自擬寶寧丸對小鼠免疫功能影響試析論文

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要：目的觀察自擬方寶寧丸對小鼠免疫功能的影響。方法測定血清抗體效價，并比較寶寧丸與卡介苗對巨噬細胞功能的影響。結果寶寧丸組血清抗體效價明顯提高，并可提高巨噬細胞的吞噬作用。結論寶寧丸對小鼠的體液免疫及細胞免疫功能均有增強作用。

關鍵詞：寶寧丸；免疫功能

自擬方寶寧丸由醋制鱉甲、生黃芪、生山藥、炒萊菔子、炒白術、防風、炒枳實等14味中藥組成。本方由我校中醫學教授黃德友、馬榮華創制，已在一附院、二附院（原南陽張仲景國醫學院附屬醫院）臨床應用十余年。觀察240余例，除有效預防小兒感冒外，對積滯、厭食證可健脾和胃，改善其消化功能；對腹痛、腹脹癥狀可行氣導滯、緩急止痛；對鼻炎、扁桃體炎可抗菌消炎，防止反復感染［1］。為了驗證寶寧丸的“安內攘外，扶正祛邪”的臨床療效，我們開展了寶寧丸對小鼠免疫功能影響的實驗觀察。

1材料與方法

1.1藥物及制備

醋制鱉甲、銀柴胡、生黃芪、生山藥各10g，炒萊菔子、防風、炒枳實各4g，炒白術5g，炒麥芽、炒神曲、雞內金各6g，由我校二附院中藥飲片廠制劑教學科研基地按比例制成散劑。實驗前浸泡24h（溫度為0～4℃），過濾去渣取上清液，配成濃度為50g/L的溶液備用。

1.2動物清潔級昆明小鼠，由南陽醫學高等專科學校實驗動物中心提供，小鼠體質量18～22g，雄性，飼養于清潔級實驗室內。

1.3血清抗體效價測定

1.3.1實驗分組小鼠32只，按體質量配對后隨機分為兩組，寶寧丸組（B組）和對照組（C組）各16只，B組以50g/L的寶寧丸溶液灌胃，2次/d，C組以生理鹽水灌胃，2次/d。

1.3.2血清抗體的誘導產生用100μg·ml-1牛血清白蛋白作為抗原在1,4,8周對小鼠腹腔注射，第1次注射劑量為0.3ml，第2次注射劑量0.4ml，第3次注射劑量0.5ml。

1.3.3取血尾靜脈取血，用免疫雙向擴散法測小鼠血清抗體效價。在1∶16以上時即達到要求，第9周時集體處死。處死前將小鼠禁食24h，以免血脂過高。用斷頭法處死小鼠，每只小鼠分別取血置于1ml離心管中。常溫靜置1h，4℃過夜，使血塊收縮，將血塊自容器壁分離，將血清全部傾入離心管。4℃下2500r/min離心30min，取上清部分與前面血清混合，3000r/min離心5min取上清液，即為所需血清。

1.3.4血清抗體效價測定準備10支試管，分別加入生理鹽水0.5ml。在第1管內加小鼠血清0.5ml，混勻后吸出0.5ml注入第2管，同樣混勻后吸出0.5ml于第3管，依此類推，稀釋到第9管，第9管混勻后棄去0.5ml，第10管不加小鼠血清，只加0.5ml生理鹽水。第1到第9管的稀釋倍數分別為2，4，8，16，32，64，128，256，512倍。每管中再加入100μg·ml-1牛血清白蛋白0.5ml。混勻后室溫放置60min，以出現明顯凝集的試管的稀釋倍數為血清抗體效價。

1.4小鼠腹腔巨噬細胞功能測定

1.4.1雞紅細胞懸液的制備［2］于無菌操作下，自雞翼下靜脈采血，置Alsever''''s溶液中，高壓蒸氣滅菌，4℃冰箱保存。臨用時，用生理鹽水洗滌3次，離心棄去上清液，用生理鹽水配成20ml/L(V/V)。

1.4.2實驗分組取小鼠30只，按體質量配對后隨機分為寶寧丸組(B組)、卡介苗組(K組)和生理鹽水組(C組)，每組各10只，分籠飼養。按表1給藥。表1小鼠腹腔巨噬細胞功能測定動物分組及給藥情況（略）

