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土霉素片微生物驗(yàn)證論文

【論文關(guān)鍵詞】土霉素片;微生物限度檢查法

【論文摘要】目的:建立土霉素片的微生物限度檢查方法。方法:采用薄膜過濾法對(duì)土霉素片處理后,分別進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證。結(jié)果:金黃色葡萄球菌和白色念珠菌的回收率均大于70%。結(jié)論:土霉素片采用薄膜過濾法檢查微生物限度方法成立。

TerramycinpiecemicroorganisminspectionmethodconfirmationWangYanningGuoLingbo

【Abstract】Objective:Establishmentterramycinpiecemicroorganismlimitinspectionmethod.Method:Usesthethinfilmtofilterthelawafterterramycinpieceprocessing,separatelycarriesonthebacterium,themoldandthesaccharomycetescountsthemethodconfirmation.Result:Thegoldenyellowstaphylococcusandthewhiterosaryfungusreturns-ratioisbiggerthan70%.Conclusion:Theterramycinpieceusesthethinfilmtofilterthelawinspectionmicroorganismlimitmethodtobetenable.

【Keywords】Terramycinpiece;Microorganismlimitinspectionmethod

土霉素是四環(huán)素類抗生素,能特異性地與細(xì)菌核糖體30S亞基的A位結(jié)合,抑制肽鏈的增長(zhǎng)和影響細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成,對(duì)細(xì)菌有廣譜抑菌作用。因此其微生物限度檢查不能用平皿法,而應(yīng)采用薄膜過濾法消除其抑菌作用后再檢查。

1材料

1.1儀器:HWS-250型恒溫恒濕箱(天津蘇瑞科技開發(fā)有限公司),集菌儀(杭州泰林生物技術(shù)設(shè)備有限公司),薄膜(孔徑0.22um),康氏振蕩器。

1.2試劑:玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基,營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基,MUG培養(yǎng)基,甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基等,均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。

1.3菌種:陽(yáng)性對(duì)照菌:金黃色葡萄球菌(驗(yàn)證細(xì)菌)、白色念珠菌(驗(yàn)證酵母菌、霉菌);陰性對(duì)照:金黃色葡萄球菌(驗(yàn)證大腸埃希菌)。所用菌種均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;稀釋劑及沖洗劑為pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液。

1.4樣品:土霉素片[0.25g(25萬單位)],廠家為河南華利藥業(yè)有限責(zé)任公司,批號(hào)為07070601。

2方法與結(jié)果

2.1細(xì)菌、霉菌、酵母菌檢查方法驗(yàn)證。

2.1.1細(xì)菌檢測(cè)方法驗(yàn)證。

2.1.1.1試驗(yàn)組:取供試品10g,加入pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液,于康氏振蕩器上振搖10分鐘,使片分散,500轉(zhuǎn)、分離心后,分離上清液作為供試液。取上述供試液10ml,加入100ml稀釋劑中,薄膜過濾,用沖洗液沖洗2次,每次100ml,第3次沖洗液中加入金黃色葡萄球菌菌懸液0.5ml,薄膜過濾,取出濾膜,面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿上,35℃培養(yǎng)48小時(shí),計(jì)數(shù)。

2.1.1.2菌液組:取金黃色葡萄球菌菌懸液0.5ml,直接接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿上,35℃培養(yǎng)48小時(shí),計(jì)數(shù)。

2.1.1.3供試品對(duì)照組:取上述供試液10ml,加入100ml稀釋劑中,薄膜過濾,用沖洗液沖洗3次,每次100ml,取出濾膜,面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿上,35℃培養(yǎng)48小時(shí),計(jì)數(shù)。

2.1.1.4稀釋劑對(duì)照組:取稀釋液10ml,薄膜過濾,用沖洗液沖洗2次,每次100ml,第3次沖洗液中加入0.5ml金黃色葡萄球菌菌懸液,薄膜過濾,取出濾膜,菌面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿上,35℃培養(yǎng)48小時(shí),計(jì)數(shù)。

2.1.1.5上述試驗(yàn)連續(xù)做三次,結(jié)果如下:

金黃色葡萄球菌計(jì)數(shù)后平均值:

稀釋劑對(duì)照組菌數(shù):第一次47個(gè),第二次53個(gè),第三次49個(gè);

菌液組菌數(shù):第一次58個(gè),第二次64個(gè),第三次60個(gè);

試驗(yàn)組菌數(shù):第一次45個(gè),第二次54個(gè),第三次46個(gè);

供試品對(duì)照組菌數(shù):第一次0個(gè),第二次0個(gè),第三次0個(gè)。

2.1.1.6計(jì)算金黃色葡萄球菌回收率。

2.1.1.6.1稀釋劑對(duì)照組的回收率:(稀釋劑對(duì)照組的平均菌落數(shù)/菌液組的平均菌落數(shù))×100%

第一次:47/58×100%=81.0%

第二次:53/64×100%=82.8%

第三次:49/60×100%=81.7%

2.1.1.6.2試驗(yàn)組的回收率:

