胰腺炎治療

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1材料和方法

1.1材料雄性SpraqueDawley（SD）大鼠104只，體質量250～300g，購自西安交通大學實驗動物中心.實驗動物實驗前禁食12h，自由進水.海風藤酮（共150mg）購自北京大學藥學院，牛磺膽酸鈉購自Sigma公司，髓過氧化物酶（MPO）測定試劑盒購自南京建成生物公司，PAF標準品購自Sigma公司，大鼠IL6ELISA試劑盒購自Sigma公司，大鼠TNFαELISA試劑盒購自Sigma公司.

1.2方法采用隨機數字把104只大鼠分為3組，分別為假手術對照組(n=24)，急性胰腺炎（AP）組(n=40)，海風藤酮治療組(n=40)，每組又按術后3，6，12，24h平均分為4個小組.第1組大鼠術前12h禁飲食，氯胺酮ip麻醉（1.5mL/kg），仰臥固定，剪毛后常規消毒、鋪巾，腹正中開腹，輕微刺激胰膽管后，關腹；第2組采用張群華等［3］的方法制備AP模型；第3組制模術后立即經陰莖靜脈注入海風藤酮，每6h，10mg/kg，1～2次.由于海風藤酮均以DMSO(25g/L)為溶劑，故假手術組及AP模型組均于術后經陰莖靜脈注射等量的DMSO.3組大鼠分別在術后3，6，12，24h，氯胺酮ip麻醉（1.5mL/kg），仰臥固定，剪毛常規消毒、鋪巾，開腹.經下腔靜脈抽血4～8mL，不加抗凝劑，凝血后離心（3000r/min，18℃，10min），取血清1.5～3mL(-80℃)保存，留待進行生物法檢測血小板活化因子、ELISA檢測TNFα及IL6及全自動生化儀檢測血清淀粉酶.同步取胰腺組織和肺組織，部分制成組織勻漿，測定髓過氧化物酶（MPO）的活性，部分用Bouin液固定，石蠟包埋、切片，HE染色，光鏡下觀察胰腺及肺的炎癥病理變化.

統計學處理：采用SPSS12.0forWindows軟件包進行統計分析，實驗數據以x±s表示；組間比較用非參數秩和檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義.

2結果

2.1血清淀粉酶活性AP組血清淀粉酶顯著升高，到12h時達高峰，與假手術組相比較有統計學差異（P＜0.01）；治療組與AP組各時相段比較可降低血清淀粉酶，差異有統計學意義（P＜0.05），但仍高于假手術組各時相段（P＜0.05，表1）.

表1AP大鼠血清淀粉酶濃度的變化（略）

aP<0.05,bP<0.01vsAP.

2.2胰肺組織MPO活性采用單因素方差分析：假手術組各時相段胰腺及肺組織MPO活性相比較無統計學差異（P＞0.05）；注射35g/L?；悄懰岷螅珹P組、治療組胰腺及肺組織MPO活性顯著升高，到12h時達高峰，與假手術組相比較有統計學差異（P＜0.01）；給藥后3，6，12及24h時，海風藤酮治療組與AP組組間比較差異有統計學意義（P＜0.05或0.01）.說明海風藤酮可顯著降低胰腺及肺組織MPO活性（表2）.

表2AP大鼠胰腺及肺組織MPO活性的變化（略）

aP<0.05vsAP.

2.3血清PAF，TNFα，IL6AP組各時段血清PAF，TNFα，IL6升高，其中PAF持續升高，TNFα在6h時達高峰，而IL6在12h達高峰，與假手術組各個時相段比較有統計學差異（P＜0.01）；用藥后治療組與AP組比較各個時相段可降低血清PAF，TNFα，IL6的水平（P＜0.05，表3）.

表3血清中PAF,TNFα,IL6的變化（略）

aP<0.05vsAP.

2.4胰肺病理組織學假手術組大鼠胰腺/肺組織未見明顯病理改變.AP組3h后胰腺水腫加重，于12h達高峰，腺泡呈孤島樣分布，片狀出血壞死，大量PMN浸潤；6，12h肺以PMN增多為主，肺泡間隔增厚，可見少量紅色蛋白滲出物，并可見肺泡壁破裂，肺間質充血、水腫、明顯增寬，肺泡和肺間質中有大量的中性粒細胞浸潤.用藥后，可顯著減輕胰腺/肺組織的病理損害，炎性細胞浸潤減少，水腫、出血、壞死減輕，表現為點狀壞死.

3討論

AP發病機制十分復雜，早期胰腺細胞損傷導致局部的炎癥反應，隨著疾病進展，就會引起全身炎癥反應綜合征（STRS）嚴重時可出現多臟器功能不全（MODS）甚至多臟器功能衰竭（MOF），病死率常高達40%［4-5］.胰腺腺泡損傷后，釋放多種受激活的胰酶及炎癥細胞因子，有多種細胞的過度激活和相互作用，產生氧自由基和炎癥介質引起胰腺的血管通透性增加，最后導致了胰腺炎的發生.目前研究表明，重癥急性胰腺炎相關肺損傷也與胰酶異常激活和釋放、炎性細胞過度激活、炎癥介質的釋放致個身STRS等有關［6］.我們證實注射?；悄懰岷?，AP組各時段血清PAF顯著持續升高，到24h時達高峰，與假手術組對應時相段比較有統計學差異（P＜0.01），假手術組各個時相段血清PAF相比較無統計學差異（P＞0.05）.提示PAF和其他的炎性細胞因子（如TNFα,IL6）一起在AP中起著重要作用.治療組與AP組相應時相段比較有統計學差異（P＜0.01），說明海風藤酮能夠抑制血清PAF,TNFα及IL6的水平.相關性也表明血清PAF變化與胰腺組織MPO活性、胰腺組織形態學改變呈正相關；血清PAF變化與肺組織MPO活性、肺組織形態學改變呈正相關.PAF拮抗劑海風藤酮治療AP的主要作用機制可能有［7-8］：①與PAF競爭靶位，抑制PAF活性的發揮；②抑制AP血中PAF含量的升高；③抑制巨噬細胞、淋巴細胞及內皮細胞產生TNFα,IL6,IL8等炎性細胞因子和炎性遞質；④抑制中性粒細胞活性，降低髓過氧化酶；⑤減低血管通透性，提高微循環的血流速度；⑥降低胰酶活性，減輕胰腺組織自我消化等作用機制.

PAF是通過多種效應、多個環節參與AP的發生發展，已日益受到關注，而且阻斷PAF治療AP的研究也取得了可喜的成績，本實驗應用特異性PAF抑制劑海風藤酮來治療AP，是第一次系統的在炎癥介質水平上了解海風藤酮對AP的影響.目前尚未見臨床報道，為闡明AP的發病機制和治療AP提供了理論和實驗依據.

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