知母總黃酮提取論文

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1儀器與試藥

1.1儀器精密天平BS224S（德國塞多利斯）；UV-4501S紫外分光光度計(天津市港東科技發展有限公司)；超聲清洗機SK8210LHC（上海科導超聲有限公司）。

1.2試藥知母（產地河北，河南，安徽）；芒果苷為對照品（中國生物制品檢驗所，批號111607－200301）；乙醇、甲醇均為分析純。

2方法與結果

2.1實驗條件與方法的建立

2.1.1對照品的選擇很多文獻報道中藥制劑中總黃酮的含量測定多數采用蘆丁作為對照品。采用蘆丁作為對照品，解決了部分中藥或中藥制劑中本身缺少黃酮對照品的問題，在沒有合適的對照品情況下，也不失一種測量總黃酮的可行的方法。芒果苷是知母中含量較高的黃酮類化合物，是其清熱作用的有效成分，同時還具有抗炎、抗病毒、抗氧化、免疫抑制、利尿、預防肥胖等作用。因此，用知母中含量較高且具有抗病毒作用的專屬性活性成分作為對照品來測定知母總黃酮的含量更加有意義。

2.1.2最大吸收波長的選擇NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法測定總黃酮的原理［6］，是黃酮母核所含有的游離羥基在NaNO2-Al（NO3）3存在的條件下與金屬鋁離子形成絡合物而顯色，在波長500nm左右有最大吸收。本實驗中所用的對照品是知母中主要黃酮類成分芒果苷對知母總黃酮進行含量測定。因此將芒果苷溶液及知母總黃酮提取液顯色后在200～400nm處用可見-紫外分光光度計掃描，知母總黃酮和芒果苷均在258nm有最大吸收波長，結果見圖1。故選擇含量測定的檢測波長為258nm。

Ⅰ知母總黃酮紫外吸收波譜圖Ⅱ芒果苷的紫外吸收波譜圖

圖1知母總黃酮、芒果苷的最大紫外吸收波譜圖

2.2對照品溶液的制備取芒果苷適量，于60℃減壓干燥至恒重，精密稱定，加70％乙醇溶解，制成每毫升含32μg溶液，即得。

2.3線性關系實驗精密吸取混合對照品溶液貯備液1，2，5，10，15，25ml，分別置于50ml量瓶中，加70％乙醇稀釋到刻度，搖勻，即得。分別取上述溶液，進行測定，以溶液濃度與吸收度比值進行回歸，分別得到回歸方程為：芒果苷：Y=0.2309X-0.0031（r=0.9993），表明芒果苷在0.26～3.57μg/ml，范圍內線性關系良好，芒果苷線性關系見圖2。

圖2芒果苷線性關系圖

2.4提取方法的選擇

2.4.1回流提取法取知母粗粉1g，精密稱定，置100ml圓底燒瓶中，加甲醇80ml，水浴回流提取3h，濾過，用少量甲醇洗滌藥渣及容器，濾液置于同一100ml量瓶中，放冷，用甲醇補足至刻度，搖勻，取溶液5ml，置于50ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4.2超聲提取法取知母粗粉1g，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，超聲提取30min，放冷，用甲醇補足至刻度，搖勻，過濾，取續液5ml，置于50ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。按“2.3項下分別取上述溶液”起，依法操作，測定各供試品溶液的吸收度。結果見表1。表1不同提取方法對知母總黃酮含量的影響

表1表明以上兩種提取方法差別不大，回流提取法方法繁瑣，耗時，能耗大；而且知母含有較多的黏液質，提取液較難過濾。而超聲提取法的方法更方便、簡單、快速，易于過濾。因此,選擇超聲提取法提取知母總黃酮。

2.5提取溶劑的考察按照上述優選的方法，分別以甲醇和70％乙醇作為提取溶劑，提取知母總黃酮，并進行含量測定，（見表2）。表2表明甲醇、70％乙醇提取知母總黃酮差別不大，由于甲醇有毒，對環境有污染，選擇70％乙醇作為知母總黃酮提取溶劑。表2不同溶劑對知母總黃酮含量的影響

