關龍膽的保肝作用研究論文

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1材料

1.1動物昆明種小鼠，體重（20.0±2.0）g，雌雄各半，哈爾濱市獸醫研究所，動物質量合格證號：黑XCXK20020001。

1.2試劑四氯化碳（CCl4），哈爾濱市新達化工廠產品（分析純），批號000718；硫代乙酰胺（TAA），天津市科密歐化學試劑開發中心（分析純），批號20040102；D-半乳糖胺（GlanN）：北京化工廠，批號870522；聯苯雙酯，德州德藥制藥有限公司，批號040410；甲醇，天津市科密歐化學試劑開發中心（分析純），批號20011222；谷丙轉氨酶（ALT）試劑盒、谷草轉氨酶（AST）試劑盒、堿性磷酸酶（AKP）試劑盒，南京建成生物工程研究所,批號20040915。

1.3藥材關龍膽，采自哈爾濱市蔣化龍膽種植基地，經哈爾濱商業大學中藥鑒定教研室沈志濱副教授鑒定為關龍膽。

2方法

取關龍膽根浸膏0.90g，加蒸餾水配成0.015g/ml溶液備用。給小鼠按20ml/kg灌胃給藥（相當于生藥5g/kg給藥）。分別取關龍膽地上部分浸膏30.4，15.2，7.6g加蒸餾水配成0.5，0.25，0.125g/ml溶液備用。給小鼠按20ml/kg灌胃給藥（分別相當于生藥25，50，75g/kg給藥）。

2.1龍膽地上部分對氨基半乳糖（GlanN）急性肝損傷的保護作用取（20±2）g健康小鼠，雌雄各半，隨機分成正常組、模型組、關龍膽根組、不同劑量關龍膽地上部分組、聯苯雙酯組。除正常組、模型組小鼠每日灌胃生理鹽水20ml/kg外，其它各組均按20ml/kg給藥，1次/d，連續4d。于末次給藥或生理鹽水后0.5h，除正常組小鼠ip生理鹽水20ml/kg外，其余6組小鼠分別按120mg/kg腹腔注射10%GlaN,18h后，眼眶取血，3000r/min離心10min，取血清測ALT，AST，AKP。

2.2龍膽地上部分對硫代乙酰胺（TAA）急性肝損傷的保護作用?。?0±2）g健康小鼠，雌雄各半，隨機分成正常組、模型組、關龍膽根組、不同劑量關龍膽地上部分組、聯苯雙酯組。除正常組、模型組小鼠每日灌胃生理鹽水20ml/kg外，其它各組均按20ml/kg給藥，1次/d，連續4d。于末次給藥或生理鹽水后30min，除正常組小鼠腹腔注射生理鹽水20ml/kg外，其余6組小鼠分別按50mg/kg腹腔注射TAA,18h后，眼眶取血，3000r/min離心10min，取血清測ALT，AST，AKP。

2.3龍膽地上部分對CCl4急性肝損傷的保護作用?。?0±2）g健康小鼠，雌雄各半，隨機分成正常組、模型組、關龍膽根組、不同劑量關龍膽地上部分組、聯苯雙酯組。除正常組、模型組小鼠每日灌胃生理鹽水20ml/kg外，其它各組均按20ml/kg給藥，1次/d，連續4d。于末次給藥或生理鹽水后30min，除正常組小鼠腹腔注射生理鹽水20ml/kg外，其余6組小鼠分別腹腔注射0.15%CCl410ml/kg。18h后，眼眶取血，3000r/min離心10min，取血清測ALT，AST，AKP。

3結果

3.1龍膽地上部分對小鼠氨基半乳糖(GlanN)急性肝損傷的保護作用血清生化測定結果表明，GlanN肝損傷組（模型組）小鼠血清轉氨酶ALT，AST和A均明顯升高，說明造模成功。龍膽地上部分總提物高、中、低劑量組，龍膽根總提物組與模型組比較雖然可以在一定程度上降低ALT，AST，AKP水平，但經過數理統計分析，并沒有顯著性差異。說明龍膽全草對GlaN所致的急性肝損傷無明顯保護作用。結果見表1。表1龍膽地上部分總提物對GlanN肝損傷小鼠血清ALT，AST，AKP水平的影響(略)

