牡丹皮乙醇提取工藝研究論文
時間：2022-11-30 02:59:00
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【摘要】目的：探討牡丹皮提取工藝的最佳條件。方法：采用正交實驗法，以芍藥苷含量為指標，用高效液相法測定。結果：提取次數和乙醇濃度對提取效果有非常顯著性和顯著性影響。結論：最佳工藝條件為5倍量75%的乙醇提取3次，每次1h。
【關鍵詞】牡丹皮；正交設計；提取工藝；芍藥苷；高效液相色譜法
牡丹皮為毛茛科植物牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr.)的干燥根皮，具有清熱涼血，活血化瘀的功效。牡丹根皮中含芍藥苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、丹皮酚、丹皮酚苷、丹皮酚原苷和丹皮酚新苷等成分。藥理實驗表明，芍藥苷體內、體外均能抑制ADP或膠原誘導的血小板聚集［1］，應屬牡丹皮抗缺血性中風的主要有效成分之一。本文采用正交實驗法，以HPLC法測定的芍藥苷的提取量為指標，對牡丹皮乙醇提取工藝進行優選，為牡丹皮的開發應用提供了實驗依據。
1儀器和試藥
高效液相色譜儀：日本島津10Avp高效液相色譜儀(LC10Atvp雙泵，SPDM10Avp二極管陣列檢測器，SIL10Advp自動進樣器，CTO10Avp柱溫箱);HypersilODS填料色譜柱(ID4.6×250mm)(大連依利特化學儀器有限公司);分析天平：LIBRORL16ODTP分析天平(日本島津)、AE240分析天平(瑞士METTLER);芍藥苷對照品(07369710)：中國藥品生物制品檢定所(為含量測定用)。牡丹皮藥材(購自四川省電江藥材基地，經鑒定為牡丹皮正品)，所用乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。
2提取工藝研究
2.1方法本文采用乙醇加熱回流法對牡丹皮進行提取，選擇回流次數、乙醇濃度、回流時間和乙醇用量等4個主要影響因素，每個因素選取3個水平。選用L9(34)正交實驗法進行實驗，選定的因素水平表見表1。
表1因素水平表（略）
2.1.1色譜條件經試驗，確定流動相為乙腈水(20：80)，流速1ml/min，柱溫40℃，測定波長為230nm進樣量4μl。
2.1.2對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品2.40mg，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含芍藥苷96μg)。
2.2供試樣品溶液的制備精密稱取9份牡丹皮藥材粗粉50g，按L9(34)表各試驗號規定方法進行實驗，提取液分別濃縮并轉移至100ml容量瓶，用適量乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置，即得樣品溶液。精密吸取上述樣品溶液各1ml，分別置25ml容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得供試樣品溶液。
2.3供試樣品溶液測定及結果精密吸取供試樣品溶液與對照品溶液各4μl，注入液相色譜儀，測定，計算出供試樣品溶液中芍藥苷的濃度，結果見表2；方差分析見表3。
表2正交試驗設計及結果（略）
由以上結果可知，牡丹皮乙醇提取的最佳工藝條件確定為A3B2C1D1，即5倍量75%乙醇提取3次，每次1h。
表3方差分析（略）
3小結
3.1芍藥苷為牡丹皮中主要活性成分之一，其含量測定方法較多，如毛細管區帶電泳法［2］，薄層掃描法［3］，高效液相色譜法［4-5］等。筆者采用HPLC法進行實驗，并進行了相應的方法學試驗。結果表明本法各方面符合中華人民共和國藥典(2005版)和中藥新藥研制的有關規定。在試驗中，根據牡丹皮含量測定結果，制定了牡丹皮中芍藥苷的含量限度，為控制實驗用牡丹皮藥材的質量提供了依據。本文所選含量測定方法操作簡單，結果準確，重現性好。
3.2關于芍藥苷含量測定方法中流動相的選擇，曾選用乙腈水(10：90、20：80、30：70)和甲醇水(20：80、30：70、40：60)等依次進行實驗，結果顯示乙腈水(20：80)作流動相時，牡丹皮供試品色譜中芍藥苷與雜質峰可達基線分離，峰形對稱，且保留時間適宜，故采用乙腈水(20：80)作為流動相。
3.3有文獻記載以水提醇沉法提取丹皮中芍藥苷［6］，但考慮到芍藥苷醇溶性優于水溶性，在前期實驗中經比較，水提醇沉提取物中芍藥苷得率低于乙醇提取物，且其操作較繁，故本文直接采用乙醇提取法，正交實驗得出最佳提取工藝條件為乙醇濃度75%，乙醇用量為藥材量的5倍，加熱回流時間為1h，回流次數為3次。
致謝；河南省駐馬店市藥品檢驗所
【參考文獻】
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［6］趙新峰，王偉，孫毓慶.毛細管區帶電泳法測定牡丹皮中芍藥苷的含量［J］.中草藥，2003，34(3):271-272.