超聲提取魚腥草多糖分析論文

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1儀器與試藥

1．1儀器電子天平（AY120，SHAMAOZUCORPOPAITIONJAPAN）、HH－6－恒溫水浴鍋（江蘇金壇市宏華儀器廠）、超聲波清洗器（250W，上海之信儀器有限公司）、電熱鼓風恒溫干燥箱（3100W，上海訊能電熱設備有限公司）、UV－1800紫外可見分光光度計（北京瑞利分析儀器公司）；雙B循環水式多用真空泵（SHB－IV，鄭州長城科工貿有限公司）。

1．2試藥葡萄糖標準品Sigma公司產品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸、氫氧化鈉試劑均為分析純，醫用乙醇（廣州市新升華玻有限公司），苯酚試液參照文獻［8］配制。

魚腥草購于廣州清平市場，經廣東藥學院陳幼竹博士鑒定為三白草科蕺菜屬植物HouttuyniacordataThunb．

2方法與結果

2．1魚腥草多糖的提取與精制取魚腥草干品200g，以95％乙醇回流脫脂3次，藥渣置通風處晾干，加水10倍量、8倍量、8倍量，于90～100℃依次提取3，2，1h，過濾，合并濾液，濃縮至約200ml，加入等體積30％三氯乙酸溶液脫蛋白，4℃靜置，離心，上清液用0．01mol／L的氫氧化鈉調pH＝7，溶液減壓濃縮，濃縮液對水透析，透析液減壓濃縮至100ml，加入95％乙醇調含醇量為80％，靜置，離心，沉淀用無水乙醇、丙酮、無水乙醚依次洗滌，真空干燥，得除蛋白精制魚腥草多糖。

2．2多糖含量測定方法的建立

2．2．1標準品溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖0．0964g，加水溶解并定容至100ml，再取1ml，定容至10ml的容量瓶中，即制得濃度為0．0964mg／ml的葡萄糖對照品貯備液。

2．2．2供試品溶液的制備稱取魚腥草50g，按正交設計表進行提取，得粗多糖。稱取105℃干燥至恒重的粗多糖約30mg，精密稱定，置于100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2．2．3標準曲線的繪制精密量取葡萄糖標準品溶液0．1，0．2，0．3，0．4，0．5，0．6，0．7ml，分別置10ml具塞試管中，加蒸餾水補充至1．0ml，搖勻，加5％苯酚溶液1ml，濃硫酸5ml，室溫放置40min。另取1ml蒸餾水，加同量苯酚和濃硫酸，同法操作，作為空白對照。置UV－1800型分光光度計中，于490nm測定吸收度，以吸收度（Y）對葡萄糖含量（X）進行回歸，得回歸方程：Y＝9．1073X＋0．0102，相關系數r＝0．9998。結果表明葡萄糖在0．0193～0．0964mg／ml范圍內呈良好的線性關系。

2．2．4換算因素的測定精密稱取60℃干燥至恒重的魚腥草多糖101．2mg，置100ml容量瓶中，加入少量蒸餾水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取此液1ml，照標準曲線制備項下的方法測定吸收度，從回歸方程中求出多糖供試液中葡萄糖的濃度。按下式計算換算因素：F＝W／（C×D）。F為換算因素；W為多糖重量（mg）；C為多糖稀釋液中葡萄糖的濃度（mg／ml）；D為稀釋因素。

2．2．5樣品測定方法取各供試品溶液，按標準曲線項下方法操作，測定吸收值，從回歸方程中求出供試液中葡萄糖的含量，按下式計算樣品中多糖含量：多糖含量（％）＝C×D×F×100／W。C為供試液中葡萄糖的濃度（mg／ml）；D為供試液的稀釋因素；F為換算因素，W為供試樣品重量（mg）。

2．3正交實驗法優化超聲波提取魚腥草多糖最佳工藝

2．3．1制定因素水平表根據文獻報道［9］并結合實際，超聲波提取多糖的影響因素有超聲時間、料液比、醇沉濃度，為此選擇3因素作為考察因素，并結合生產實際，每因素又選取3個水平，按L9（34）正交表安排實驗，以多糖得率及含量作為衡量提取效率的雙重客觀指標，優選最佳工藝，為了提高統計分析的可靠性，每一條件下都作了重復實驗（n＝3），測定結果取其平均值供統計分析用。因素水平安排見表1。結果見表2。

