剖析大蒜素可以抑制胃癌細胞的生長論文

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【摘要】目的研究大蒜素對胃癌BGC823細胞增殖的影響。方法通過細胞培養技術、瑞氏染色、MTT實驗方法，觀察大蒜素對胃癌細胞生長的影響。結果BGC823細胞在大蒜素的作用48h后，出現體積變小、核固縮等形態學改變。大蒜素對胃癌細胞的生長曲線有明顯的抑制作用，其抑制作用與大蒜素的濃度和時間呈正相關。結論大蒜素對體外培養的BGC823細胞具有明顯的增殖抑制作用。

【關鍵詞】大蒜素;胃癌;BGC823細胞

大蒜在我國民間藥用已有三千多年的歷史，在《本草綱目》和《驗方新編》中就有關于大蒜藥用價值的記載[1]。大蒜素(又名大蒜注射液)是對大蒜進行重整獲得的揮發油，有效成分為大蒜辣素。大蒜辣素不僅具有抗菌消炎的作用，而且可以抑制多種癌細胞的生長并誘導其凋亡。胃癌的發生和發展與細胞凋亡關系密切，誘導細胞凋亡已成為治療胃癌的新手段。大蒜素作為一種可誘導細胞凋亡的天然藥物，有望為胃癌治療開辟一條新途徑[2]。本研究將對大蒜素抑制胃癌細胞的生長作用加以探討論文。

1材料與方法

1.1材料

大蒜素注射液(三硫二丙烯)購自安徽華源醫藥有限公司，BGC823細胞為吉林醫藥學院檢驗系細胞培養室凍存細胞株。

1.2細胞生長狀態觀察

常規培養胃癌細胞至對數生長期[3]，將對數生長期細胞均勻的分成7組(每組設有1個對照孔和5個實驗復孔)，以每孔106個細胞接種于96孔細胞培養板中，分別向7組中加入大蒜素使終濃度分別為5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、40μg/mL，其中對照孔中只加入相同體積含10%小牛血清的1640完全培養液，分別于培養24h、48h、72h和96h時在倒置顯微鏡下觀察細胞形態并照相。

1.3瑞氏染色觀察

取對數生長期細胞,同樣將細胞均勻分成7組，分別接種于滅菌處理后放有蓋玻片的細胞培養皿中,加入大蒜素使終濃度分別為5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、40μg/mL，培養24h、48h、72h和96h。終止培養后取出蓋玻片，自然干燥，滴加瑞氏染液染色1min，再滴加等量的PBS(磷酸鹽緩沖液)，輕輕晃動玻片，混勻，靜置5min;水洗、吸干、鏡檢觀察并照相。

1.4MTT法檢測

取對數生長期細胞，以106個/mL細胞接種到96孔板，每孔體積200μL。按照藥物作用濃度設置7個實驗組，使大蒜素終濃度為5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、40μg/mL。每個濃度組分別設置5個實驗復孔，并設置1個調零孔。分別于培養24h、48h、72h加20μLMTT溶液,繼續培養4h后加二甲基亞砜，微量振蕩器振蕩10min，在490nm酶聯免疫檢測儀檢測,記錄OD值，并求出生長抑制率(IR),IR(%)=(1-用藥組平均OD值/對照組平均OD值)×100%,以時間為橫軸，IR為縱軸繪制細胞生長的抑制曲線,并計算出藥物的半數抑制濃度(IC50)[4]。

2結果

2.1大蒜素對BGC823細胞生長狀態的影響

倒置顯微鏡觀察經不同濃度大蒜素作用后48h細胞的形態，與對照組對比，細胞間隙變大，細胞漿中出現顆粒樣變化，細胞形態改變，體積變小、變圓，有的呈懸浮狀態，見圖1。對照組15mg/L大蒜素組圖1BGC823細胞生長狀態(40×)

2.2瑞氏染色

瑞氏染色法染色后，經大蒜素作用48h的細胞出現退行性變，細胞體積變小、變圓，胞質濃染、結構模糊、邊緣不清晰、核固縮、深染等特征,見圖2。對照組15mg/L大蒜素組圖2BGC823細胞生長狀態(40×)

