大鼠肢體缺血論文

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【摘要目的摘要：觀察大鼠肢體缺血再灌注后肝臟的損傷性變化，以及牛磺酸對肝臟損傷性變化的保護效應，探索?；撬釋Υ笫笾w缺血再灌注后肝臟功能保護功能的可能機制.方法摘要：實驗用Wistar大鼠30只，隨機分為對照(control,C)組，缺血再灌注(ischemiareperfusion,IR)組和?；撬?缺血再灌注(taurine+ischemiareperfusion,TR)組，每組10只.觀察缺血4h再灌注4h各組大鼠血漿中XOD,LDH,MDA,AST,ALT和SOD的變化；觀察肝組織XOD,MDA,ROS,MPO和Ca2+的變化；觀察肝線粒體GSHPX和Ca2+的變化.結果摘要：單純肢體缺血再灌注組大鼠血漿中LDH［(190.16±13.36)μkat/L］,XOD［(758.82±151.53)nkat/L］,MDA［(5.19±0.67)nmol/L］,ALT［(78.40±6.45)nkat/L］,AST［(47.70±4.47)nkat/L］等較正常對照組血漿中LDH［(122.39±14.87)μkat/L］,XOD［(543.61±43.51)μkat/kg］,MDA［(1.27±0.21)nmol/L］,ALT［(20.50±3.70)nkat/L］,AST［(25.25±2.98)nkat/L］明顯增加，而SOD［（1.30±0.15)μkat/L］較對照組(1.80±0.16)μkat/L明顯降低；單純肢體缺血再灌注組大鼠肝組織XOD［(104.69±12.34)μkat/Kg］,MDA［(2.66±0.08)nmol/L］,ROS［(771.65±100.69)μkat/L］,MPO(0.47±0.04),［Ca2+］［(0.248±0.050)mmol/L］較正常對照組肝組織XOD［(59.01±10.50)μkat/kg］,MDA［(1.29±0.14)nmol/L］,ROS［(606.45±52.01)μkat/L］,MPO［(0.28±0.06)］,［Ca2+］［(0.123±0.014)mmol/L］均明顯增加；缺血再灌注組大鼠肝線粒體GSHPx活性［(20.34±4.67)nkat/L］和正常對照組［(31.17±11.50)nkat/L］比較明顯降低，而［Ca2+］濃度［(0.38±0.06)mmol/L］則高于正常對照組［(0.14±0.03)mmol/L］.?；撬?缺血再灌注組大鼠血漿中LDH［(158.29±4.87)μkat/L］,XOD［(758.82±151.53)nkat/L］,MDA［(2.81±0.19)nmol/L］,ALT［(64.40±9.05)nkat/L］,AST［(38.70±8.10)nkat/L］較單純缺血再灌注組明顯降低，而SOD［(1.50±0.17)μkat/L］則增加；肝組織XOD［(94.19±13.50)μkat/L］,MDA［(1.67±0.12)nmol/L］,ROS［(710.81±55.34)μkat/L］,MPO(0.36±0.04),［Ca2+］［(0.192±0.426)mmol/L］等指標也較單純缺血再灌注組明顯降低，此外?；撬?缺血再灌注組大鼠肝線粒體GSHPx活性［(22.50±3.17)nkat/L］和單純肢體缺血再灌注組相比明顯增加，而Ca2+濃度［(0.31±0.06)mmol/L］則降低，損傷減輕.結論摘要：?；撬峥梢詼p輕大鼠肢體缺血4h再灌注4h后所致的肝損傷.

【再灌注損傷；肝功能；四肢；?；撬?/p>

0引言

?；撬崾求w內含量最豐富的氨基酸，具有廣泛的生物學功能［1］.已有很多實驗資料［2-6］證實?；撬峋哂星宄杂苫涂怪|過氧化功能等.本實驗我們在大鼠肢體缺血再灌注模型上觀察肝臟的損傷性變化以及觀察預先給予牛磺酸對這一變化的影響，旨在探索肢體缺血再灌注時遠隔器官損傷及其可能的發生氣制，以及牛磺酸的保護效應，為避免或延緩肢體缺血再灌注損傷的發生、發展提供理論依據.