2．3．2加權法綜合評價魚腥草多糖提取工藝最佳提取條件要滿足多糖得率高并且含量也高，因此采用加權評分法綜合評估魚腥草多糖提取條件。評分標準為：將各項指標除以該列最大值再乘以100，為其該項得分。通過這樣處理，使多糖得率和多糖含量轉化為0～100之間的數。根據多糖得率（x）和多糖含量（y）作用，而確定兩者的權重系數分別為0．4和0．6，對兩項指標進行加權求和，通過公式z＝0．4x＋0．6y，就得到綜合評分（z）。加權評分結果及方差分析見表2～3。

表1正交因素水平（略）

表2正交實驗及結果（略）

表3方差分析（略）

*表示差異顯著，F0.10(2,2)=9.00，F0.05(2,2)=19.00

2．3．3結果分析正交實驗方差分析表明，因素A（超聲時間）對魚腥草多糖的提取有顯著影響，而因素B（料液比）、因素C（醇沉濃度）對魚腥草多糖的提取無顯著影響。由Rj得出影響因素大小順序為A＞C＞B，由此得出最佳工藝為A3B1C3，即魚腥草料液比1∶30，超聲60min，醇沉濃度為90％。

2．3．4驗證實驗按照理論最佳工藝A3B1C3，進行重復實驗，魚腥草多糖得率及多糖含量分別為14．61％，12．22％，實驗結果一致。

2．4不同提取方法的比較

2．4．1水煎煮提取魚腥草多糖稱取魚腥草50g，加30倍體積的水，90℃提取3次，2h／次，過濾，90％乙醇醇沉得粗多糖，分別計算得率和多糖的含量。結果見表4。

2．4．2堿法提取魚腥草多糖稱取魚腥草50g，加0．2mol／L30倍體積的氫氧化鈉水溶液，65℃恒溫水浴中浸提3h，過濾，濾液調pH為中性，90％乙醇醇沉得粗多糖，分別計算得率和多糖的含量。結果見表4。

2．4．3酸法提取魚腥草多糖稱取魚腥草50g，加30倍體積的水，調pH＝3，60℃浸提3次，3h／次，過濾，濾液調pH為中性，90％乙醇醇沉得粗多糖，分別計算得率和多糖的含量。結果見表4。

2．4．4超聲提取按該試驗所得最佳工藝提取，即稱取魚腥草50g，加30倍體積的水，超聲60min，過濾，90％乙醇醇沉得粗多糖，分別計算得率和多糖的含量，結果見表4。

表4不同提取方法比較（略）

3討論

通過實驗確定了超聲波提取魚腥草多糖最佳工藝為魚腥草料液比1∶30，超聲60min，醇沉濃度為90％。與水提、酸提、堿提方法進行比較，結果看出超聲波提取多糖得率和含量略低于其它提取方法，但提取時間是酸提法的1／9，水提法的1／6，堿提法的1／3，大幅度降低成本；同時超聲提取所得多糖顏色最淺，可降低下一步的脫色純化的難度；另外超聲提取全過程避免了高溫加熱，從而減少了酸堿對多糖結構的破壞，所用儀器簡單，操作方便，因此也不失為一種好的提取方法。

魚腥草目前主要是開發揮發油類成分的制劑如魚腥草注射液等相關產品，而對于水溶性多糖以廢棄物處理，本實驗對魚腥草多糖的提取工藝研究對于魚腥草資源的合理充分利用具有重要的意義。

【參考文獻】

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［6］孟江，董小萍，趙中振，等．鮮魚腥草的酚類化合物研究［J］．中國中藥雜志，2007，33（9）：37.

［7］張建新．微波提取魚腥草水溶性多糖清除自由基特性的研究［J］．食品科技，2006，8：115．

［8］余世春，徐金龍，汪海孫，等．苯酚－硫酸法測定小柴胡湯口服液多糖的含量［J］．中成藥，1993，15：12．

［9］田春蓮，廖博儒，陳建華，等．湖北地黃多糖超聲波提取工藝條件及含量測定研究［J］．時珍國醫國藥，2007，18（1）：37．

【摘要】目的建立超聲波提取魚腥草多糖的最佳工藝。方法以多糖得率、多糖含量為指標成分，采用正交實驗對魚腥草多糖的超聲提取工藝進行優選。結果最佳工藝為：魚腥草料液比1∶30，超聲60min，醇沉濃度為90％。多糖得率及含量分別為14．61％，12．22％。結論該方法簡便，準確，靈敏度高，適合于魚腥草多糖的提取。

【關鍵詞】魚腥草多糖超聲提取正交實驗