4周后，每鼠腹腔注射20ml/L(v/v)雞紅細胞懸液1.0ml。間隔30min，頸椎脫臼處死動物，將其仰位固定于鼠板上，正中剪開腹壁皮膚，經腹腔注入生理鹽水2.0ml，轉動鼠板，吸出腹腔洗液1.0ml，平均分滴于2片載玻片上，移置(37±1)℃孵箱溫育30min，于生理鹽水中漂洗，以除去未貼片細胞。晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，40ml/L(V/V)Gimsa-磷酸緩沖液染色3min，再用蒸餾水漂洗，涼干。鏡檢，計數吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數和被吞噬的雞紅細胞總數，計算吞噬百分率和吞噬指數。計算公式為：吞噬百分率（%）＝吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數/200個巨噬細胞（吞及未吞的）×100%，吞噬指數＝被吞噬的雞紅細胞總數/200個巨噬細胞（吞及未吞的）÷2。

2結果

2.1血清抗體效價通過對兩組32管小鼠血清抗體效價的測定，得到B組血清中抗體效價明顯高于C組。B組血清抗體效價以1∶128為主，占樣本總量的62.50%；其次為1∶256，占樣本總量的18.75%；再次為1∶64，占樣本總量的12.50%，1∶512，占樣本總量的6.25%。C組血清抗體效價以1∶32為主，占樣本總量的56.25%；其次為1∶64，占樣本總量的25.00%，再次為1∶16，占樣本總量的18.75%(見表2)。此結果表明寶寧丸組的小鼠體液免疫功能高于對照組。表2寶寧丸組與對照組血清抗體效價對比（略）

2.2小鼠腹腔巨噬細胞功能實驗表明，B組對雞紅細胞的吞噬百分率為71.35%，吞噬指數為1.31，K組的吞噬百分率為68.30%，吞噬指數為1.28，C組吞噬百分率為61.05%，吞噬指數為1.05（見表3）。B組、K組分別與C組進行統計學對照處理，寶寧丸、卡介苗均能顯著提高小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能。表3各組玻片巨噬細胞計數、吞噬百分率及吞噬指數（略）

3討論

遵照中醫理論，寶寧丸中黃芪、白術為君，益氣固表，健脾助運，此兩味藥配伍，其意在于“補虛黃芪為墻垣，以白術為基址……可至風雨不畏，寒暑不侵，向來體弱者不覺脫胎換骨”［3］；防風辛散，助主藥通行肌表；山藥健脾益氣，以實中焦，共為臣藥；麥芽，神曲，雞內金消食健脾；萊菔子行氣導滯；鱉甲、銀柴胡消積清熱為佐；使以甘草調和藥味，緩急止痛。諸藥共奏益氣固表、健脾消積、培土生津之效。藥理學實驗研究資料也表明：黃芪有增強機體免疫力的作用，并具一定的鎮痛、抗菌、抗病毒作用；白術調節胃腸功能，強壯機體；防風解熱鎮痛、抗菌、抗病毒、抗過敏、增強機體非特異免疫；萊菔子抑制細菌生長、解毒、抗炎、鎮痛；山藥具有誘導機體產生干擾素、提高巨噬細胞吞噬功能和體液免疫功能的作用［4］。

本實驗通過對血清抗體效價的測定，顯示寶寧丸組的小鼠體液免疫功能高于陰性對照組，說明寶寧丸有提高機體體液免疫功能的作用；對小鼠腹腔巨噬細胞功能測定時選擇了卡介苗作為陽性對照，卡介苗為預防結核病的減毒活疫苗，還可有效

地增強機體的細胞免疫功能，故現可作為免疫增強劑，用于治療惡性黑色素瘤，或在肺癌、急性白血病、惡性淋巴瘤根治性手術或化療后作為輔助治療，口服還可用于小兒哮喘性支氣管炎的治療、小兒感冒的預防以及成人慢性氣管炎的防治［5,6］，實驗顯示寶寧丸組對雞紅細胞的吞噬百分率及吞噬指數與陰性對照組有顯著的統計學差異，且略高于卡介苗，說明寶寧丸能顯著提高細胞免疫功能。本實驗研究結果與中醫理論相吻合，且說明中藥在增強免疫功能方面甚至優于某些西藥。

【參考文獻】

［1］黃德友.寶寧丸預防小兒感冒240例臨床觀察［J］.四川中醫，2003，21（5）:57.

［2］徐叔云，汴如廉.藥理實驗方法學［M］.北京：人民衛生出版社，2002.

［3］王輝武.中醫百家藥論薈萃［M］.重慶：重慶出版社，1997：68.

［4］王浴生.中藥藥理與應用，第2版［M］.北京：人民衛生出版社，1998：185.

［5］李世文，康滿珍.老藥新用途，第2版［M］.北京：人民軍醫出版社，2005：350.

［6］陸鳳翔，楊玉.臨床實用藥物手冊［M］.南京：江蘇科學技術出版社，2004：332