金銀花解熱作用分析論文

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【摘要】目的探討金銀花的解熱作用及中樞電生理解熱機制。方法復制IL1β性發(fā)熱新西蘭兔模型，觀察金銀花的解熱作用，并應用微電極細胞外放電記錄技術觀察金銀花對IL1β作用下POAH溫度敏感神經(jīng)元放電頻率的影響。結(jié)果金銀花對IL1β性發(fā)熱有解熱作用;金銀花能增加IL1β作用下熱敏神經(jīng)元的放電頻率，而減少IL1β作用下冷敏神經(jīng)元的放電頻率。結(jié)論逆轉(zhuǎn)IL1β引起的溫度敏感神經(jīng)元放電頻率的改變，可能是金銀花起解熱作用的機制之一。

【關鍵詞】金銀花IL1β解熱室前區(qū)下丘腦前部

Abstract：ObjectiveTostudytheantipyreticeffectandthemechanismofJinyinhua(JYH).MethodsFevermodelsofrabbitswereestablishedbyintravenousinjectionofIL-1β.TheantipyreticactionofJYHwasobserved.ThefiringratesofthermosensitiveneuronsinthePOAHwererecordedbyextracellularmicroelectrodetechnology.Results①JYHobviouslyreducedbodytemperatureoffebrilerabbitsinducedbyIL1β(P<0.01).②Afteri.vinjectionofJYH，thefiringratesofwarm-sensitiveneuronsresponsedtoIL-1βincreasedfrom（3.2±1.6）imp/s(beforei.vinjectionofJYH)to（9.7±4.4）imp/s(P<0.01，n=13)．Incontrast，thefiringratesofcold-sensitiveneuronsdecreasedfrom(20.1±5.8)imp/s(beforei.vJYH)to(8.4±2.0)imp/s(P<0.01，n=10)．Conclusion①JYHhasobviousantipyreticeffectonIL1βinducedfeverinrabbits．②JYHcanreversethechangesoffiringratesofthermosensitiveneuronstreatedbyIL1βinPOAHandplaysanantipyeticeffectbyincreaseinheatlostanddecreaseinheatproduction．

Keywords：Jinyinhua；IL1β；Antipyretic；POAH

金銀花是重要的清熱解毒中藥，以金銀花為主的復方制劑解熱作用的臨床觀察和藥效學研究很多，但對金銀花是通過何種途徑起解熱作用，其作用靶點和機制究竟如何，至今國內(nèi)外少見報道。因此，本課題通過采用IL1β復制新西蘭兔發(fā)熱模型，在了解金銀花解熱作用的基礎上，運用玻璃微電極細胞外放電記錄技術來記錄金銀花對IL1β作用下下丘腦溫度敏感神經(jīng)元放電的影響，以闡明金銀花的中樞解熱電生理機制，為臨床應用提供實驗依據(jù)和理論指導。

1材料與方法

1.1材料與試劑ST1型數(shù)字溫度計（上海醫(yī)用儀表廠）、數(shù)字溫度計、（北京師范大學司南儀器廠）、標準溫度計（上海醫(yī)用儀表廠）、MEZ8300型微電極放大器（光電公司）、SBRI型二線示波器（汕頭超聲電子儀器廠）、TDW718型磁帶機（日本JVC公司）、WC/0905型超級恒溫器（重慶試驗設備廠）、VNSA-II型生理信號處理系統(tǒng)（海軍醫(yī)學高等專科學校）、步進式微操縱器（上海量具刀具廠）、江灣II型立體定位儀（上海川沙花木農(nóng)機廠）、IL1β（美國Sigma公司，來源于E.coli，純度≥98%）、金銀花注射液（西安黃河制藥廠）。

1.2方法

1.2.1實驗動物及體溫測量取封閉群健康新西蘭兔，體重1.5～2.5kg，基礎體溫38.6～39.2℃，雌雄不限，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，許可證編號：SCXK(粵)20030002。實驗前將兔置于實驗環(huán)境中模擬實驗操作以適應實驗條件2d,3～4h/d,第3天正式實驗。實驗室溫度控制在22～25℃。測溫時將兔置于特制兔架上,用數(shù)字測溫儀探頭(預先經(jīng)標準溫度計校正)涂以液體石蠟,插入直腸內(nèi)10cm并固定于尾根部,待體溫穩(wěn)定后每10min記錄體溫1次,取3次平均值作為基礎體溫,實驗中每10min記錄體溫1次。防污措施按發(fā)熱實驗的常規(guī)方法進行［1］。

