逍遙軟膠囊質量控制分析論文

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1儀器與試藥

美國Waters公司2695型高效液相色譜儀，2996型紫外檢測器，empower工作站。Milli-Q純水器（密理博上海貿易有限公司）。硅膠G（青島海洋化工廠）。逍遙軟膠囊（自制）。柴胡等藥材購自哈爾濱市藥材公司，經黑龍江中醫藥大學生藥教研室鑒定為《中國藥典》正品。芍藥苷對照品、阿魏酸對照品、甘草酸單銨鹽對照品、柴胡皂苷a對照品、對照藥材（購自中國藥品生物制品檢定所）。甲醇、乙腈（色譜純）；水（超純水）；其余為分析純。

2方法與結果

2.1鑒別

2.1.1柴胡的薄層鑒別取逍遙軟膠囊適量，取出內容物，稱取10g于回流提取器內，加甲醇50ml回流提取30min，過濾，濾液揮干，加入2%氫氧化鈉水溶液15ml超聲溶解殘渣。用20ml水飽和正丁醇振搖萃取兩次，分取正丁醇層，蒸干，殘渣用甲醇溶解，定容至5ml，作為供試品溶液。另取柴胡皂苷a對照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。取對照藥材、缺柴胡陰性對照品，同法分別制成對照藥材、陰性對照溶液。取供試品溶液、對照品溶液、對照藥材、陰性對照液各5μl，點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿甲醇水（30∶12∶1）為展開劑展開，兩次展開后噴以對二甲氨基苯甲醛-95%乙醇-濃硫酸（1∶100∶10）溶液，105℃烘5min。供試品溶液、對照藥材與對照品溶液相應位置上顯相同顏色斑點，陰性對照液無此斑點，薄層色譜圖見圖1。

2.1.2白芍的薄層鑒別取逍遙軟膠囊適量，取出內容物，稱取10g，至回流提取器內，加甲醇50ml回流提取30min，過濾，濾液揮干，殘渣溶于15ml正丁醇液中，移入分液漏斗，加入20ml正丁醇飽和水振搖萃取2次，分取正丁醇層，蒸干，殘渣用甲醇溶解，定容至5ml，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。取對照藥材、缺白芍陰性對照品，同法分別制成對照藥材、陰性對照溶液。取供試品溶液、對照品溶液、對照藥材、陰性對照液各5μl，點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿甲醇醋酸乙酯（10∶5∶1）為展開劑，在氨蒸氣飽和下展開。取出晾干后噴以10%H2SO4乙醇液，100℃烘5min。供試品溶液、對照藥材與對照品溶液相應位置上顯相同顏色斑點，陰性對照液無此斑點，薄層色譜圖見圖2。

2.1.3當歸的薄層鑒別供試品處理方法同“2.1.2”項。另取阿魏酸對照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。取對照藥材、缺當歸陰性對照品，同法分別制成對照藥材、陰性對照溶液。取供試品溶液、對照品溶液、對照藥材、陰性對照液各5μl，點于同一硅膠G薄層板上，以乙醇丙酮氯仿冰醋酸（1∶4∶10∶1）為展開劑展開，取出晾干，噴以2%三氯化鐵的50%乙醇溶液-2%鐵氰化鉀的50%乙醇液（1∶1）進行顯色。供試品溶液與對照品溶液相應位置上顯相同顏色斑點，陰性對照液無此斑點，薄層色譜圖見圖3。

2.1.4甘草的薄層鑒別取逍遙軟膠囊適量，取出內容物，取5g于回流提取器內，加乙醚40ml回流提取30min，過濾，藥渣加甲醇30ml置水浴上加熱回流1h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40ml，使溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇萃取液，加入20ml正丁醇飽和水振搖萃取2次，分取正丁醇層，蒸干，殘渣用甲醇溶解，定容至5ml，作為供試品溶液。另取甘草酸單銨鹽對照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。取對照藥材、缺甘草陰性對照品，同法分別制成對照藥材、陰性對照溶液。取供試品溶液、對照品溶液、對照藥材、陰性對照液各5μl，點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿甲醇水（30∶12∶1）為展開劑展開，兩次展開后噴以對二甲氨基苯甲醛95%乙醇濃硫酸（1∶100∶10）溶液，105℃烘5min。供試品溶液、對照藥材與對照品溶液相應位置上顯相同顏色斑點，陰性對照液無此斑點，薄層色譜圖見圖4。

