(4)最近有報道利用母親外周血漿[12,13]，采用熒光實時定量PCR（RQ-PCR）技術擴增Y染色體特異基因片斷如SRY進行胎兒性別鑒定的報道。VecchioneG[3]根據胎兒外周血血漿基因片段較母親短這一特點，通過一定密度梯度液進行分離后，用X染色體短串連重復序列對26例進行實時定量PCR分析，結果與傳統的染色體核型分析一致。

展望

建立一種胎兒性別鑒定常規方法具有重要的社會意義。作為常規方法，必須簡單、可靠、實用，價廉、安全。在上述諸方法中,無論是B超還是染色體核型分析，需妊娠時間較長（一般在16周以上），實施終止妊娠時，給孕婦身體影響較大[4]。經穿刺術采集標本，風險大、操作煩鎖，方法不易掌握，而利用胎兒紅細胞的方法又因為母親體內胎兒紅細胞僅占0.0035%-0.008%，存在靈敏度低的缺點。PCR技術由其技術原理和特點，在眾多方法中最具有優勢，它有較高靈敏度和特異性。但由于PCR敏感性高，會出現非特異擴增，或PCR體系的不合理會導致擴增失敗，都會影響實驗的準確度，但可以通過使用內參照或巢式PCR技術，很好地解決了非特異性擴增和假陰性問題[12]。目前報道中，由于標本來源、靶系列位點、引物系列、PCR類型的差異，診斷的特異性和靈敏度、準確度有所不同。有的研究樣本較少,關于性別早期診斷的可靠性還沒見報道，PCR應用于胎兒性別鑒定是一種有前景但技術尚未成熟，有待進步探索。我們課題小組正朝此方向試圖探索進行胎兒早期性別鑒定的條件研究。相信，隨著研究的深入，一種安全、無創傷性、較高，且易于標準化和自動化的成熟PCR方法，將取代傳統方法，真正實現胎兒早期性別鑒定。

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