五味子提取物體外抑菌作用分析論文

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【摘要】［目的］研究五味子提取物的抑菌活性，為其合理開發(fā)提供參考。［方法］以大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和肺炎克雷伯氏菌為供試菌種，采用濾紙片法和平板二倍稀釋法研究了五味子70%乙醇提取液的抑菌作用。［結(jié)果］五味子提取物對4種供試菌都有明顯的抑制作用。濾紙片法的MIC，金黃色葡萄球菌為62.5mg/ml，大腸埃希氏菌、綠膿桿菌、肺炎克雷伯氏菌為31.3mg/ml；二倍稀釋法的結(jié)果類似，除金黃色葡萄球菌的MIC為50mg/ml外，其余3種菌均為25mg/ml。另外，五味子提取物經(jīng)短時間的高溫處理，仍具有較強的抑菌作用。［結(jié)論］五味子乙醇提取物具有明顯的抑菌作用，且其抑菌成分是熱穩(wěn)定的。

【關(guān)鍵詞】五味子提取物抑菌作用

五味子［Schisandrachinensis(Turcz.)Baill］別名北五味子、遼五味子、山花椒、烏梅子、軟棗子等，為木蘭科五味子屬植物。多年生落葉木質(zhì)藤本，以野生為主，為常用中藥材。主要以果實入藥，因有甘、酸、辛、苦、咸五味而得名，有斂肺、滋腎、止汗、生津、止瀉、澀精等功能。可以治療咳嗽、哮喘、口渴自汗、盜汗、遺精、久瀉、神經(jīng)衰弱等癥，也是很好的果酒和飲料的原料［1］，具有極高的藥用價值和營養(yǎng)價值，是一種新型的“藥食同源”功能性保健食品，其果實在國際上已成為一種新興食品工業(yè)的重要原料［2，3］。本實驗采用濾紙片法和二倍稀釋法，研究了五味子提取物對4種常見污染菌的抑制作用，為其進一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1菌種與培養(yǎng)基試驗菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、綠膿桿菌和肺炎克雷伯氏菌，由浙江省臺州醫(yī)院微生物實驗室友情贈送。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基按文獻［4］自制，PH為6.0（用PBS配制［5］）。

1.2五味子提取物的制備五味子飲片購自臨海市醫(yī)藥有限公司，經(jīng)70℃烘干后研成粉末。取粉末10g用75％乙醇在超聲波清洗器中提取，反復(fù)多次，直至浸出液色淡。將浸出液濃縮，并定容到10ml，即1ml提取液為1g五味子的提取物［6］。提取液過0.22μm濾膜除菌，4℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.3抑菌試驗

1.3.1抑菌效力的測定將供試菌從斜面轉(zhuǎn)接到5ml液體培養(yǎng)基，30℃培養(yǎng)24h，吸取50μl到5ml液體培養(yǎng)基，30℃培養(yǎng)6h后取100μl菌液均勻涂布到平板上；再貼上濾紙圓片（φ6mm，提取液浸24h后風干），每皿4片，重復(fù)3次。37℃倒置培養(yǎng)24h后測定抑菌圈大小，用無菌水作空白對照，確定抑菌效果。

1.3.2最低抑菌濃度（MIC）的測定采用二倍稀釋法［7］測定提取物對供試菌的MIC。取7支試管，第1支加入10ml提取液，其余6支各加入5ml無菌水，從第1支吸取5ml提取液移至第2支，混勻后，再吸取5ml至第3支，以此類推，最后1支試管取出5ml棄去，每一試管的濃度分別為1000、500、250、125、62.5、31.3和15.6mg/ml。分別將5ml上述各濃度的提取物與20ml牛肉膏固體培養(yǎng)基混勻，制成提取物的濃度分別為200、100、50、25、12.5、6.3和3.2mg/ml（w/v）的平板，接種菌液后倒置培養(yǎng)24h觀察，以沒有供試菌生長的最低濃度為提取物的MIC。

1.3.3熱穩(wěn)定性試驗將五味子提取液置于80℃水浴、100℃水浴和121℃濕熱條件下［8］熱處理20min，再制成濃度為500mg/ml的提取液浸泡濾紙片，稍風干后貼在涂有菌液的平板中，測定其抑菌效果。

2結(jié)果與分析

2.1提取物濃度對抑菌效力的影響濾紙片法測定結(jié)果（見表1）顯示，五味子提取物對4種供試菌的生長均有很強的抑制作用，其中對綠膿桿菌的抑制作用最強，肺炎克雷伯氏菌其次，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌最弱。

表1五味子提取物的濃度對抑菌效率的影響（略）

2.2不同菌的MIC提取物對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、肺炎克雷伯氏菌的MIC值如表2所示。除金黃色葡萄球菌的MIC為50mg/ml外，其余3種菌均為25mg/ml（與濾紙片法基本一致）。

表2五味子提取物的MIC（mg/ml）（略）

“－”表示無菌生長，“+”表示細菌生長

2.3提取物的熱穩(wěn)定性試驗提取物經(jīng)3種溫度的熱處理20min后，仍具有較強的抑菌效力，其抑菌圈直徑與未經(jīng)高溫處理的樣品接近，其中只有對綠膿桿菌抑制作用，經(jīng)100℃處理和濕熱滅菌后有顯著下降，對金黃色葡萄球菌的抑制作用，經(jīng)濕熱滅菌后有顯著降低；而對大腸桿菌和肺炎克雷伯氏菌抑制作用，3種處理與對照均無顯著差異（見表3）。說明五味子的抑菌成分具有一定的熱穩(wěn)定性。

表3熱處理對五味子提取物抑菌效力的影響（略）

不同字母表示P＜0.05水平顯著，ns為不顯著

3結(jié)論

經(jīng)反復(fù)實驗，結(jié)果表明五味子提取物的濃度在31.3～1000mg/ml范圍內(nèi)，對4種供試菌的抑制效應(yīng)依次為：綠膿桿菌>肺炎克雷伯氏菌>大腸桿菌>金黃色葡萄球菌。濾紙片瓊脂擴散法結(jié)果顯示，除金黃色葡萄球菌MIC為62.5mg/ml外，其余3種供試菌MIC均為31.3mg/ml；采用二倍稀釋法測得的MIC也顯示類似的結(jié)果，金黃色葡萄球菌的MIC為50mg/ml，另3種菌的MIC均為25mg/ml。另外，五味子提取物經(jīng)短時高溫處理后，其活性成分不變，仍保持較強的抑菌效果。

【參考文獻】

［1］樊駿，張亞雯.五味子規(guī)模化栽培管理技術(shù)［J］.陜西林業(yè)科技，2005，(3)：8385.

［2］王森.五味子研究概況及其發(fā)展前景［J］.經(jīng)濟林研究，2003，(4)：8587.

［3］王森.栽培五味子有前途［J］.農(nóng)家參謀，2002，(1)：35.

［4］黃秀梨.微生物實驗指導(dǎo)［M］.北京：高等教育出版社，1997：35115.

［5］張志良，瞿偉菁.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo)［M］.北京：高等教育出版社，2004：307.

［6］李鈞敏，虞優(yōu)優(yōu)，金則新.大血藤葉片提取物抑菌作用的初步研究［J］.浙江中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2004，28(1)：5557.

［7］鄭鈞鏞.藥物微生物及檢驗技術(shù)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1985：351352.

［8］嚴贊開.生姜提取物的抑菌試驗［J］.中國食品添加劑，2005，(1)：7476.