1.2.2動物分組取健康新西蘭兔24只，隨機分為4組，分別為生理鹽水組（NS）：靜脈注射NS，1ml/只；白介素-1β（IL1β）組：靜脈注射IL1β，100ng/只，(用無熱原生理鹽水稀釋成100ng/ml)；金銀花和白介素-1β（IL-1β+JYH）組：靜脈注射JYH1ml/只，30min后再靜脈注射IL-1β(劑量同IL1β組)；金銀花（JYH）組：靜脈注射JYH，1ml/只。

1.2.3POAH溫度敏感神經(jīng)元放電的記錄取新西蘭兔，用25%氨基甲酸乙酯(1.0g/kg，iv)麻醉，常規(guī)消毒，切開氣管并作氣管插管。

將兔頭俯臥位固定于立體定位儀上，消毒，于頭部正中作一約8cm的縱形皮膚切口，暴露顱骨，找出前囟和人字縫，并使人字縫尖低于前囟1.5mm。

根據(jù)Sawyer兔腦定位圖譜，用牙科鉆在A0，A5近中線處各鉆一小孔，插入直徑為1.2mm的變溫管近顱底；在A2.5中線旁開3mm處鉆一小孔，植入直徑1.2mm的測溫探頭至前聯(lián)合水平；在對側(cè)A1～3中線旁開1～3mm處開2mm×3mm的骨窗，作插入記錄電極用。變溫管、測溫探頭均用牙科水泥固定；實驗過程中室溫控制在22～25℃。

將尖端直徑為0.5～2μm的玻璃微電極(電阻為8～15MΩ），電極內(nèi)液為3mol/L的KCl（內(nèi)含2%的普魯士藍），在H-4～0范圍內(nèi)引導出的神經(jīng)元放電，經(jīng)放大器放大的信號輸入到二線示波器及磁帶機做連續(xù)記錄。

觀察放電穩(wěn)定約10min后，用超級恒溫泵向循環(huán)變溫管分別泵入熱水和冷水，在32～42℃范圍內(nèi)兩次升降下丘腦溫度（腦溫用數(shù)字溫度計測量），并記錄相應腦溫下神經(jīng)元的放電頻率，計算出溫度敏度系數(shù)(即在放電單位反應最為敏感的下丘腦溫度范圍內(nèi)，局部腦溫變化1℃時，神經(jīng)元單位放電頻率變化的數(shù)值)。判定神經(jīng)元溫度敏感性的標準是：溫度敏度系數(shù)≥0.8imp/s.℃者為熱敏神經(jīng)元；溫度敏度系數(shù)≤-0.6imp/s.℃者為冷敏神經(jīng)元；介于0.8～0.6imp/s.℃為溫度不敏度神經(jīng)元。

觀察金銀花對IL-1β作用下POAH熱敏神經(jīng)元放電的影響：當熱敏神經(jīng)元穩(wěn)定放電10min后，從耳緣靜脈注射IL-1β100ng/只，待神經(jīng)元放電頻率明顯改變時，從耳緣靜脈注射JYH1ml/只，觀察其對熱敏神經(jīng)元放電頻率的影響。對照組為注射IL-1β引起神經(jīng)元放電頻率變化明顯時，注射NS1ml/只，觀察其對熱敏神經(jīng)元放電頻率的影響。

觀察金銀花對IL-1β作用下POAH冷敏神經(jīng)元放電的影響：觀察冷敏神經(jīng)元穩(wěn)定放電10min后，從耳緣靜脈注射IL-1β100ng/只，待神經(jīng)元放電頻率明顯改變時，靜脈注射JYH1ml/只，觀察其對冷敏神經(jīng)元放電頻率的影響。對照組為注射IL-1β引起冷敏神經(jīng)元放電頻率變化明顯時，注射NS1ml/只。

