辣木葉中多糖含量分析論文

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【摘要】目的測定辣木葉中多糖的含量。方法采用精制辣木葉多糖測得辣木葉多糖對葡萄糖的換算因子后，采用蒽酮-硫酸比色法測定，測定波長為620nm。結果韶關新豐引種栽培辣木中多糖含量為4.85%,供試液在4h內顯色穩定,平均回收率為98.72%,RSD＝1.88%(n=4)。結論此測定方法簡便可行,可作為辣木葉中多糖的含量測定方法。

【關鍵詞】辣木葉；多糖；蒽酮硫酸法

Abstract：ObjectiveTodeterminethecontentsofpolysaccharideinleavesofMoringaoleifera.MethodsAftertheconversioncoefficientofMoringaoleiferapolysaccharidestoglucosewasobtained,contentsweredeterminedbyanthrone-H2SO4colorimetry.Wavelengthformeasurementwas620nm.ResultsThecontentsofPolysaccharideinleavesofMoringaoleiferaplantedinShaoguanCountyofGuangdongProvincewas4.85%,thecolorofthetreatedsamplewasstablein4handaveragevalueoftherecoveryforPolysaccharidemeasurementwas98.72%with1.88%ofRSD(n=4).ConclusionThemethodusedinthispaperissimple.ItcanbeusedfordeterminationofthepolysaccharideinleavesofMoringaoleifera.

Keywords：LeavesofMoringaoleifera；Polysaccharides;Anthrone-sulfuricacidmethod

辣木Moringaoleifera為辣木科辣木屬植物，原產于印度北部喜馬拉雅區域［1］，全株均可利用，葉、花、豆莢富含蛋白質、維生素A、維生素B6、維生素C、維生素E、葉酸、泛酸及鈣、鉀、鐵等營養成分，不僅是發達國家素食者的理想食物，還是貧窮地區婦女和兒童的天然營養庫。印度傳統醫學認為，辣木葉有護肝、利尿、消炎、止痛、降壓、強心、催乳等功效。常用來預防和治療糖尿病、高血壓病、皮膚病、免疫力弱、貧血、壞血病、肥胖癥、關節炎、消化器官腫瘤等疾病［2］。

植物多糖是由許多相同或不同的單糖以α或β糖苷鍵所組成的化合物,普遍存在于自然界植物體中,大量研究表明多糖除了有調節免疫功能、抗腫瘤的生物學效應外,還具有降血糖、降血脂和降膽固醇等生理功能。近年來，辣木在我國廣東、云南和海南等都有引種栽培，其活性成分研究和產品的開發成為熱點。本文用精制辣木葉多糖測得辣木葉多糖對葡萄糖的換算因子，然后將經90%乙醇處理脫雜后的辣木葉用水提取多糖，蒽酮－硫酸法比色測定，該法準確性好、簡便可行。為辣木的合理開發和利用提供了科學依據。

1材料

1.1原料辣木葉采自韶關市新豐縣東林農業開發有限公司種植場。50℃干燥后，粉碎，過40目篩，備用。

1.2試劑蒽酮、濃硫酸、無水乙醇、丙酮等均為國產分析純；葡萄糖對照品為分析純；AB-8型大孔樹脂購于天津南開大學。

1.3儀器HH-W420數顯三用恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）；R201旋轉蒸發器（上海申生科技有限公司）；SHZ－3循環水真空泵（上海華光儀器儀表廠）；3K18超速冷凍離心機（美國Sigma公司）；Ultrospec2000紫外/可見分光光度計（AmershamPharmaciaBiotech公司）。

2方法

2.1辣木葉多糖的提取與精制稱取辣木葉粉60g，分別加20，15，10倍蒸餾水(w/w)于80℃水浴上提取3次，1.5h/次，過濾，合并濾液，離心分離（4000r/min，4℃，10min），上清液濃縮至一定體積后，Sevage法除蛋白，反復進行8次至無蛋白層，采用H2O2氧化法去色素。然后逆流水透析48h，蒸餾水透析24h，透析液濃縮，上AB-8型大孔吸附樹脂柱，以蒸餾水洗脫，洗脫至洗脫液加入95%乙醇無沉淀為止。將洗脫液濃縮至小體積后加入無水乙醇使含醇量達到80%，于4℃冰箱中過夜醇沉，再離心分離（4000r/min，4℃，10min），沉淀依次用無水乙醇、丙酮反復洗滌多次，50℃低溫干燥至恒重，即得精制辣木葉多糖。稱重，計算得率，備用。

2.2標準曲線的繪制［3］

2.2.1標準溶液的配制精密稱取干燥至恒重的葡萄糖0.1000g，以蒸餾水定容至100ml的容量瓶中，搖勻，精密吸取該溶液10ml于100ml容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻，即得葡萄糖標準液，濃度為0.1mg/ml。分別精密吸取儲備液1，2，3，4，5ml置10ml容量瓶中，以蒸餾水稀釋定容搖勻，得系列對照品溶液。

