小鼠腹腔巨噬細胞論文

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【摘要】目的探索研究幾種水溶性維生素（VitB1、VitB6、VitB12andVitC）對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用。方法采用改良的MTT法，來檢測小鼠腹腔巨噬細胞活性。結果VitB150μl(0.0025μg),VitB6200μl(0.002μg),VitB12200μl(0.002μg),VitC200μl(0.08μg)均對小鼠腹腔巨噬細胞有活性增強作用。結論幾種水溶性維生素（VitB1、VitB6、VitB12andVitC）對小鼠腹腔巨噬細胞活性有增強作用。

【關鍵詞】水溶性維生素；MTT法；小鼠巨噬細胞

Tostudytheactivationofinvitromicemacrophageswithvariouswatersolublevitamins

【Abstract】ObjectiveToproposestudyingtheeffectofvariouswatersolublevitamins(VitB1,VitB6,VitB12andVitC)ofinvitromicemacrophagesactivation.MethodsThearticletookthemodifiedmethodofMTTtoexplosetheactivationofinvitromricemacrophages.ResultsVitB150μl(0.0025μg),VitB6200μl(0.002μg),VitB12200μl(0.002μg),VitC200μl(0.08μg)allstimulatedtheeffectofinvitromicemacrophages.ConclusionVariouswatersolublevitamins(VitB1,VitB6,VitB12andVitC)whichwereabletostimulatetheactivationofinvitromicemacrophagesundercertainconcentration.

【Keywords】watersolublevitamin;MTTmethod;micemacrophage

維生素是維持人體正常生理功能及細胞內各種能量代謝生化反應所必需的一類低分子量有機化合物。盡管機體對這類物質需求量相對很少，但是它們卻十分重要，是人體必不可少的微量物質，如果缺乏，可引起各種各樣的疾病。因此某些種類維生素對人體的免疫系統的免疫功能也起著重要作用，影響免疫系統的各種細胞功能。最近許多年，國內外營養免疫學者都在研究探討各種維生素對免疫系統的作用，企圖探明各種維生素對免疫細胞活化的增強或抑制，為提高機體免疫力，本文選用和人類基因組具有相當部分同源性小鼠，選用體外實驗檢測維生素B1、B6、B12和維生素C對小鼠腹腔巨噬細胞活性作用的研究。Mosmon(1983)［1］報道噻唑藍（MTT）比色法，經后人改良，使這種方法更加完善成熟，成為定量、重復性好、簡便易行檢測免疫細胞活性的好方法。我們采用此法，檢測小鼠腹腔巨噬細胞的活性，現將結果報告如下。

1材料與方法

1．1實驗動物和主要試劑及實驗儀器ICR小鼠體重（20±2）g，雄性，由首都醫科大學實驗動物部提供。RPMI1640培養液為Hyclmone公司產品。噻唑藍（MTT）為Sigma公司產品，10%十二烷基磺酸鈉（SDS）為BRL公司產品，淋巴細胞分離液為TBD生物技術發展中心產品，液體石蠟油為北京旭東化工廠產品，VitB1（5mg/ml）、VitB6（5mg/ml）、VitB12（0.5mg/ml）均為天津金耀氨基酸有限公司產品，VitC（400mg/ml）為北京雙鶴藥業有限公司產品，酶標儀為SLT公司產品（型號為A-5082）。

1.2方法（1）對小鼠腹腔注射（VitB1、VitB6、VitB12和VitC，無菌液體石蠟油），取ICR小鼠40只分成4組，每組10只，分別為1組、2組、3組和4組。1組為VitB1實驗組，第1天對其中5只小鼠腹腔注射無菌生理鹽水0.2ml/只，作為對照，另外5只小鼠腹腔注射VitB10.05ml/只作為實驗組。2組為VitB6實驗組，第1天對其中5只小鼠腹腔注射無菌生理鹽水0.2ml/只，作為對照，另外5只小鼠腹腔注射VitB60.2ml/只作為實驗組。3組為VitB12實驗組，第1天對其中5只小鼠腹腔注射無菌生理鹽水0.2ml/只，作為對照，另外5只小鼠腹腔注射VitB120.2ml/只作為實驗組。4組為VitC實驗組，第1天對其中5只小鼠腹腔注射無菌生理鹽水0.2ml/只，作為對照，另外5只小鼠腹腔注射VitC0.2ml/只作為實驗組。以上4組小白鼠經腹腔注射生理鹽水和維生素，均于48h后再經腹腔注射無菌液體石蠟油0.1ml/只。48h后行頸椎脫臼處死。（2）巨噬細胞的制備：將處死的小白鼠行腹部皮膚消毒后，持鑷提起腹中部皮膚并剪開，暴露腹膜，避開血管剪開腹膜一小口。用毛細吸管取出腹腔液，并收集于試管中。作好標記后離心，棄上清，洗3次，立即進行臺盼藍染色，計算活細胞數。細胞數108/ml。（3）噻唑藍比色法，將制備的小鼠巨噬細胞按組分管，每組實驗管（孔）3管（孔）對照管（孔）3管（孔）。37℃溫育2h后，每管加10%SDS（溶于雙蒸水），輕輕震蕩，待甲簪顆粒完全釋放后，再用酶標儀測OD570值。

