ELISA測(cè)定HIV抗體對(duì)艾滋病的診斷價(jià)值分析

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【摘要】目的探討酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（elisa）測(cè)定人類免疫缺陷病毒（hiv）抗體對(duì)艾滋病（AIDS）的診斷價(jià)值。方法選擇2019年1月—12月于深圳市龍崗區(qū)第三人民醫(yī)院治療的AIDS高危人群或疑似HIV感染患者1820例，采集清晨空腹靜脈血，采用ELISA、膠體金法檢查HIV抗體，并以蛋白印跡診斷HIV抗體結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算膠體金法、ELISA的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值，以及與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性。結(jié)果1820例AIDS高危人群或疑似HIV感染患者經(jīng)蛋白印跡證實(shí)陽(yáng)性、陰性各有21例、1799例；膠體金法診斷HIV抗體陽(yáng)性、陰性各有372例、1448例，其中漏診7例，誤診358例；ELISA診斷HIV抗體陽(yáng)性、陰性各有56例、1764例，其中漏診1例，誤診36例。以蛋白印跡診斷結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，ELISA診斷HIV抗體敏感度（95.24%）、特異度（98.00%）及準(zhǔn)確率（97.97%）、陰性預(yù)測(cè)值（99.94%）、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（35.71%）均高于膠體金法（66.67%，80.10%，79.95%，99.52%，3.76%），有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；膠體金法診斷HIV抗體結(jié)果與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性差（Kappa=0.051，P=0.000）；ELISA診斷HIV抗體結(jié)果與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性較為理想（Kappa=0.511，P<0.001）。結(jié)論ELISA用于HIV抗體篩查中敏感度、特異度及準(zhǔn)確率、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均較高，且與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性較佳，能夠提高AIDS檢出率，可作為篩查HIV抗體較為準(zhǔn)確的方法于臨床推廣。

【關(guān)鍵詞】艾滋病;人類免疫缺陷病毒;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);膠體金法;蛋白印跡;診斷效能;一致性

艾滋病（AIDS）作為一種免疫性疾病，具有較強(qiáng)的傳播性，多由于人類免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiencyvirus，HIV）經(jīng)血液途徑、性接觸途徑及母嬰途徑等感染所致，若未能及時(shí)診斷并治療會(huì)破壞人體免疫系統(tǒng)，造成患者反復(fù)感染，威脅生命安全。隨著我國(guó)AIDS從局部暴發(fā)到廣泛流行，其防治策略也逐漸從道德宣傳和出入境防范轉(zhuǎn)變?yōu)橹鲃?dòng)對(duì)公眾進(jìn)行AIDS知識(shí)的宣傳教育，各級(jí)地方政府、人民醫(yī)院、學(xué)校都參與到AIDS防治的宣傳教育中。加強(qiáng)HIV抗體檢測(cè)，有利于及時(shí)發(fā)現(xiàn)HIV病毒并對(duì)其傳播進(jìn)行阻斷[1，2]。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）、膠體金法為篩查HIV抗體的重要方法，但目前何種方法檢測(cè)結(jié)果更為準(zhǔn)確尚無(wú)確切結(jié)論[3，4]。本研究探討ELISA測(cè)定HIV抗體對(duì)AIDS的診斷價(jià)值，并與膠體金法診斷HIV抗體結(jié)果進(jìn)行比較，從而實(shí)現(xiàn)AIDS早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2019年1月—12月于深圳市龍崗區(qū)第三人民醫(yī)院治療的AIDS高危人群或疑似HIV感染患者1820例。其中男943例、女877例；年齡28~59歲，平均年齡（42.19±3.26）歲；體質(zhì)量指數(shù)（bodymassindex，BMI）18.2~29.7kg/m2，平均（23.49±1.56）kg/m2；受教育程度：小學(xué)及以下、初中、高中、高中以上各有459例、318例、586例、457例；婚姻狀況：未婚、再婚、離異/喪偶各有906例、893例、21例；職業(yè)：無(wú)工作、有工作各有146例、1674例；性取向：男男性行為、異性性行為各有820例、1000例。

