超聲波提取芹菜總黃酮論文

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【摘要】目的為充分利用芹菜食物資源，避免資源的浪費(fèi)，探討芹菜總黃酮的提取及鑒別方法。方法采用超聲波乙醇浸提法從芹菜中提取黃酮類物質(zhì)，對所提取的黃酮類物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，并用分光光度法測定含量。結(jié)果測得樣品中總黃酮的含量C=0.2126mg/ml，回收率為100.3%，其純度和產(chǎn)率均較高。結(jié)論該方法采用全物理過程，無任何污染，是提取芹菜黃酮類物質(zhì)的有效途徑。

【關(guān)鍵詞】超聲波提取芹菜總黃酮鑒別

TheTotalFlavanoneofCeleryExtractionandtheIdentificationbyUltrasonicWave

Abstract：ObjectiveTomakeuseoftheresourcesofcelery，avoidwastingandapproachtheextractionoftotalflavanoneofcelery.MethodsTheflavonoidswereextractedbyethanolasthesolventfromcelerywithultrasonicwaveandethanolextraction.Usingspectrophotometrytoextractandchecktheflavanoneofcelery.ResultsThedensityofthetotalflavanoneofcelerywasC=0.2126mg/mlandtherateofrecoverywas100.3%.Theoutcomeandthepurityoftheflavanonewereallveryhigh.ConclusionThismethodisapurelyphysicalprocessandhasnotanypollution.Itisanidealwaytoextracttheflavanoneofcelery.

Keywords：Ultrasonicwavetreatment;Celery;Totalflavanone;Identification

芹菜ApiumgraveolensL．屬傘形花科一年生或二年生草本植物，異名藥芹、旱芹。芹菜味辛、甘，性涼，營養(yǎng)豐富。已有研究證實(shí)，芹菜含有豐富的黃酮類化合物、多不飽和脂肪酸、礦物元素、丁基苯酞類、萜類、香豆素衍生物、葉綠素、氨基酸與維生素、膳食纖維等［1］，其中，黃酮類化合物主要成分為水蓼素及7-甲基水蓼素,醫(yī)學(xué)證明，這2種黃酮類化合物是治療高血壓的有效成分［2］。在藥理上，芹菜還具有降壓、安神、降血糖、血脂、軟化血管、增強(qiáng)免疫力、增進(jìn)食欲和健胃等藥理作用［2］。還可作為神經(jīng)衰弱、小便熱澀不利、月經(jīng)不調(diào)等癥的食療。芹菜中含有大量膳食纖維素，經(jīng)常食用有促進(jìn)腸蠕動、防治便秘以及預(yù)防大腸癌等［3］。

有文獻(xiàn)報(bào)道芹菜中總黃酮的提取方法采用乙醇提取［2～4］，但是，這種方法的提取效率仍然較低。近年來，超聲技術(shù)應(yīng)用于提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質(zhì)、動物組織漿的毒質(zhì)等研究已有報(bào)道［5，6］，表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點(diǎn)。很多研究表明，利用超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈振動、高的加速度、強(qiáng)烈的空化效應(yīng)、攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進(jìn)入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時(shí)間，并且還可避免高溫對提取成分的影響［6］。但超聲技術(shù)應(yīng)用于提取芹菜中黃酮類物質(zhì)的研究尚未見報(bào)道，本文報(bào)道用超聲波提取芹菜總黃酮及鑒別。

1儀器與試劑

1.1儀器

KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（超聲工作頻率40kHz、昆山市超聲儀器有限公司）；UV755B紫外可見分光光度計(jì)（上海分析儀器總廠）；ZF-I型三用紫外分析儀(上海顧村光電儀器廠)；SHBIII循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）。

1.2試劑

95%乙醇AR；亞硝酸鈉AR；硝酸鋁AR；氫氧化鈉AR；三氯化鋁AR；鹽酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所）；新鮮芹菜買自百色市農(nóng)貿(mào)市場。

2方法與結(jié)果

2.1總黃酮成分提取

取新鮮芹菜，烘干，粉碎。稱取芹菜粉末約6g，加80ml95%乙醇，超聲波提取2.5h，抽濾。濾渣再加80ml95%乙醇，超聲波提取2.5h，抽濾，合并兩次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩5～7ml為止，放置100ml容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得樣品液。

2.2測定方法依據(jù)

以蘆丁為對照品測定芹菜中總黃酮的含量，加入鋁離子試劑，同時(shí)控制適宜pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡(luò)合物，在可見光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。

2.3定量實(shí)驗(yàn)-總黃酮的含量測定

2.3.1波長的選擇取樣品液適量，在0.30ml5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420～700nm波長范圍測定絡(luò)合物的吸光度，絡(luò)合物于510nm波長處有最大吸收，故測定時(shí)選用此波長。

2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密吸取蘆丁對照液（0.13mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10.00ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加10%硝酸鋁溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12min，以試劑作空白參比液，于510nm處測定吸光度，結(jié)果見表1。表1紫外可見分光光度計(jì)測定吸光度（略）

根據(jù)上表得回歸方程：A=3.619×103+12.34C，r=0.9999。

2.3.3提取物含量的測定精密吸取樣品液0.50ml，置10.00ml容量瓶，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法測定其吸光度A=0.137，根據(jù)回歸方程：A=3.619×103+12.34C，計(jì)算樣品中總黃酮的含量C=0.2162mg/ml。

2.3.4回收率實(shí)驗(yàn)

精密量取樣品液1.00ml，加入標(biāo)準(zhǔn)蘆丁對照品1.00ml（0.13mg/ml），同前樣品測定方法操作測定吸光度，求出回收率為100.3%。

2.4定性實(shí)驗(yàn)-總黃酮的鑒別

2.4.1顏色反應(yīng)紫外光下呈色反應(yīng)：取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點(diǎn)。

濃氨水反應(yīng)：取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，將濾紙?jiān)诎彼戏窖?0s，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點(diǎn)。

三氯化鋁反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加1％三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點(diǎn)。

乙酸鎂反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點(diǎn)。

鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取乙醇提取液1ml于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數(shù)滴（1次加入），在泡沫處呈紫紅色。

2.4.2紙層析取樣品溶液10μl點(diǎn)在濾紙上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5（體積比）為展開劑，上行展開5h，取出晾干。噴1%氯化鋁乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可見熒光斑點(diǎn)。

3討論

3.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)方法工藝簡單，回收率為100.3%，利用本文所提供的超聲波提取、純化方法而得到的黃酮類物質(zhì)其純度較高。超聲波可以強(qiáng)化乙醇浸提法，達(dá)到省時(shí)、高效、節(jié)能的目的，此方法采用全物理過程，無任何污染，是一條理想的提取黃酮類物質(zhì)的途徑，具有廣闊的應(yīng)用前景。

3.2黃酮類化合物是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分。在自然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等［7］。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能進(jìn)入脂肪組織，進(jìn)而體現(xiàn)出如下功能：消除疲勞、保護(hù)血管、防動脈硬化、擴(kuò)張毛細(xì)血管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其他臟器細(xì)胞的功能。

黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用［8～13］。近年來，世界上掀起了植物藥開發(fā)的熱潮，植物藥以其天然低毒的特點(diǎn)倍受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用引人矚目，芹菜分布廣泛，本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，芹菜中含有黃酮。因此，芹菜具有廣泛開發(fā)和利用價(jià)值，值得綜合利用加強(qiáng)資源開發(fā)。

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