麻竹葉黃酮研究論文

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【摘要】目的利用麻竹葉黃酮進行了小鼠急性毒性實驗和致突變實驗。方法采用急性毒性實驗、小鼠精子畸形實驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核實驗和鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體實驗。結果小鼠經口LD50>25g·（kg·bw）-1，腹腔注射LD50>10g·（kg·bw）-1；竹葉黃酮各劑量組不能使鼠傷寒沙門氏菌移碼突變株和堿基置換突變株發生回復突變；沒有對小鼠骨髓細胞染色體的斷裂效應及紡錘體毒效應；也對小鼠精子的畸形無影響。結論竹葉黃酮是一種安全的保健食品功能因子。但對人體有無毒副作用還需作臨床實驗。

【關鍵詞】竹葉黃酮半數致死量Amees實驗微核致突變作用毒理學

ToxicologicalTestonFlavonoidsfromLeavesofDendrocalamusLatiflorus

Abstract:ObjectiveAcutetoxicityexperimentsandmutationexperimentswereconductedonmicewiththeflavonoidsfromtheleavesofDendrocalamuslatiflorus.MethodsBymeansofacutetoxicitytest,malformationtestofmicesperm,micronucleustestofbonemarrowcellandAmestest.ResultsLD50（ig）formicewasmorethan25g·（kg·bw）-1andinLD50（ip）formicewasmorethan10g·（kg·bw）-1.MutagenicactionofflavonoidfrombambooleavesonTA97，TA98，TA100andTA102，andtoxiceffectonmicemarrowmicronucleusaswellaseffectonmalformationofmicespermwereallnegative.ConclusionTheflavonoidsfromleavesofDendrocalamuslatifloruswasatypeofsecurefunctionfactorofhealthyfood，butwhetherithastoxicornegativeeffectonhumanornotitneedfurtherobservationinclinicalapplication.

Keywords:Flavonoidsfrombambooleaves（FBL）；LD50；Amesexperiment；Micronucleus；Mutationexperiments；Toxicology

麻竹Dendrocalamuslatiflorus又名甜竹、八月麻（福建），屬禾本科牡竹屬，是廣泛分布于我國福建、臺灣、廣東、廣西、云南、貴州和四川等南亞熱帶和熱帶地區的大型叢生竹種［1］。麻竹葉大，寬4～7cm以上，內含有豐富的營養物質，很值得開發利用。竹葉在我國具有悠久的食用和藥用歷史［2～4］。竹葉提取物具有優良的抗自由基、抗氧化、抗衰老、調節血脂、阻斷亞硝化反應、增強免疫和抗菌抑菌的作用［2～4］。竹葉中所含的功能因子主要是黃酮糖苷和香豆素類內酯等［3,4］。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗用竹葉黃酮系麻竹葉黃酮，本實驗室自備［2］，總黃酮>80%。

1.1.2實驗動物昆明種小鼠：為BALB/C純系小鼠（醫動字2004第002號），♂，♀各半，8～10周齡，體重18～20g，由重慶市中藥研究院實驗動物中心提供。

1.1.3菌株鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型突變株TA97，TA98（移碼型突變株）和TA100，TA102（堿基置換型突變株）：均由重慶市疾控中心提供。

1.2方法

1.2.1竹葉黃酮的經口（ig）、腹腔注射（ip）急性毒性（LD50）實驗［5～7］采用霍恩法。實驗劑量以最大注射量或經口灌胃不超過1ml/只小鼠為限。竹葉黃酮經口的劑量組設4個組為2.15，4.64，10.0，21.5g·（kg·bw）-1；竹葉黃酮經腹腔注射劑量組設4個組為1.00，2.15，4.64，10.00g·（kg·bw）-1。取健康小鼠，禁食16h后，給預受試物后觀察7d，記錄小鼠的活動和死亡情況。

1.2.2竹葉黃酮的鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體實驗（Ames實驗）［6,8～10］采用平板滲入法。實驗菌株采用TA97，TA98（移碼型突變株）和TA100，TA102（堿基置換型突變株），實驗前菌種的5個遺傳特征要作鑒定，達到規定的標準才能使用，并且在實驗前均要在營養肉湯培養基中，于37℃水浴振蕩培養14h增菌，得到大約2×108的菌株懸浮液。按急性毒性實驗所用腹腔注射最高劑量（10.00g/kg）的1/10，1/20，1/40，1/80，1/160，1/320設6個劑量組，另設陰性對照組（竹葉黃酮為0mg/平皿）和陽性對照組（2-AF、敵克松、疊氮鈉），共10個實驗組，并各實驗組分別進行加S9（20μl/平皿）活化和不加S9活化的實驗，每次實驗做3個平行樣品，取兩次實驗的平均數，以超過自然回變數（陰性對照組）的2倍作為陽性判斷標準。

1.2.3竹葉黃酮的骨髓微核實驗［9］取健康小鼠，隨機分成5組，每組動物10只，按急性實驗所用腹腔注射最高劑量〔10.00g·（kg·bw）-1〕的1/2，1/4和1/8設3個劑量組，另設陽性對照組〔環磷酰胺40mg·（kg·bw）-1〕和陰性對照組共5組，連續腹腔注射給藥2d，1次/d。第2次給予受試物后6h，頸椎脫臼處死小鼠，取胸骨，用止血鉗擠出骨髓液與玻片一端的小牛血清混勻，常規涂片。涂片自然干燥后放入甲醇中固定5～10min，再放入Giemsa應用液中，染色10～15min，立即用pH6.8的磷酸鹽緩沖液沖洗晾干，寫好標簽，置干燥器中保存。選擇細胞完整、分散均勻、著色適當的區域，在油鏡下觀察，以有核細胞形態完好作為判斷制片優劣的標準，觀察嗜多染紅細胞的微核（呈灰藍色），而成熟紅細胞呈粉紅色。每只動物計數1000個嗜多染紅細胞，觀察含有微核的嗜多染紅細胞數，計算微核率：