實驗結(jié)束后，微電泳（電流為20μA，10min）普魯士藍標記玻璃微電極尖端的位置。斷頭取腦，用4%多聚甲醛固定3～5d做冰凍切片，以檢查記錄電極的位置。

1.2.4統(tǒng)計分析所有實驗數(shù)據(jù)均以±s表示，用SPSS11.0進行統(tǒng)計學分析，神經(jīng)元放電頻率數(shù)據(jù)采用配對t檢驗，其余采用單因素方差分析。

2結(jié)果

2.1金銀花對IL-1β性發(fā)熱效應的影響從表1可以看出，JYH組和NS組新西蘭兔體溫沒有明顯變化，兩組比較，△T及TRI1均無明顯差異(P>0.05)；而IL-1β組在注射IL-1β后，結(jié)腸溫度逐漸升高，與NS組相比，△T及TRI1有顯著性差異(P<0.01)；JYH+IL-1β組在事先注射JYH后，溫度上升峰值明顯低于IL-1β組，兩組△T及TRI1相比較，有顯著性差異(P<0.05)。

表1各組家兔結(jié)腸溫度影響的比較（略）

與NS組比較,*P<0.01，與IL-1β組比較，△P<0.05；n=6

2.2溫度敏感神經(jīng)元的放電記錄

2.2.1溫度敏感神經(jīng)元性質(zhì)的判定完成實驗全過程且微電極尖端在POAH范圍內(nèi)的神經(jīng)元共42例。其中19例熱敏神經(jīng)元，放電頻率隨局部腦溫升高而增加，溫度敏感系數(shù)為0.8～4.0imp/s.℃；冷敏神經(jīng)元17例，放電頻率隨局部腦溫升高而降低，溫度敏感系數(shù)為-2.6～-0.7imp/s.℃；6例溫度不敏感神經(jīng)元，溫度敏感系數(shù)為-0.2～0.5。

2.2.2IL-1β對溫度敏感神經(jīng)元放電頻率的影響靜脈注射IL-1β后，熱敏神經(jīng)元的放電頻率由（9.2±3.7）imp/s減少到（3.2±1.6）imp/s，經(jīng)配對t檢驗，放電頻率變化有顯著性差異〔放電頻率差值為(5.9±3.6)imp/s，n=13，P<0.01〕；給IL-1β后，冷敏神經(jīng)元的放電頻率由（7.5±2.1）imp/s增加到（20.1±5.8）imp/s，放電頻率前后變化有顯著性差異［差值為（12.5±5.9）imp/s，P<0.01，t=7.89，n=10］；而對溫度不敏感神經(jīng)元放電頻率沒有明顯影響，給藥前后，放電頻率改變沒有顯著性差異〔放電頻率差值為（0.2±0.2）imp/s，t=1.94，P>0.05〕。

2.2.3金銀花對IL-1β作用下溫度敏感神經(jīng)元放電的影響靜脈注射IL-1β引起溫度敏感神經(jīng)元放電頻率明顯改變時，注射JYH，發(fā)現(xiàn)JYH可使受抑制的熱敏神經(jīng)元放電頻率回升、恢復至（9.7±4.4）imp/s，用藥前后放電頻率差值為（6.4±5.7）imp/s，經(jīng)配對t檢驗用藥前后放電頻率改變有顯著性差異(t=5.74，n=13，P<0.01)，其明顯效應時間平均約（15.0±6.0）min（圖1）；使IL-1β作用下冷敏神經(jīng)元的放電頻率回降至（8.4±2.0）imp/s，用藥前后放電頻率差值為（11.6±5.1）imp/s(t=7.16，P<0.01)，其明顯效應時間平均約（19.0±5.0）min(圖2)。但對溫度不敏感神經(jīng)元放電頻率沒有明顯影響〔放電頻率差值為（0.3±0.6）imp/s，t=1.21，n=6，P>0.05〕。

