北五味子多糖提取論文

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【摘要】目的建立提取和測定北五味子中多糖含量的方法。方法采用比色法測定北五味子中多糖含量。結果測得北五味子中多糖含量為6.57%，平均回收率為99.78%，RSD=1.54%。結論該方法簡便、精密度及重現性均較好，結果令人滿意。

【關鍵詞】北五味子多糖提取含量測定

ExtractionandDeterminationofPolysaccharidefromSchisandrachinensis(Turcz)BaillFruit

Abstract：ObjectiveToestablishamethodfortheextractionanddeteminationofpolysaccharidefromSchisandrachinensis(Turcz)BaillFruit.MethodsPolysaccharideinSchisandrachinensis(Turcz)BaillFruitwasdeterminedbythemethodofSpectrophotometry.ResultsThepolysacharidesinSchisandrachinenisis(Turcz)BaillFruitwas6.57%,theaveragerecoverywas99.78%,RSDwas1.54%.ConclusionThismethodissimple，theresultisstable，reproducible,andsatisfactory.

Keywords：Schisandrachinensis(Turcz)Baill；Polysaccharide;Extraction;Determination

北五味子Schisandrachinensis(Turcz）BaillFruit是木蘭科植物五味子的干燥成熟果實，是著名的滋補性中藥，因其果實甘、酸、辛、苦、咸五味俱全，故名五味子，具有斂肺、滋腎、生津、收汗、澀精之功效。現代藥理研究證實五味子對中樞神經系統、呼吸系統均有興奮作用，亦能促進肝糖原異生，加快肝糖原分解，在治療神經衰弱、肝炎等的藥物中應用十分廣泛。五味子有南北之分，據《本草綱目》記載“五味子南產者紅，北產者黑，入滋補藥，必用北者為良”，北五味子的化學成分主要為五味子木脂素、揮發油、五味子醇、多糖等［1］。近年來對多糖提取工藝的研究方法很多，如熱水浸提法、稀堿液浸提法、稀酸液浸提法。但多糖是由單糖基通過糖苷鍵連接而成的化合物，在稀酸、稀堿條件下，易使多糖發生糖苷鍵的斷裂，部分多糖發生水解而使多糖的提取率減少，因此本文采用熱水浸提法，用苯酚-硫酸法測定北五味子多糖的含量，得到滿意的結果。

1儀器與藥品

北五味子購于張家口市藥材公司經鑒定為北五味子，其它試劑均為國產分析純；UV752分光光度計（上海第三儀器廠）；GOA型電熱真空干燥箱（天津東郊機械加工廠）；RE52A型旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠）。

2方法與結果

2.1葡萄糖儲備液的配制精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，用蒸餾水溶解并定容到100ml。

2.2苯酚溶液的配制取苯酚100g，加鋁片0.1g和NaHCO30.05g，蒸餾，收集182℃餾份，稱取7.5g，加水150ml溶解，置棕色瓶內放冰箱備用。

2.3測定條件選擇

2.3.1反應溫度選擇精密吸取葡萄糖儲備液1.0ml于100ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，作為對照品溶液。分別吸取葡萄糖對照品液1.0ml于兩個具塞試管中，各加苯酚液1.0ml，并分別迅速滴加濃硫酸5.0ml。另取兩份1.0ml水同上操作，為空白液。一份于水浴中煮沸15min，另一份于40℃水浴中恒溫30min取出，冷卻至室溫，15min后于490nm處測其吸光度值，分別為0.112和0.126。因此，本實驗采用40℃恒溫30min的方法。

2.3.2苯酚及硫酸用量選擇吸取葡萄糖對照品液1.0ml5份，分別加入苯酚液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分別加水至2.0ml，再各滴加濃硫酸5.0ml，40℃恒溫30min后，測其吸光度值，分別為0.095，0.112，0.125，0.127，0.126，可見加入苯酚液0.6ml以上時，反應都能完成；另取葡萄糖對照品液1.0ml5份，分別加苯酚液1.0ml，再分別滴加濃硫酸2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml，并均用水稀釋至8.0ml，加入硫酸體積占總體積的62.5%以上時的結果較滿意。

2.3.3反應時間選擇及穩定性取葡萄糖對照品溶液1.0ml3份，各加苯酚液1.0ml，濃硫酸5.0ml，于40℃分別恒溫20，30，40min。測得吸光度值分別為0.16，0.125，0.126，可見加熱30min即可使反應完全。另測反應完成后樣品在不同時間內的吸光度值，結果3h內穩定。