2.2.2蒽酮-硫酸試液的配制取0.2g蒽酮，加100ml濃硫酸，置于棕色瓶中，混合搖勻置于冰箱中（現配現用）。

2.2.3標準曲線的繪制精密吸取上述系列對照品溶液1ml，置于10ml具塞試管中，冰水浴5min，加入0.2%硫酸蒽酮試液4ml搖勻，立即置于沸水浴加熱10min，取出用冷水冷卻至室溫，室溫放置10min左右，于620nm處測定吸收度，另精密吸取蒸餾水1ml，同法操作，作為空白對照。以吸光度（A）為縱坐標，葡萄糖對照品濃度（C）為橫坐標，得葡萄糖標準曲線(見圖1)，線性回歸得回歸方程A=5.8114C+0.0024，相關系數r=0.9990。

圖1葡萄糖標準曲線（略）

2.3換算因子的測定精密稱取干燥至恒重的精制辣木葉多糖0.0100g,用水溶解于100ml容量瓶中,用蒸餾水稀釋至刻度,搖勻得精制辣木葉多糖貯備液，精密吸取精制多糖貯備液1ml,蒽酮-硫酸法測定其吸光度（A），從回歸方程求出精制辣木葉多糖貯備液中葡萄糖濃度,按下式計算換算因子。

換算因子f=W/（C·D）

式中：W為稱取多糖的重量(mg),C為精制辣木葉多糖貯備液中葡萄糖濃度（mg/ml）,D為多糖的稀釋倍數。

2.4樣品中辣木葉多糖的含量測定

2.4.1樣品溶液的制備準確稱取40目辣木葉粉末1.000g，置索氏提取器中，加入90%乙醇回流提取7h,藥渣揮盡乙醇，連同濾紙于燒瓶中，加蒸餾水250ml,80℃水浴加熱提取1.5h，趁熱過濾，殘渣用80℃熱蒸餾水洗滌3次，洗液并入濾液中，冷卻后移入500ml容量瓶定容。

2.4.2樣品溶液中辣木葉多糖含量測定精密吸取2.4.1所得樣品溶液1ml，用蒽酮-硫酸法測吸光度（A）。由回歸方程計算供試液中葡萄糖濃度（C），按下式計算樣品中辣木葉多糖含量。

辣木葉多糖含量（%）=C×D×fW×1000×100%

式中：C為樣品溶液中葡萄糖濃度(mg/ml),D為樣品溶液的稀釋倍數，f為換算因子,W為供試辣木葉的重量(g)。

2.5穩定性實驗精密吸取按2.4.1項下方法制備的樣品溶液1ml，按照2.2.3項下的方法測定吸光度（A），每隔1h測定1次，連續4h考察其穩定性。

2.6加樣回收率測定精密吸取同批4份已知含量的辣木葉粉末（過40目篩）各1g，精密加入精制多糖樣品5mg，然后按2.4.1項樣品液的制備和2.2.3標準曲線項下方法測定吸收度（A），根據2.4.2項中得出的結果辣木葉中多糖的含量為4.85%，計算回收率。

3結果

3.1精制辣木葉多糖的得率60g干燥的辣木葉粉末制得精制辣木葉多糖（1.505±0.088）g，得率為（2.508±0.147）%（n＝4）。

3.2換算因子f=3.13。

3.3辣木葉多糖含量的測定結果測得該辣木葉樣品中多糖含量為4.85%。

3.4穩定性實驗測定結果見表1。結果表明樣品溶液在4h內顯色基本穩定，其吸光度相對標準偏差RSD=4.31%。

3.5加樣回收率結果見表2。

4討論

蒽酮硫酸法是測定多糖含量的經典方法，本實驗首先用90%乙醇回流以除去單糖、低聚糖、生物堿、苷類及其它醇溶性的干擾成分，再用水提取多糖成分。蒽酮－硫酸法測定辣木葉多糖的原理是辣木葉多糖在濃硫酸的作用下，先水解為單糖，迅速脫水形成糠醛衍生物，其與蒽酮縮合為藍色化合物，該化合物顏色深淺與糖的濃度成正比。在620nm處有特征吸收。本法簡單，且供試液在4h內顯色穩定,靈敏度高。

表1辣木葉多糖含量測定穩定性實驗結果（略）

表2加樣回收率測定結果（略）

在多糖含量測定中，得到相應多糖對照品較困難，因多糖組成比較復雜，往往采用單糖如葡萄糖代替對照品，測定樣品多糖的相對含量。本實驗中采用Sevage法除蛋白，H2O2氧化法去色素，利用AB8型大孔吸附樹脂柱對多糖進行純化，獲得比較純凈的多糖。然后用精制多糖計算葡萄糖與辣木葉多糖的換算因子，這樣可避免用葡萄糖做標準引起的系統誤差，結果準確真實。

研究結果表明，韶關新豐引種栽培的辣木中多糖含量為4.85%。張濤等［5］采用苯酚－硫酸分光光度法測定辣木中多糖含量為15.36%，其測定結果與本研究有較大差異，原因可能與測定方法、辣木產地、辣木葉采集時間、采集部位等因素有關。

【參考文獻】

［1］劉昌芬，李國華.辣木的研究現狀及其開發前景［J］.云南熱作物科技，2002，25（3）：20.

［2］張燕平,段瓊芬,蘇建榮.辣木的開發與利用［J］.熱帶農業科學，2004，24(4)：42.

［3］張濤,馬海樂,鐘慧慧.分光光度法測定辣木多糖含量［J］.糧油食品科技，2004，12（1）：32.