全自動加樣儀陽性污染現(xiàn)象

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1材料與方法

1.1標本來源

均為無償獻血者的血清標本。

1.2試劑

梅毒試劑為上?？迫A生物工程有限公司和北京華大吉比愛生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3儀器TECANRSP加樣器。

1.4方法

嚴格按照試劑說明書要求編輯加樣程序，RSP加樣儀自動形成各項實驗的前后加樣順序，不可人工改動，每板檢測88份標本。初檢加樣順序為HBsAg、抗-HCV、ALT、抗-HIV、TP（上海科華ELISA），復(fù)檢加樣順序為抗-HIV、抗-HCV、HBsAg、TP（北京吉比愛ELISA）、ALT，八根加樣針先吸入第一排足量標本血清，依次加入五項實驗酶標板中，加樣針內(nèi)外沖洗兩遍后，再加第二排標本，依次類推。加完樣品后，酶標板放入FAME全自動分析系統(tǒng)進行檢測。出現(xiàn)陽性后，對陽性標本再用手工復(fù)查小辮和試管。

收集出院污染23份標本，共10組，把這些標本按組混入正常標本中組成一板88份，每組內(nèi)各標本在酶標板中的前后順序不變，用TECANRSP加樣器每次只加一項梅毒實驗，分別做科華TP和吉比愛TP實驗。

2結(jié)果

2.110組出現(xiàn)陽性污染現(xiàn)象標本的位置號及OD值

見表1。從表1中可看出，每組標本都是兩個或三個陽性前后相鄰，而且大部分是前排陽性標本OD值要強于后面的，手工復(fù)查試管和小辮，位置在前的陽性標本均為陽性，位置在后的標本試管和小辮均為陰性。表110組出現(xiàn)陽性污染現(xiàn)象標本的位置號及OD值（略）

2.210組污染標本的試管結(jié)果

把10組出現(xiàn)污染的標本按每組原來各標本的先后順序排列，放在一塊酶標板中做梅毒實驗，用RSP加樣儀單獨只加一項梅毒實驗酶標板，其位置號及結(jié)果見表2。從表中可看出，每組中第一個標本仍為陽性，第二個標本為陰性。表210組污染標本的試管結(jié)果（略）

3討論

在四項常規(guī)實驗中僅有梅毒實驗出現(xiàn)前排孔陽性污染后排孔現(xiàn)象，而敏感度較高的HBsAg實驗很少出現(xiàn)這種情況，而且新儀器出現(xiàn)污染現(xiàn)象的次數(shù)少，當儀器使用時間長后出現(xiàn)的次數(shù)逐漸增多。由于加樣儀設(shè)有系統(tǒng)氣隙［1］，可排除通過蒸餾水污染的情況。我們分析原因發(fā)現(xiàn)這與加樣針保護膜被腐蝕有關(guān)。RSP全自動加樣儀采用的是永久性金屬加樣器，儀器自動沖洗，針可長期使用，但儀器保養(yǎng)要求定期酸洗，使用時間久了會對加樣針表面的保護膜造成腐蝕，導(dǎo)致加樣針內(nèi)壁不光滑。當遇到標本抗凝不好時，血漿中的纖維蛋白就會黏附在加樣針內(nèi)壁，不易沖洗干凈，當加樣針吸完陽性標本后再吸第二個標本，由于梅毒實驗在加樣順序中被排在最后一個或倒數(shù)第二個，血清在加樣針中停留的時間和在下降過程中經(jīng)過的加樣針長度相對其他三項ELISA實驗都要長，因此被污染的機會就要大。當單獨只加一塊梅毒實驗板時，沒有出現(xiàn)污染情況，證明了這一點。由此可見污染現(xiàn)象與實驗在加樣程序中的先后順序有關(guān)。在剛發(fā)現(xiàn)污染現(xiàn)象時，我們加大了酸洗的次數(shù)和浸泡時間，發(fā)現(xiàn)污染的次數(shù)反而有所增加，分析原因，可能為酸對已被破壞的保護膜腐蝕加重，從而導(dǎo)致污染現(xiàn)象的加重。通過長期的工作，我們認為各單位應(yīng)根據(jù)自己的工作量定期更換RSP加樣儀的加樣針，酸洗時酸的濃度不能太大，每周酸洗一次即可。

【參考文獻】

1劉玉振，方建華，溫濤，等.用RSP全自動加樣器加高粘稠度稀釋液參數(shù)的優(yōu)選.中國輸血雜志，2004，17（1）：24.