2.2含量測定

2.2.1色譜條件C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）（大連物理化學研究所），流速1ml·min-1，柱溫30℃，芍藥苷、阿魏酸的流動相均為甲醇水（1﹪HAC）(25∶75)，芍藥苷檢測波長232nm，阿魏酸檢測波長323nm。

2.2.2標準曲線考察精密稱取芍藥苷對照品6.8mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度。分別用微量移液管精密移取150，400，600，800，1000μl的對照溶液，置2ml量瓶中，定容。精密稱取阿魏酸對照品5.2mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度。分別用微量移液管精密移取阿魏酸對照品溶液400，800，1200，1600，2000μl置2ml容量瓶，定容，備用。HPLC進樣10μl，按含量測定方法測定峰面積，并以峰面積的積分值為縱坐標，對照品進樣量為橫坐標建立標準曲線，計算回歸方程，芍藥苷回歸方程為：Y=2.37×106X-6.08×104（r=0.9999），在51～340μg·ml-1范圍內呈良好的線性關系。阿魏酸回歸方程為：Y=1.01×107X-7.1×104（r=0.9999），在41.6～208μg·ml-1范圍內呈良好的線性關系。

2.2.3樣品的含量測定取本品10粒，剪開，傾出內容物，加入甲醇50ml超聲3h后取續濾液10ml，經0.45μm濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。分別精密注入芍藥苷對照品溶液、阿魏酸對照品溶液、供試品溶液各10μl，進行HPLC測定。結果表明：供試品芍藥苷峰、阿魏酸峰與對照品峰保持一致，且與其他組分可以很好地分離。用外標法計算芍藥苷、阿魏酸的含量，色譜圖見圖5～8。表1指標成分標準曲線方程（略）

2.2.4精密度及重現性實驗精密度實驗：精密吸取對照品溶液10μl，連續進樣5次，測定峰面積積分值，結果芍藥苷、阿魏酸RSD值分別為1.41%，1.37%。重現性實驗：取樣品，按測定法進行5次測定，結果芍藥苷、阿魏酸RSD值分別為1.01%，1.33%。

2.2.5回收率實驗取供試品適量，精密稱定，定量加入芍藥苷、阿魏酸對照品溶液，按樣品測定項下，測定峰面積，計算回收率。結果芍藥苷的平均回收率為98.2%，RSD=1.41%(n=6)。阿魏酸的平均回收率為100.5%，RSD=1.37%(n=6)。

2.2.6樣品測定用本實驗測定方法對3批逍遙軟膠囊進行測定，結果見表2。表2樣品含量測定結果（略）

3討論

逍遙丸中白芍的TLC鑒別，一般采用中性氧化鋁柱或聚酰胺柱處理［3］，研究中發現不經此步驟處理也可以排除干擾。

關于逍遙軟膠囊制劑質量控制的研究較多，然而通常只是對白芍、當歸、甘草定性的較多［4,5］，本實驗同時研究了柴胡的定性分析條件，并同時對芍藥苷、阿魏酸定量分析，能更好地控制制劑質量。

【參考文獻】

［1］劉劼.逍遙散治黃褐斑體會［J］.江西中醫藥，2000，31（3）：61.

［2］王小花.逍遙散在婦科臨床中的應用［J］.河南中醫藥學刊，2001，16（3）：57.

［3］張蘭珍，王曉強，陳丹，等.人參、黃連、白芍在中成藥中質量控制方法的研究［J］.中成藥，1999，21(3):121.

［4］干國平，張蓮萍，李秋怡，等.逍遙丸(濃縮丸)質量標準的研究［J］.時珍國醫國藥，2006，17（8）：1493.

［5］陳洪燕，萬明，廖蔚珍，等.逍遙丸質量控制的研究［J］.中國醫院藥學雜志，2006，26（6）：743.

【摘要】目的建立逍遙軟膠囊的質量標準。方法采用薄層色譜(TLC)法定性鑒別柴胡、白芍、當歸、甘草；采用高效液相色譜(HPLC)法測定芍藥苷、阿魏酸的含量。結果在TLC色譜中均能檢出柴胡、白芍、當歸、甘草；芍藥苷在51～340μg·ml-1的范圍內呈良好的線性關系，r=0.9999，平均回收率為98.2%,RSD=1.41%(n=6)。阿魏酸在41.6～208μg·ml-1的范圍內呈良好的線性關系，r=0.9999，平均回收率為100.5%，RSD=1.37%(n=6)。結論該法簡便準確，可作為該制劑質量控制標準。

【關鍵詞】逍遙軟膠囊芍藥苷阿魏酸高效液相色譜法