1.2入選標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①依從性較高，能夠積極配合臨床診治，未患有精神疾病，理解及認(rèn)知功能正常；②患者均進(jìn)行ELISA、膠體金法檢查HIV抗體。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在嚴(yán)重機(jī)體感染；②合并惡性腫瘤；③肝、腎功能不全；④已確診為HIV感染者或者確診為AIDS患者。

1.3方法

1.3.1儀器及試劑全自動(dòng)酶免儀（AE115）由深圳市愛康生物科技有限公司提供，儀器性能良好，均經(jīng)過校準(zhǔn)；ELISA試劑、膠體金試劑分別由珠海麗珠試劑有限公司、廣州萬(wàn)孚生物技術(shù)股份有限公司提供，所有試劑均在有效期范圍內(nèi)使用。1.3.2檢測(cè)方法采集患者清晨空腹靜脈血6mL，3000轉(zhuǎn)/min離心10min，離心后取上清液，采用膠體金法、ELISA測(cè)定檢測(cè)HIV抗體。膠體金法檢測(cè)時(shí)取待測(cè)樣本50μL分別加于試紙板條加樣區(qū)，將1滴稀釋液加在加樣區(qū)上方，于30min內(nèi)觀察并記錄結(jié)果。ELISA采用常規(guī)操作進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說明書完成各項(xiàng)操作過程，初篩陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)試。

1.4評(píng)價(jià)指標(biāo)

①記錄膠體金法、ELISA診斷HIV抗體結(jié)果。②以蛋白印跡診斷HIV抗體結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算膠體金法、ELISA診斷HIV抗體敏感度、特異度、準(zhǔn)確率、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值。③計(jì)算膠體金法、ELISA診斷HIV抗體結(jié)果與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以%表示，采用χ2檢驗(yàn)，一致性采用Kappa檢驗(yàn)（Kappa>0.75表明一致性極好，0.4~0.75表明一致性較為理想，<0.4表明一致性差），P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1蛋白印跡診斷結(jié)果

1820例患者經(jīng)蛋白印跡證實(shí)陽(yáng)性、陰性各有21例、1799例。

2.2膠體金法、ELISA診斷

HIV抗體結(jié)果膠體金法診斷HIV抗體陽(yáng)性、陰性各有372例、1448例，其中漏診7例，誤診358例；ELISA診斷HIV抗體陽(yáng)性、陰性各有56例、1764例，其中漏診1例，誤診36例；以蛋白印跡診斷結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，ELISA診斷HIV抗體敏感度、特異度、準(zhǔn)確率、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值高于膠體金法，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。見表1、表2。

2.3膠體金法、ELISA診斷

HIV抗體結(jié)果與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性分析膠體金法診斷HIV抗體結(jié)果與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性差（Kappa=0.051，P=0.000）；ELISA診斷HIV抗體結(jié)果與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性較為理想（Kappa=0.511，P<0.001）。