[(試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組平均菌落數(shù))/菌液組平均菌落數(shù)]×100%

第一次:(45-0)/58×100%=77.6%

第二次:(54-0)/64×100%=84.4%

第三次:(46-0)/60×100%=76.7%

2.1.2霉菌、酵母菌檢查方法驗(yàn)證。

2.1.2.1試驗(yàn)組:取供試品10g,加入pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液,于康氏振蕩器上振搖10分鐘,使片分散,500轉(zhuǎn)、分離心后,分離上清液作為供試液。取上述供試液10ml,加入100ml稀釋劑中,薄膜過濾,用沖洗液沖洗2次,每次100ml,第3次沖洗液中加入白色念珠菌菌懸液0.5ml,薄膜過濾,取出濾膜,面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿上,23℃培養(yǎng)72小時(shí),計(jì)數(shù)。

2.1.2.2菌液組:取白色念珠菌菌懸液0.5ml,直接接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿上,23℃培養(yǎng)72小時(shí),計(jì)數(shù)。

2.1.2.3供試品對(duì)照組:取上述供試液10ml,加入100ml稀釋劑中,薄膜過濾,用沖洗液沖洗3次,每次100ml,取出濾膜,面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿上,23℃培養(yǎng)72小時(shí),計(jì)數(shù)。

2.1.2.4稀釋劑對(duì)照組:取稀釋液10ml,薄膜過濾,用沖洗液沖洗2次,每次100ml,第三次沖洗液中加入0.5ml白色念珠菌菌懸液,薄膜過濾,取出濾膜,菌面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿上,23℃培養(yǎng)72小時(shí),計(jì)數(shù)。

2.1.2.5上述試驗(yàn)連續(xù)做三次,結(jié)果如下:

白色念珠菌計(jì)數(shù)后平均值:

稀釋劑對(duì)照組菌數(shù):第一次56個(gè),第二次60個(gè),第三次53個(gè);

菌液組菌數(shù):第一次45個(gè),第二次47個(gè),第三次42個(gè);

試驗(yàn)組菌數(shù):第一次43個(gè),第二次45個(gè),第三次44個(gè);

供試品對(duì)照組菌數(shù):第一次0個(gè),第二次0個(gè),第三次0個(gè)。

2.1.2.6計(jì)算白色念珠菌的回收率。

2.1.2.6.1稀釋劑對(duì)照組的回收率:

(稀釋劑對(duì)照組的平均菌落數(shù)/菌液組的平均菌落數(shù))×100%

第一次:45/56×100%=80.4%

第二次:47/60×100%=78.3%

第三次:42/53×100%=78.2%

2.1.2.6.2試驗(yàn)組的回收率:

[(試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組平均菌落數(shù))/菌液組平均菌落數(shù)]×100%

第一次:(43-0)/56×100%=76.8%

第二次:(45-0)/60×100%=75.0%

第三次:(44-0)/53×100%=83.0%

2.2大腸埃希菌檢測(cè)方法驗(yàn)證。

2.2.1試驗(yàn)組:取供試品10g,加入pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液,于康氏振蕩器上振搖10分鐘,使片分散,500轉(zhuǎn)/分離心后,分離上清液作為供試液。取上述供試液10ml,加入100ml稀釋劑中,薄膜過濾,用沖洗液沖洗2次,每次100ml,第三次沖洗液中加入大腸埃希菌菌懸液0.2ml,薄膜過濾,取出濾膜,放入100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中,35℃培養(yǎng)24小時(shí),取0.2ml上述培養(yǎng)物加入5mlMUG培養(yǎng)基中,24小時(shí)后,加靛基質(zhì)試液5滴,液面呈現(xiàn)玫瑰紅環(huán)。

2.2.2陰性菌對(duì)照組:照上述方法操作,第三次沖洗時(shí)沖洗液中加入2ml金黃色葡萄球菌菌液,薄膜過濾,取出濾膜加入100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中,于35℃培養(yǎng)24小時(shí),再取上述培養(yǎng)物劃線接種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基的平板上,于35℃培養(yǎng)24小時(shí),未發(fā)現(xiàn)有金黃色葡萄球菌典型菌落。

3討論

3.1在細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證三次平行試驗(yàn)中,稀釋劑對(duì)照菌回收率均不低于70%,試驗(yàn)組的菌回收率均不低于70%,照薄膜過濾法可進(jìn)行土霉素片的細(xì)菌、霉菌及酵母菌的檢查。

3.2通過大腸埃希菌檢測(cè)方法驗(yàn)證,陰性對(duì)照組未檢出金黃色葡萄球菌,試驗(yàn)組檢出大腸埃希菌,按薄膜過濾法可進(jìn)行土霉素片的大腸埃希菌檢查。