2.3MTT檢測

MTT檢測結果顯示：大蒜素對胃癌細胞具有明顯的抑制增殖作用，并且隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長，抑制作用越強、抑制率越大，并求得藥物半數抑制濃度(IC50)為15mg/L。見圖3。圖3不同濃度大蒜素對BGC823細胞的抑制作用

3討論

胃癌是常見的消化道腫瘤，在我國發病率較高，臨床上主要采用外科切除、藥物化療和放射治療等方法治療胃癌，手術切除如不徹底,易復發，而藥物化療和放射治療手段除了殺傷腫瘤細胞以外，對宿主的免疫系統也造成了傷害，且治療效果不甚理想。而大蒜作為日常生活中常見的食物，不僅僅價格低廉，而且其主要成分大蒜素，含有一些特殊的具有生物活性的物質，如含硫化合物(蒜氨酸、蒜油、蒜素、阿霍烯等)、微量元素(高含量的鍺、硒、磷、鎂等)、超氧化物歧化酶(SOD)等，使大蒜具有廣泛的藥效，尤其具有良好的抗菌消炎和抗腫瘤的作用[5]，先前已有資料證明大蒜素對肝、胃、結腸、宮頸、乳房等多種腫瘤均有抗癌活性,作用廣泛[6]。

本實驗觀察到胃癌細胞經不同濃度的大蒜素作用后，細胞形態發生明顯的改變，與對照組的細胞相比可見細胞體積明顯變小、變圓，胞漿中出現明顯顆粒樣和空泡樣改變，有的甚至懸浮，說明不同濃度的大蒜素對胃癌細胞都具有殺傷作用[7]。另外，通過細胞生長曲線的繪制、MTT檢測，進一步證明了大蒜素對胃癌細胞的生長具有明顯的抑制作用，并且隨著大蒜素濃度的梯度增加和作用時間的延長，其抑制作用也隨之增大。生長曲線是觀測細胞在一代生存期內增生過程的重要指標，MTT比色實驗是一種檢測細胞存活和生長的方法,通過這些實驗方法都能進一步證明不同濃度大蒜素對胃癌細胞增殖具有抑制作用，為進一步研究大蒜素抑制胃癌細胞生長機制奠定基礎。

本實驗證明了大蒜素對胃癌細胞BGC823增殖具有抑制作用，隨著免疫組化技術、分子生物學等技術的發展，對各種藥物的藥理作用機制研究已經廣泛而深入，所以應進一步明確大蒜素中各種成分的藥理作用，并且進一步探討大蒜素抑制胃癌細胞生長機制，從而開發出新的抗癌藥物，對腫瘤的治療產生深刻的影響。

【參考文獻】

[1]黃泰康.常用中藥成分與藥理手冊[M].北京:中國醫藥科技出版社,1994:905.

[2]梁衛江,張萬岱,馬業俊,等.大蒜油對胃癌細胞增殖的抑制作用[J].中國中西醫結合消化雜志,2006,14(4)：252.

[3]司徒鎮強,吳軍正.細胞培養[M].北京:世界圖書出版公司,1996:175177,186187,298305.

[4]晏莉，黃起壬.大蒜素藥理作用和作用機理的探討[J].實用臨床醫學,2008,9(1):134135.

[5]鄭國華,李會慶.大蒜油和白藜蘆醇聯合應用對胃癌細胞抑制作用及其機制[J].福建中醫學院學報,2006,16(6):3436.

[6]SiuCW,LauCP,TseHF.Preventionofatrialfibrillationrecurrencebystatintherapyinpatientswithloneatrialfibrillationaftersuccessfulcardioversion[J].AmJCardiol，2003，92(11)：13431345.

[7]王海燕,許才紱,王慶莉.大蒜素對胃癌細胞株及裸鼠移植瘤的抑制作用[J].腫瘤防治研究,2001,28(2):9497.