2.6提取時間的考察分別取知母粗粉1g，精密稱定，置于100ml量瓶中，加70％乙醇，稀釋到刻度，分別超聲20，30，40min，分別按“2.4.2項下放冷處理”起，依法操作,分別制備供試品溶液，并分別測定（見表3）。表3表明超聲30min，知母總黃酮含量不再提高，因此，選擇超聲提取時間為30min。

表3超聲時間對知母總黃酮的影響

時間t/min吸收度A202.0076302.1388402.1387

n＝3

2.7供試品溶液的制備按照上述優選的工藝參數制備供試品溶液，取知母粗粉1g，精密稱定，置100ml圓底燒瓶中，加70％乙醇至刻度，超聲提取30min，放冷，用70％乙醇補足至刻度，搖勻，濾過，取續液5ml，置于50ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.8精密度實驗取“2.7”項下溶液，在258nm波長下，連續測定5次，其吸收度的RSD=0.09％，表明儀器精密度良好。

2.9樣品溶液穩定性考查取“2.7”項下溶液，每隔2h測定1次，測定5次，其吸收度的RSD=0.09％，表明溶液穩定性良好。

2.10重現性實驗取同一批的知母粉末5份，分別按“2.7”項下制備樣品溶液，并按樣品測定方法，測定5次，芒果苷含量9.57mg/g，RSD=1.72%，表明樣品重現性良好。

2.11加樣回收率實驗取已知含量的供試品5份，分別精密加芒果苷一定量，依法制備供試品溶液，照含量測定法測定，加樣回收率為101.01％，相對標準偏差1.27%。結果見表4。表4芒果苷回收率實驗

2.12樣品的測定按上述方法，對3個不同產地知母藥材進行了總黃酮的含量測定。結果見表5。表5不同知母總黃酮的含量測定

從表2可以看出，不同的產地知母總黃酮含量有較大的差異，其功效也必然有一定的差別，河北知母是道地藥材，其功效差別是由于內在的化學成分引起的，通過該實驗，證實了河北知母的有效成分含量較高。

3討論

在研究知母總黃酮含量測定方法時，最初選用蘆丁為對照品，但實驗結果并不好，而且未見文獻報道知母中含有蘆丁。由于知母中黃酮類成分較多，同時芒果苷是知母中含量較高的一種黃酮類化合物，且芒果苷紫外吸收波譜圖和知母總黃酮的紫外吸收波譜圖呈現一致性，因此用其作為知母藥材中總黃酮含量測定的對照品更有意義，同時也更能真實反應總黃酮的含量。在知母總黃酮和芒果苷最大紫外吸收波譜圖，二者最大吸收波長分別在240，258nm呈一致性。原則上，二者均可作為知母總黃酮最大吸收波長，但是由于波長越長，其他雜質干擾就越小，故本次最大吸收波長選定為258nm。在知母總黃酮的提取方法上，還考察了以甲醇為溶劑，索氏提取知母總黃酮，結果其提取效果和超聲提取相差不大，但是其耗時、方法也很繁瑣。因此，所選定的知母總黃酮的提取方法具有簡便、快速、準確，可以作為知母總黃酮的提取方法及含量測定方法。

【參考文獻】

［1］中國藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京:化學工業出版社,2005：148.

［2］廖洪利,王偉新,趙福勝,等.知母化學成分研究進展［J］.藥學實踐雜志,2005,23(1):12.

［3］陳萬生,李力,喬傳卓,等.不同產地知母中芒果甙、新芒果甙的含量測定［J］.中國中藥雜志,2000,25(2):87.

［4］倪梁紅,秦民堅.知母資源化學及藥理研究進展［J］.中國野生植物資源,2005,24(4):16.

［5］徐冬英,謝崇源,韋袞政.知母的研究進展［J］．廣西中醫學院學報,1999,16(4):93.

［6］郭亞健,范莉,王曉強,等.關于NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法測定總黃酮方法的探討［J］.藥物分析雜志,2002,22(2):97.

【摘要】目的建立知母中總黃酮提取工藝，為知母總黃酮開發和利用提供依據。方法對提取方法、提取溶劑、提取時間進行研究，采用紫外分光光度法測定知母中總黃酮含量。結果知母中總黃酮較佳提取工藝為：70%乙醇超聲提取30min。結論該方法簡便、快速、準確，可作為知母中總黃酮提取及含量測定方法。

【關鍵詞】知母；紫外分光光度法；總黃酮；芒果苷