微核率（‰）=含微核細胞數觀察細胞數×1000

1.2.4竹葉黃酮的小鼠精子畸形實驗［6,7,9］取健康小鼠，隨機分成5組，每組動物10只，按急性實驗所用腹腔注射最高劑量〔10.00g·（kg·bw）-1〕的1/2，1/4和1/8設3個劑量組，另設陽性對照組〔環磷酰胺40mg·（kg·bw）-1〕和陰性對照組共5組，連續腹腔注射給藥5d，于第1次腹腔注射給藥后的第35天用頸椎脫臼處死小鼠，取出兩側副睪，放入盛有適量生理鹽水（1ml）的小燒杯中。用眼科剪將副睪縱向剪1～2刀，靜置3～5min，輕輕搖動，用4層擦鏡紙過濾，吸濾液涂片。于空氣中干燥后，用甲醇固定8min，干燥后用1%～2%伊紅染色1h，用水輕沖，干燥。在低倍鏡下（用綠色濾光片）找到清晰、精子重疊少的部位，用高倍鏡順序檢查精子形態，計數結構完整的精子，每只動物至少檢查1000個精子，觀察畸形精子數，計算精子畸形率：

精子畸形率（%）=畸形精子數觀察的精子數×100

1.2.5數據處理采用SPSS統計軟件進行t檢驗和方差分析，并以LDS法進行組間的兩兩比較，檢驗的顯著性水平設定為P<0.05(顯著水平)和P<0.01(極顯著水平)。

2結果與分析

2.1竹葉黃酮的經口、腹腔注射急性毒性（LD50）實驗結果見表1～2。表1經口給藥后小鼠毒性反應情況（略）表2竹葉黃酮的經口急性毒性（略）

從表1～2的實驗數據可以看出：竹葉總黃酮經口LD50實驗，小鼠的飲食、行動、皮毛、大便等均正常，未發現異?，F象，無小鼠死亡，測不出其LD50。推測其LD50>21.50g/kg·bw，屬實際無毒。

從表3和表4可以看出：竹葉總黃酮經腹腔注射LD50實驗，小鼠的飲食、行動、皮毛、大便等均正常，未發現異常現象，無小鼠死亡，測不出其LD50。推測其LD50>10.00g·（kg·bw）-1，屬實際無毒。表3腹腔注射給藥后小鼠毒性反應情況（略）表4竹葉黃酮的經腹腔注射急性毒性（略）

2.2竹葉黃酮的鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體實驗（Ames實驗）結果見表5～6。表5竹葉黃酮對TA98和TA100的致突變作用（略）表6竹葉黃酮對TA97和TA102的致突變作用（略）

由表5～6可知，麻竹葉黃酮的6個測試濃度在加S9或不加S9活化的情況下，4個菌株TA97，TA98，TA100和TA102的回變菌落數均與陰性對照組很接近，沒有顯著性差異（P>0.05）且沒有超過陰性對照組的2倍,而與陽性對照組比較要低得多,有極顯著性差異(P>0.01)，因此竹葉黃酮不能使鼠傷寒沙門氏菌移碼突變株和堿基置換突變株發生回復突變的現象。

2.3竹葉黃酮的骨髓微核實驗竹葉黃酮的骨髓微核實驗結果見表7。表7竹葉黃酮的骨髓微核實驗結果（略）

由表7可知,陽性對照組(環磷酰胺)具有微核嗜多染色紅細胞數與陰性對照組(竹葉黃酮0.00g/kg)相比,差異極顯著(P<0.01)。竹葉黃酮的各劑量組小鼠具有微核嗜多染紅細胞率與陰性對照組相比，微核率值非常接近，無明顯差異（P>0.05），且無劑量-效量關系，因此竹葉黃酮沒有對小鼠骨髓細胞染色體的斷裂效應及紡錘體毒效應。

2.4竹葉黃酮的小鼠精子畸形實驗結果見表8。表8竹葉黃酮的小鼠精子畸形實驗結果（略）

由表8可知,陽性對照組(環磷酰胺)具有小鼠精子畸形率與陰性對照組(竹葉黃酮0.00g/kg)相比,差異極顯著(P<0.01)。竹葉黃酮的各劑量組小鼠精子畸形率與陰性對照組相比，小鼠精子畸形率非常接近，均無顯著差異（P>0.05），且無劑量-效量關系，揭示竹葉黃酮對小鼠精子的畸形無影響。

3結論

通過實驗結果可得出如下結論：小鼠經口LD50>25g·（kg·bw）-1，腹腔注射LD50>10g·（kg·bw）-1，屬實際無毒；竹葉黃酮各劑量組不能使鼠傷寒沙門氏菌移碼突變株和堿基置換突變株發生回復突變；沒有對小鼠骨髓細胞染色體的斷裂效應及紡錘體毒效應；也對小鼠精子的畸形無影響。

以上結果顯示竹葉黃酮是一種安全的保健食品。但對人體長期毒副作用研究還需臨床試驗。

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