3討論

據(jù)統(tǒng)計(jì)，2018年新增HIV感染者中多數(shù)來自于男男性行為人群、吸毒者、性工作者等高危人群以及他們的伴侶。全球新增HIV感染者人數(shù)從1997年的290萬(wàn)下降至2018年的170萬(wàn)，但仍然低于2020年的目標(biāo)50萬(wàn)，控制HIV新增、減少HIV傳播仍面臨很大的挑戰(zhàn)。AIDS作為一種傳染性疾病，會(huì)對(duì)人體免疫系統(tǒng)進(jìn)行攻擊，降低患者免疫功能，導(dǎo)致多種感染，增加惡性腫瘤發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[5]。1981年美國(guó)診斷出首例AIDS患者，近年來AIDS病毒感染率較高，目前我國(guó)AIDS患者及HIV感染患者約占總?cè)丝诘?.06%。目前臨床仍缺乏較為有效的抗HIV藥物及預(yù)防疫苗，而這也是導(dǎo)致AIDS患者死亡率較高的重要原因。目前在毒品交易泛濫及人口流動(dòng)性強(qiáng)、性解放的社會(huì)環(huán)境中，HIV感染者已從高危人群不斷向一般人群擴(kuò)散，傳播速度較快[6]。AIDS具有較強(qiáng)的潛伏期，發(fā)病早期患者無(wú)典型癥狀，極易被忽視，進(jìn)而通過多種不同途徑傳播給他人。因此對(duì)公眾進(jìn)行警示性教育，將艾滋病疫情情況進(jìn)行公布，對(duì)患者的HIV抗體進(jìn)行早期檢測(cè)以明確診斷，有利于控制傳染源，將傳播途徑切斷，進(jìn)而達(dá)到良好的防治效果[7，8]。HIV病毒感染人體后，約10d左右血漿中便可檢測(cè)到HIV核酸，約2~3周后血漿中可出現(xiàn)p24抗原，并可產(chǎn)生ＩgM抗體，隨后ＩgG抗體貫穿HIV感染的后續(xù)階段。故在HIV感染人體后，HIV核酸為體內(nèi)首先出現(xiàn)的生物標(biāo)記物，其次為p24抗原，最后為抗體。為有效控制AIDS流行傳播，制訂適宜的HIV抗體實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略，對(duì)AIDS的疫情監(jiān)測(cè)、診斷和治療有重要意義。選取高精度、高質(zhì)量的試劑與檢測(cè)方法是檢測(cè)高危HIV感染人群最為重要的步驟，以獲得更為準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。膠體金法檢測(cè)HIV抗體時(shí)，保存及攜帶方便，具有檢測(cè)速度快及操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，但其診斷特異性及敏感度并不高[9]。ELISA測(cè)定HIV抗體簡(jiǎn)便易行，是將HIV抗原或抗體包被在固相載體上，加入酶標(biāo)記的特異性二抗，根據(jù)酶作用底物后的顯色顏色對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行判斷，屬于一種半定量的檢測(cè)技術(shù)[10]。其能夠?qū)IV抗體直接檢測(cè)，也能對(duì)血液標(biāo)本、組織標(biāo)本中微量HIV抗體進(jìn)行檢測(cè)，且不會(huì)受類風(fēng)濕因子干擾，診斷敏感度及特異度較高[11]。但由于HIV抗原及其他反轉(zhuǎn)錄病毒間會(huì)發(fā)生交叉反應(yīng)，故采用ELISA測(cè)定HIV抗體也會(huì)存在假陽(yáng)性現(xiàn)象，增加與受檢者之間的糾紛[12]。本研究探討了ELISA測(cè)定HIV抗體對(duì)AIDS的診斷價(jià)值，并與膠體金法診斷HIV抗體結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，1820例AIDS高危人群或疑似HIV感染患者經(jīng)蛋白印跡證實(shí)陽(yáng)性、陰性各有21例、1799例；以蛋白印跡診斷結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，ELISA診斷HIV抗體敏感度、特異度及準(zhǔn)確率、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值高于膠體金法（P<0.05）；膠體金法診斷HIV抗體結(jié)果與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性差（Kappa=0.051，P=0.000）；ELISA診斷HIV抗體結(jié)果與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性較為理想（Kappa=0.511，P<0.001）。提示與膠體金法相比，ELISA測(cè)定HIV抗體敏感度、特異度、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值較高，與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性較為理想，能夠準(zhǔn)確篩查HIV抗體，降低誤診及漏診率，最大限度發(fā)現(xiàn)HIV感染患者，有利于為AIDS的早期診斷及治療提供參考。雖然本次研究中ELISA用于篩查HIV抗體中的準(zhǔn)確率、敏感度及特異度均高于膠體金法，檢查結(jié)果準(zhǔn)確、便捷且快速，可作為篩查HIV抗體一種成本效益最優(yōu)的檢測(cè)方法；但ELISA測(cè)定中也存在假陽(yáng)性及假陰性現(xiàn)象，會(huì)導(dǎo)致漏診、誤診的發(fā)生，故臨床上應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)HIV相關(guān)檢查方法的研究，以期為AIDS的診斷、預(yù)防及治療提供確切指導(dǎo)，使AIDS的檢測(cè)策略更加完善。綜上所述，ELISA診斷HIV抗體效能優(yōu)于膠體金法，且與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性較為理想，有利于提高AIDS的檢出率，為其防治提供依據(jù)。

作者：何奕斌 單位：深圳市龍崗區(qū)第三人民醫(yī)院