2結果

2.1VitB1對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用VitB1對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用，VitB150μl（0.0025μg）對小鼠腹腔巨噬細胞活性有增強作用，P<0.01，見圖1。

2.2VitB6對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用VitB6對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用,VitB6200μl(0.002μg）對小鼠腹腔巨噬細胞活性有增強作用，P<0.01，見圖2。

2.3VitB12對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用VitB12對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用，200μl(0.002μg)對小鼠腹腔巨噬細胞活性有增強作用，P<0.001，見圖3。

2.4VitC對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用VitC對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用，200μl(0.08μg)對小鼠腹腔巨噬細胞活性有增強作用，P<0.01，見圖4。

3討論

Mosmon（1983年）［1］報道噻唑藍（MTT）比色法測定細胞活性。MTT可被各種類型的活性細胞（RBC除外）攝取，活性強的細胞攝取較多的MTT，在線粒體內被脫氫酶還原為甲簪顆粒（Formazan）,顏色由黃變深紫，加入SDS使細胞完全裂解釋放出甲簪，在波長570nm下酶標儀測量OD值，

OD值越高，其甲簪濃度越高，反應活的細胞活性越強［2，3］。因此，MTT法可定量檢測各種細胞的活性。我們曾經報道幾種水溶性維生素對小鼠淋巴細胞活性的作用［4］。本報道VitB1、VitB6、VitB12和VitC對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用，它們在一定濃度下對小鼠腹腔巨噬細胞活性有增強作用，VitB12尤為顯著。VitB1、VitB6、VitB12均涉及體內細胞正常生理生化功能，因此，它們當然參與小鼠腹腔巨噬細胞的生化反應，完成正常生理功能。VitC經臨床實驗證實［5］，它具有抗氧化作用，增強巨噬細胞的吞噬殺菌功能，并有增強淋巴細胞功能（曾已報道）的VitC還參與免疫球蛋白的二硫鍵的形成，從而促進免疫球蛋白的合成。有增加補體C1和干擾素的產生，以及增強NK細胞的活性，因此增強人體抗腫瘤的作用［6，7］。

營養免疫是當今熱門的研究課題之一。人體許多種疾病都涉及免疫系統，免疫系統有防御、監視、耐受和調節功能。各種營養素，是人體依存最為重要的環境因素，也是維持人體正常免疫功能和健康的物質基礎。各種維生素雖然人體每日需要量很少，它們常以輔酶或輔基的形式參與酶的功能，尤其是B族的維生素，因此它們在調節人體物質代謝過程中起著關鍵的作用。研究各種維生素對人體免疫系統的作用是營養免疫的重要任務。

【參考文獻】

1Mosmann,T.Repidcolorimetricassayforcellulargrowthandsurviralapplicationtoproliferationandcytotoxicityassays.JImmunolMeth，1983,65：55-63.

2陳哲生.噻唑藍比色法檢測細胞的活性.上海醫學檢驗雜志，1994，9（4）：205-206.

3陳哲生.噻唑藍比色法用來研究人類淋巴細胞和小鼠巨噬細胞細胞的活性.上海免疫學雜志,1992,12(5)：269-317.

4孫明潔.幾種水溶性維生素對小鼠淋巴細胞活性的作用.中華中西醫雜志,2005，21（6）：2805-2806.

5蔭士安，汪之瑣主譯.現代營養學.第八版.北京：化學工業出版社，2004，213-285.

6徐世俠，吳育云.補充維生素A和維生素C對營養缺乏所致免疫功能低下的影響.中國公共衛生,1998，14（12）：741-743.

7杜衛東,沈道明,黃春錦,等.大劑量維生素C對急性胰腺炎患者細胞免疫功能的影響.胃腸病學,2002,7(4)：213-215.