2.4標準曲線繪制精密量取葡萄糖標準溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6ml置具塞試管中，分別加蒸餾水使成1.0ml，再分別加入苯酚溶液1.0ml，搖勻，然后加濃硫酸5.0ml，充分搖勻，于40℃水浴中恒溫30min，取出，冷卻至室溫，另以蒸餾水同上操作為空白對照，在490nm處測定吸光度，繪制標準曲線，建立回歸方程：A=0.06781C+0.00620471，r=0.9998。

2.5精密度實驗精密吸取對照品溶液1.0ml，6份，同2.4項下操作，結果顯示吸光度的RSD=1.45%。

2.6多糖的提取流程北五味子粉碎后，稱取500g，用清水洗凈，加水4500ml，微沸煎煮1h。過濾，濾渣加水2000ml，煎煮1h，過濾，合并提取液，加熱濃縮至300ml。加入乙醇使乙醇含量為80%放置12h，抽濾，沉淀依次用無水乙醇、丙酮反復洗滌，得到棕色粗多糖。將粗多糖溶于水，用seveg法除去蛋白，加入1%活性碳脫色，抽濾，濾液加入乙醇，使溶液含醇達80%，靜置過夜，抽濾，殘渣用無水乙醇、丙酮反復洗滌，真空干燥，即得精制北五味子多糖。

2.7換算因子測定

精確稱取60℃干燥恒重的五味子多糖20mg，加水溶解后定容到100ml容量瓶中，搖勻，作為多糖儲備液精確量取多糖儲備液0.2ml，加水至1.0ml按測量標準曲線同樣的方法測其吸光度值，根據標準曲線計算濃度。按下式計算換算因子：f=W/CD式中：W為多糖重量（μg），C為測試液中據標準曲線方程計算得到的單糖濃度（μg·ml-1）D為多糖的稀釋因子，測得f=1.748，（n=6）。

2.8樣品含量的測定

準確稱取干燥五味子粉末100mg，3份，分別置于索氏提取器中，用80%乙醇回流提取1h，改用水微沸煎煮，3份分別煎煮1，2，3次，各定容至100ml，為樣品液。分別精密吸取上述樣品液10ml，分別定容至100ml，各取1.0ml，按2.4項下操作，平行做6次，并按下式計算多糖含量（以粗多糖計）。結果見表1。表明提取兩次即可。多糖含量（%）=CDf/W×100。式中：C為樣品溶液的葡萄糖的濃度（μg·ml-1），D為樣品溶液的稀釋因子，f為換算因子，W為樣品的重量（μg）。表1樣品中多糖的含量（略）

2.9回收率測定精密吸取樣品液0.5ml（6份）再分別精密加入不同量的標準溶液，依樣品測定方法測定吸光度，計算回收率平均值為99.78%，RSD=1.54%。

3討論

3.1苯酚

硫酸比色法是測定多糖含量較經典有效的方法之一，但各自的報道中，對反應溫度的控制、試劑中苯酚及硫酸用量不盡相同。常見的反應溫度有煮沸、40℃恒溫和室溫3種，鑒于冬天和夏天室溫相差較大，本實驗僅比較于前兩種條件，證實本法以40℃恒溫30min較好。加入苯酚量0.6ml以上時，反應能完成。對于硫酸的用量，經實驗對比認為硫酸占總體積62.5%以上時，在重現性、穩定性及回收率方面都有明顯的優越性，并且與文獻報道一致［2］。

3.2實驗結果表明，北五味子多糖提取兩次即可，平均含量為6.57%，比文獻報道的稍低［3］，這可能與北五味子的產地、采收季節等因素有關。

3.3五味子粗多糖的初步藥理研究表明［4］，五味子粗多糖能明顯提高小鼠的耐缺氧能力，具有抗疲勞作用，亦能使正常小鼠胸腺和脾臟的重量的增加。說明五味子粗多糖能夠提高機體對環境的適應能力和防御能力。而北五味子多糖含量較高，這可能是北方五味子藥效較優的原因之一，但是北五味子多糖的結構組成和生理活性有待進一步研究。

【參考文獻】

［1］應國清，俞志明，單劍峰，等.北五味子有效組分的研究進展［J］.河南中醫，2005，25（6）：84.

［2］DongQ,ZhengLY.FangJN.Studyonthedeterminationofoligosaccharideandpolysaccharidebymodifiedphenol-sulfuricacidmethod［J］.中國中藥雜志，1996，31（9）：550.

［3］韓學君，王發善.北五味子有效成分的高效液相層析測定［J］.黑龍江醫藥科學，2003，26（4）：104.

［4］苗明三.五味子多糖對衰老模型小鼠的影響［J］.中國醫藥學報，2002，17（3）：188.