1材料和方法

1.1材料健康雄性Wistar大鼠30只，體質量（250±50）g，購自河南醫科大學實驗動物中心，醫動字摘要：D410116號）；所用生化測定試劑盒均購自南京建成生物制品公司，其余所需試劑均為市售分析純產品，722分光光度計購自上海精密科學儀器公司，低溫高速離心機購自德國Hittech公司.

1.2方法

1.2.1模型復制采用本室常規方法［7］制作大鼠肢體缺血再灌注模型，乙醚淺麻醉下用橡皮圈環繞結扎大鼠雙后肢根部，阻斷血流4h后松解，恢復血流灌注4h，自腹主動脈取血處死動物，并收集血液，4℃,3500r離心15min，取血漿，裝入干凈的Epperdorf管，-70℃保存.

1.2.2動物分組將實驗大鼠分籠喂養30d，術前12h禁食，自由飲水，室溫（25±2）℃，濕度40%~50%.隨機分為3組，每組10只，①正常對照組摘要：常規飼養，雙后肢松弛環繞橡皮圈，不阻斷血流，余操作同缺血再灌注組組.②缺血再灌注組摘要：常規飼養，按模型操作.③牛磺酸+缺血再灌注組摘要：在缺血再灌注前30d天天灌服牛磺酸一次，劑量為200mg/kg體質量，其余操作同缺血再灌注組.

1.3觀測指標

1.3.1血漿生化指標測定取血漿測定谷草轉氨酶（ALT）,谷丙轉氨酶（AST）,乳酸脫氫酶（LDH）,黃嘌呤氧化酶（XOD）,丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）的含量.

1.3.2肝組織及其線粒體生化指標測定結束實驗時，迅速取出肝組織，液氮速凍后-70℃保存.取部分肝組織制成10%勻漿，測定黃嘌呤氧化酶（XOD）,丙二醛（MDA）,髓過氧化物酶（MPO）,活性氧（ROS）及Ca2+含量；測定線粒體中GSHPX和Ca2+含量.ALT,AST,LDH,XOD,MDA,MPO,ROS,GSHPX和Ca2+用比色法測定；肝線粒體的制備參照文獻［8］進行.

統計學處理摘要：結果以x±s表示，用SPSS11.5統計分析軟件進行單因素方法分析以及SNKq檢驗.

2結果

2.1各組大鼠血漿ALT,AST,LDH,XOD,MDA和SOD含量的變化和正常對照組比較，單純缺血再灌注組MDA,XOD,ALT,AST和LDH均明顯升高，分別升高了3.09倍,39.6%,2.82倍,88.9%和55.4%,（P%26lt;0.05）；而SOD則降低了27.7%，(P%26lt;0.05)；牛磺酸+缺血再灌注組組和單純缺血再灌注組比較，MDA,XOD,ALT,AST和LDH分別降低了45.9%,7.2%,15.3%,18.9%和16.8%，(P%26lt;0.05)；而SOD則升高了14.8%（P%26lt;0.05），損傷減輕（表1）.

表1各組大鼠血漿SOD,XOD,ALT,AST,LDH和MDA含量(略)

aP%26lt;0.05vsbP%26lt;0.01正常對照，cP%26lt;0.05vs缺血再灌注.

2.2各組大鼠肝組織中XOD,MDA,MPO,ROS和Ca2+含量變化和正常對照組比較，單純缺血再灌注組XOD,MDA,ROS,MPO,LDH和Ca2+均明顯升高，分別升高了77.4%,1.06倍,27.2%,66.8%,30.1%和1.02倍，（P%26lt;0.05）；?；撬?缺血再灌注組和單純缺血再灌注組比較，XOD,MDA,ROS,MPO,LDH和Ca2+分別降低了10.0%,37.2%,7.9%,11.7%,24.8%(P%26lt;0.05)和22.6%(P%26lt;0.05)，損傷減輕(表2).