3.2龍膽地上部分對小鼠TAA急性肝損傷的保護作用血清生化測定結果表明，TAA肝損傷組（模型組）小鼠血清轉氨酶ALT，AST，AKP均明顯升高，說明造模成功。龍膽地上部分總提物高，中，低劑量組、龍膽根組與陽性對照藥聯苯雙酯均可對抗血清ALT，AST、AKP的升高，總提物高、中、低劑量組與模型組對照有顯著性差別(P<0.05),與龍膽根組比較無顯著性差異（P>0.05）。見表2。表2龍膽地上部分總提物對TAA肝損傷小鼠血清ALT，AST，AKP水平的影響(略)

3.3龍膽地上部分對小鼠CCl4急性肝損傷的保護作用血清生化測定結果表明，CCl4肝損傷組（模型組）小鼠血清中轉氨酶ALT，AST和堿性磷酸酶AKP均明顯升高，說明造模成功。龍膽地上部分總提物高、中、低劑量組、龍膽根總提物組與陽性對照藥聯苯雙酯均可對抗血清ALT，AST，AKP的升高，地上部分總提物高、中、低劑量組與模型組對照有顯著性差別(P<0.05)。與龍膽根組比較無顯著性差異（P>0.05）。結果見表3。表3龍膽地上部分總提物對CCl4肝損傷小鼠血清ALT，AST，AKP水平的影響(略)

4討論

我們采用昆明種小鼠，設計3個實驗，發現關龍膽地上部分有一定的保肝作用，可降低各種肝損傷模型的ALT，AST，AKP等。CCl4，TAA，GlanN都是引起肝損傷的傳統肝損傷模型，關龍膽地上部分可使CCl4引起的肝損傷轉氨酶下降，和龍膽根及根莖作用一致，提示龍膽地上部分具有抗氧化作用和細胞保護作用。TAA干擾RNA從細胞核到細胞質的轉運過程，影響蛋白質的合成。龍膽地上部分能降低TAA對肝臟的侵害作用，和龍膽根及根莖作用一致，提示龍膽地上部分可以保護肝細胞膜，不至于使細胞的離子環境破壞，導致肝細胞壞死。關龍膽地上部分對GlanN無明顯保護作用，與龍膽根及根莖作用一致。

通過實驗發現，關龍膽地上部分和龍膽地下部分的給藥量與其含有的龍膽苦苷量有一定的相關性。當關龍膽地上部分以5～10倍地下部分藥量給藥時，兩者呈現一致的藥效，但當繼續增加地上部分的藥量時，無明顯改變，且小鼠體重減輕，可能是由于地上部分葉綠素等的影響，使小鼠食欲降低。

實驗研究證實三花龍膽和其它龍膽地上部分也含有一定量的龍膽苦苷和當藥苦苷［6］，我們下一步將對三花龍膽和其它龍膽地上部分的保肝作用進行研究。

【參考文獻】

［1］國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學工業出版社，2000：72.

［2］薛惠娟，趙偉康.龍膽草對甲亢大鼠肝勻漿類固醇還原酶活性的影響［J］.中國中西醫結合雜志，1992，12（4）：230.

［3］仲來福.四氯化碳致大鼠肝損傷的機理［J］.中國藥理學和毒理學雜志，1989，3（4）：298.

［4］王國英，黃翠軒，蔣家雄，等.龍膽苦苷對大鼠肝細胞實驗性保護作用的病理觀察［J］.云南醫藥，1993，14（4）：242.

［5］徐叔云，卞如濂，陳修，等.藥理實驗方法學，第3版［M］.北京：人民衛生出版社，2001：1346.

［6］張建生,田子新,樓之岑.九種龍膽中五種裂環烯醚萜苷類苦味成分的高效液相色譜定量分析［J］.藥學學報,1991,26(11)：864.

【摘要】目的通過不同毒物引起的肝損傷來研究關龍膽地上部分的保肝作用。方法選用D半乳糖胺、硫代乙酰胺、四氯化碳等3個肝損傷毒物造肝損傷模型，通過不同機制引起的肝損傷來研究關龍膽地上部分的保肝作用。結果關龍膽地上部分有一定的保肝作用，可降低各種肝損傷模型的ALT，AST，AKP等。結論關龍膽地上部分也有一定的藥用價值，用全草取代地下部分入藥有一定的可行性。

【關鍵詞】關龍膽保肝作用谷丙轉氨酶谷草轉氨酶堿性磷酸酶