榿葉唐棣組培快繁生產(chǎn)技術(shù)分析

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榿葉唐棣是薔薇科唐棣屬一種落葉小喬木或灌木，原產(chǎn)于北美洲從阿拉斯加中部到科羅拉多的落基山脈地區(qū)。其果實(shí)為漿果狀梨果，含有多種營(yíng)養(yǎng)成分，可稱之為高鈣植物。果實(shí)可加工或鮮食，主要用于釀酒、食品、藥品等。其樹型美觀大方，花、果頗為俏麗，具有一定的觀賞價(jià)值，可作為園林綠化樹種栽培。研究以榿葉唐棣腋芽為外植體，通過組織培養(yǎng)快繁技術(shù)，在較短時(shí)間內(nèi)達(dá)到了高效誘導(dǎo)外植體分化增殖和高質(zhì)量保證幼苗成活的目的，并且保存了母體的全部?jī)?yōu)良性狀，遺傳性狀穩(wěn)定。

1試驗(yàn)材料與方法

1．1無菌體系建立。以70％乙醇（消毒時(shí)間為20s與30s）為表面消毒劑，分別加入5％次氯酸鈉（滅菌時(shí)間為15min與30min）、10％次氯酸鈉（滅菌時(shí)間為10min與20min）和0．1％升汞（滅菌時(shí)間為6min與10min）為浸泡消毒劑，接種100瓶，共設(shè)12個(gè)處理（見表1）。采用MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，附加少量植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑IBA、6－BA，培養(yǎng)條件為蔗糖3％，瓊脂0．65％，溫度22～25℃，光強(qiáng)2000lx，光照14h／d。定期觀察結(jié)果。1．2試管苗初代培養(yǎng)。將切取帶腋芽的莖段在無菌條件下接種到以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，附加0．1～1．0mg／L濃度的6－BA和0．05mg／L濃度的IBA的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，重復(fù)100次隨機(jī)取50次未污染的莖段，共10個(gè)處理（見表2），培養(yǎng)條件為蔗糖3％，瓊脂0．65％，溫度22～25℃，光強(qiáng)2000lx，光照14h／d，定期觀察腋芽分化狀況。1．3試管苗繼代培養(yǎng)。選取腋芽培養(yǎng)分化后的試管苗，在無菌環(huán)境下接種到以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，附加0．2～1．0mg／L濃度的6－BA和0．05～0．1mg／L濃度的IBA的繼代培養(yǎng)基中。每種培養(yǎng)基設(shè)計(jì)接種10瓶，每瓶接種3株試管苗。共10個(gè)處理（見表3），培養(yǎng)條件為蔗糖3％，瓊脂0．65％，溫度22～25℃，光強(qiáng)2000lx，光照14h／d，定期觀察腋芽分化狀況。1．4試管苗生根培養(yǎng)。選取繼代培養(yǎng)中生長(zhǎng)健壯芽，在超凈臺(tái)上分離成單芽后，轉(zhuǎn)接到以1／2MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，附加植物激素IBA不同濃度的6種培養(yǎng)基中（見表4）。培養(yǎng)條件為蔗糖2％，瓊脂0．65％，溫度22～25℃，光強(qiáng)2000lx，光照14h／d。每種培養(yǎng)基接種30個(gè)莖段，定期統(tǒng)計(jì)試管苗生根情況。

2試驗(yàn)結(jié)果與分析

2．1無菌系建立中各消毒劑的用量分析。試驗(yàn)結(jié)果表明，70％乙醇處理的時(shí)間在20s即可取得較好效果，時(shí)間過長(zhǎng)則會(huì)出現(xiàn)脫水現(xiàn)象。用5％～10％次氯酸鈉處理20min以上才能達(dá)到消毒目的，但外植體多數(shù)出現(xiàn)褐變現(xiàn)象，而使用0．1％升汞處理榿葉唐棣莖段，只需浸泡6min就可能達(dá)到消毒目的，但為避免升汞的殘留對(duì)植物組織造成傷害必須用無菌水清洗5～6次，并用無菌濾紙吸干水分。2．2不同處理對(duì)試管苗腋芽萌發(fā)的影響。研究表明，0．5mg／L6－BA＋0．05mg／LIBA濃度的培養(yǎng)基誘導(dǎo)出的腋芽普遍生長(zhǎng)健壯，葉片嫩綠，腋芽萌發(fā)數(shù)量和萌發(fā)率較高，為最適合的初代培養(yǎng)基（見表2）。2．3不同處理對(duì)試管苗繼代增殖的影響。當(dāng)培養(yǎng)基為MS＋0．6mg／L6－BA＋0．1mg／LIBA時(shí)，每個(gè)芽新增芽數(shù)為6．5，芽多，葉片大，生長(zhǎng)快，能更好的保持芽增殖數(shù)量與生長(zhǎng)速度之間的平衡化（見表3）。2．4不同處理對(duì)試管苗生根的影響當(dāng)培養(yǎng)基不加激素IBA時(shí)，榿葉唐棣試管苗也能生根，但生根率較低僅為55％，生根數(shù)量較少且根纖細(xì)易斷。當(dāng)IBA濃度為0．1mg／L時(shí)，生根率提高到了98％，每株生根數(shù)達(dá)到5．5條，平均根長(zhǎng)2．3cm，所生根較粗堅(jiān)韌質(zhì)量好。當(dāng)IBA濃度增大到0．2～0．4mg／L時(shí)，雖然生根率達(dá)到了80～95％，但每株生根數(shù)下降到2．8～4．2條，根長(zhǎng)度1．6～2．0cm，并且根基部愈傷組織較多。因此，生根培養(yǎng)基中IBA較合適的濃度應(yīng)為0．1mg／L（見表4）。

3結(jié)論

榿葉唐棣的外植體先用70％乙醇處理20s，再使用0．1％升汞浸泡6min可取得較好的消毒效果；初代培養(yǎng)中，添加0．5mg／L6－BA＋0．05mg／LIBA的MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)效果最好；繼代培養(yǎng)中，添加0．6mg／L6－BA＋0．1mg／LIBA的MS培養(yǎng)基能更好的保持了芽增殖與生長(zhǎng)之間的平衡；在生根試驗(yàn)中，添加0．1mg／LIBA的1／2MS培養(yǎng)基，生根效果最好。

作者:樸凱偉 單位:撫順市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)及扶貧開發(fā)促進(jìn)中心