表2各組大鼠肝組織XOD,MDA,ROS,MPO和Ca2+含量(略)

aP%26lt;0.05vs正常對照組;cP%26lt;0.05vs缺血再灌注組.

2.3各組大鼠肝線粒體中GSHPX活性和Ca2+含量變化單純缺血再灌注組和正常對照組比較，Ca2+(0.38±0.06vs0.14±0.03)mmol/L明顯升高，升高1.71倍（P%26lt;0.05）；而GSHPX(20.34±4.67vs31.17±11.50)nkat/L則降低了34.8%,（P%26lt;0.05）；和單純缺血再灌注組比較，?；撬?缺血再灌注組Ca2+(0.31±0.06mmol)降低了18.4%（P%26lt;0.05），而GSHPX(22.50±3.17nkat/L)則升高了10.7%（P%26lt;0.05），損傷減輕.

3討論

大量探究證實組織缺血缺氧后的損傷不僅發生在缺氧當時，更主要的是發生在缺血組織迅速恢復血供時［9］.肝臟損傷是肢體缺血再灌注致遠隔器官損傷的一個非常重要的臟器損傷.

反映肝功能的ALT,AST和反映脂質過氧化損傷的XOD是三個很重要的酶.當肝在受到損傷的早期，血清ALT,AST含量即可升高，是評價肝功能的非常重要的指標.XOD是氧自由基產生的主要酶.在肝細胞受損時，此酶活性明顯升高.SOD和GSHPx對機體的氧化和抗氧化平衡起著至關重要的功能，此酶能清除超氧陰離子自由基，防止膜脂質過氧化連鎖反應所造成的損傷，保護細胞.MDA是脂質過氧化產物，是衡量機體組織過氧化損傷程度的指標.LDH也屬于胞質酶，其血漿水平的高低可反映組織受損的嚴重程度.MPO是中性粒細胞（PMN）嗜天青顆粒中含量較高的酶，組織中MPO活性的高低可定量表示組織中PMN聚集的程度.

在本實驗中我們發現，大鼠肢體缺血再灌注后肝組織中MPO含量升高，表明PMN在肝內血管黏附、聚集或游出到間質增多，進而促使黃嘌呤脫氫酶大量轉化為黃嘌呤氧化酶，引起“呼吸爆發”，產生大量氧自由基.同時，由于SOD及GSHPx活性降低，清除自由基能力下降，自由基大量堆積，引發過氧化反應，肝組織受到損傷.由于細胞膜遭到破壞，通透性增加，致胞質酶和溶酶體酶漏出，造成組織和細胞的進一步損傷［10］.我們在實驗中觀察到的血漿中LDH,ALT,AST升高就是由于細胞膜通透性升高，酶釋放入血所致.組織的過氧化反應增強，主要表現為MDA增多.這些改變又加重了組織細胞損傷，形成自由基增多和組織損傷之間的“惡性循環”.

?；撬崾求w內含量最豐富的氨基酸，具有廣泛的生物學功能［1］.具有穩定細胞膜、調節細胞內鈣穩態和抗脂質過氧化功能［11］，是機體內源性抗損傷和細胞保護物質，可明顯減輕肢體缺血再灌注后的細胞壞死［12］.本實驗中我們觀察到灌服?；撬岬拇笫笾w缺血再灌注后，肝細胞損傷程度明顯減輕，同時SOD，GSHPx活性增加.本實驗結果提示摘要：?；撬崮軠p輕肢體缺血再灌注后繼發的肝臟損傷，而這一效應和其避免或減輕肢體缺血再灌注后機體的過氧化反應增強有關.它的這一功能對保護機體避免或延緩肢體缺血再灌注損傷的發生、發展有一定的意義.本實驗結果提示摘要：牛磺酸可能通過提高LIR后肝細胞及其線粒體內自由基清除酶活性、減少自由基生成和穩定細胞膜而達到保護肝臟的功能.其具體機制還有待于進一步闡明.

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