圖1金銀花對IL-1β作用下POAH熱敏神經(jīng)元放電頻率的影響（略）

圖2金銀花對IL-1β作用下POAH冷敏神經(jīng)元放電頻率的影響（略）

2.2.4生理鹽水對致熱原作用下溫度敏感神經(jīng)元放電的影響給予與解熱劑等量的生理鹽水，對6例IL-1β作用下的熱敏神經(jīng)元的放電〔給生理鹽水前后放電頻率差值為（0.1±0.3）imp/s，t=0.62，P>0.05〕和7例冷敏神經(jīng)元〔給生理鹽水前后放電頻率差值為（0.7±1.8）imp/s，t=1.05，P>0.05〕放電均無明顯影響。

3討論

發(fā)熱主要是外源性致熱原作用于體內(nèi)內(nèi)生致熱原細胞產(chǎn)生并釋放內(nèi)生致熱原(EP)而致。近年來的研究發(fā)現(xiàn)EP是多種致熱性細胞因子,包括白介素(IL-1)、腫瘤壞死因子(TNF)、干擾素(IFN)、巨噬細胞炎癥蛋白-1(MIP-1)、IL-6等,其作為發(fā)熱信息可直接或間接作用體溫調(diào)節(jié)中樞,導致下丘腦中樞性發(fā)熱介質(zhì)如前列腺素E2（PGE2）、環(huán)磷酸腺苷（cAMP）、促皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)、精氨酸加壓素（AVP）、α-黑素細胞刺激素(α-MSH)等的釋放,進而引起溫度敏感神經(jīng)元的興奮性改變，使體溫調(diào)定點上移,產(chǎn)熱增加,散熱減少而發(fā)揮致熱作用［2］。

研究表明，脊髓、延髓、腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)、下丘腦都分布有溫度敏感神經(jīng)元（即熱敏神經(jīng)元和冷敏神經(jīng)元），尤以POAH分布較多。熱敏神經(jīng)元興奮時，一方面可引起散熱反應，另一方面通過突觸抑制冷敏神經(jīng)元放電；冷敏神經(jīng)元活動加強時可促進產(chǎn)熱反應，抑制散熱反應。熱、冷敏神經(jīng)元的興奮狀態(tài)決定“體溫調(diào)定點”的水平，進而調(diào)節(jié)體溫。對解熱劑的研究,目前認為主要有以下方面:減少內(nèi)生致熱原的產(chǎn)生和釋放；阻止內(nèi)生致熱原進入中樞；解熱劑與致熱原競爭溫度敏感神經(jīng)元膜上的受體,影響溫度敏感神經(jīng)元的興奮性［3］；抑制中樞性發(fā)熱介質(zhì)的合成而發(fā)揮作用［4，5］。

金銀花是我國中醫(yī)藥寶庫中的重要而常用的品種,為忍冬科植物，其成分復雜，含多種揮發(fā)油、綠原酸類化合物、三萜皂苷類化合物、黃酮類化合物等。國內(nèi)外學者運用現(xiàn)論知識進行了全面分析和研究,作了大量的藥理臨床工作,從科學的角度證實了金銀花具有廣譜抗菌、抗病毒、抗腫瘤、增強免疫及解熱、利膽、保肝、降脂、抗生育、止血、抗?jié)兊榷喾N藥理作用［6］。以金銀花為主的多種復方制劑（如銀翹散、銀黃注射液、銀黃解毒片等）對多種感染所致的發(fā)熱有較好的療效。本實驗旨在觀察金銀花對內(nèi)生致熱原引起發(fā)熱的解熱作用,并進一步探討其是否能作用于發(fā)熱調(diào)節(jié)中樞,以期進一步闡明其解熱機制。本實驗我們用IL-1β作為致熱原，觀察到新西蘭兔出現(xiàn)明顯的發(fā)熱反應，并使熱敏神經(jīng)元的放電頻率減少、冷敏神經(jīng)元的放電頻率增加；而注射金銀花可起解熱作用，并可逆轉(zhuǎn)致熱原引起的溫度敏感神經(jīng)元放電的改變，但對溫度不敏感神經(jīng)元沒有明顯影響。

上述結(jié)果提示：金銀花具有解熱作用，其解熱機制可能與逆轉(zhuǎn)致熱原引起的溫度敏感神經(jīng)元放電頻率的改變有關。

【參考文獻】

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