銀屑病中細胞凋亡相關基因bcl-2、Fas、ba的檢測

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摘要為了探討細胞凋亡相關基因bcl-2、Fas、bax在銀屑病發病中的意義，采用免疫組化ABC法、SABC法檢測了這幾種基因在15例銀屑病組織中的表達。結果發現銀屑病的角質形成細胞中抑凋亡基因bcl-2幾乎不表達，促凋亡基因Fas、bax陽性表達。提示促凋亡基因Fas、bax在銀屑病中發病起重要作用，而抑凋亡基因bcl-2作用可能不大。

關鍵詞銀屑病、bcl-2基因、Fas基因、bax基因。

銀屑病的發病機理尚不明確，角質形成細胞異常增生和角化不全是銀屑病的主要病理改變，以往對這方面的研究主要集中在免疫學和生化學方面。近年來銀屑病與細胞凋亡的關系逐漸受到越來越多學者的重視。國外有學者報道銀屑病表皮中角質形成細胞凋亡異常增多。抑凋亡基因bcl-2和促凋亡基因Fas、bax是現今研究較多、較重要的幾個細胞凋亡相關基因。為了探討這幾種基因在銀屑病發病中的意義，我們采用免疫組化方法檢測了銀屑病中細胞凋亡相關基因bcl-2、fas及bax。

1材料和方法

1．1標本來源：采用1994-1997年我院保存的石蠟包埋組織塊。尋常型銀屑病15例，其中男8例，女例；年齡11-68歲，平均年齡29.13歲；均為進行期銀屑病。6名正常人皮膚組織，皆取自皮膚外科行重瞼術、面部美容切除術者的皮膚，石蠟包埋作為對照組。測定前先將石蠟包埋組織塊作常規組織切片及HE染色，在光鏡下核對診斷，證實其病理診斷無誤方采用。

1．2試劑：鼠抗人bcl-2單克隆抗體購自Dako公司，生物素化羊抗鼠單克隆抗體系華美生物制品公司產品。兔抗人Fas多抗、兔抗人bax多抗及鏈酶親和素-生物素-過氧化酶復合物免疫組化試劑盒（簡稱SABC試劑盒）均購自武漢博士德生物工程公司。

1．3方法：載玻片用APES處理后干燥備用，切取4-5μm厚的石蠟切片，常規脫蠟水化。Bcl-2基因的檢測參照ABC法稍加改進，陽性對照為正常淋巴結，陰性對照為不加一抗。Fas、bax基因的檢測采用SABC法，陽性對照分別為武漢博士德生物工程公司提供的Fas、bax基因陽性對照片，陰性對照為不加一抗。

1．4判斷：顯微鏡下觀察，棕黃色為陽性結果。陽性強度判斷標準如下：強陽性（+++）指50%以上細胞陽性染色；中等強度陽性（++）指25%-50%細胞陽性染色；弱陽性（+）指25%以下細胞陽性染色；陰性（-）指細胞均無任何陽性染色。

2結果6例正常人皮膚組織中：bcl-2基因除部分基底細胞呈陽性反應外，余陰性。、Fas和bax基因為陰性表達。15例銀屑病組織中：bcl-2基因在15例表皮增生的角質形成細胞中均呈陰性表達，但14例部分基底細胞和浸潤的淋巴細胞呈陽性染色；Fas基因在12例銀屑病組織中呈陽性表達；bax基因在13例中呈陽性，陽性染色遍布表皮各層角質形成細胞中及真皮淺層浸潤的淋巴細胞上。在缺少一抗的對照反應中結果均為陰性，而作為陽性對照的正常淋巴結及Fas、bax基因陽性對照片則呈廣泛強陽性染色。

3討論bcl-2基因最早是1984年Tsujimoto等從濾泡性淋巴瘤中分離出來的一種癌基因，位于18q21位點的bcl-2基因移至免疫球蛋白重鏈基因14q32位點附近，造成bcl-2蛋白的異常表達。bcl-2基因可抑制許多因素引起的細胞凋亡，故稱為：“細胞凋亡抑制基因”。Fas抗原又稱Apo-1或CD95，Fas分子是個典型的Ⅰ型膜蛋白，屬腫瘤環死因子（TNF）/神經生長因子（NGF）受體家族中的一員。研究發現Fas單克隆抗體在體內體處與Fas結合后均能導致表達Fas的細胞發生凋亡，從而證明Fas是一種識別Fas配體，并將凋亡信息傳遞給細胞的細胞表面受體，故Fas基因又稱“凋亡基因”。Bax基因屬于bcl-2基因家族成員，其功能與bcl-2基因相反，為促凋亡基因，bax蛋白可與bcl-2蛋白形成異源二聚體，從而抑制bcl-2基因的抗凋亡作用。我們的實驗中正常的皮膚組織部分基底細胞bcl-2基因呈陽性反應，這與國外學者的報道相符合，有文獻報道這些陽性細胞為黑素細胞，正常表皮中黑素細胞與基底角質形成細胞的比例為1：30，提示黑素細胞死亡和再生的控制是非常嚴格的。黑素細胞bcl-2基因強陽性表達，這可能與保護它們避免受內外環境的影響如紫外線的照射，減少凋亡有很大關系。在銀屑病中除黑素細胞和浸潤的淋巴細胞為陽性外，表皮增生的角質形成細胞均為陰性，這提示bcl-2基因可能在銀屑病中所起的作用不大。目前認為在這類丘疹鱗屑性疾病中主要是bcl-X基因起作用。Wrone-Smith等及Foreman等發現銀bcl-X1基因在增生的角質形成細胞上呈強陽性表達，認為bcl-X1基因可能通過抑制表皮細胞上呈強陽性表達，認為bcl-X1基因可能通過抑制表皮細胞凋亡，從而延長細胞的存活期。而本實驗中銀屑病組織促凋亡基因Fas、bax均為廣泛性表達，這與國外學者的結論一致。因此，我們認為在銀屑病中促凋亡基因Fas、bax起重要作用，而抑凋亡基因bcl-2作用可能不大。“公務員之家有”版權所