血竭凝血和抗血小板聚集論文

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【摘要】目的考察不同產地血竭在凝血和抗血小板聚集方面的作用。方法采用毛細血管法測定凝血時間,體內血小板致聚劑——膠原和腎上腺素誘導小鼠血瘀模型。結果不同產地血竭對正常小鼠的凝血功能均有一定的抑制作用,可較明顯抑制小鼠對血小板致聚劑誘發的血小板聚集作用。結論國產血竭和進口血竭均有一定的活血化瘀和抗血栓形成的作用。

【關鍵詞】血竭;凝血時間;血小板致聚劑

Abstract:ObjectiveToassesstheactivityinbloodclottingandantiplateletaggregationofdragonbloodfromdifferenthabitats.MethodsCapillarymethodwasusedtogetclottingtimeandcongestivemicemodelinducedwithcollagenproteinandepinephrinehydrochloridewasused.ResultsDragonbloodfromdifferenthabitatshavesomeinhibitoryactionsonbloodclottingofhealthyKunmingmice,plateletaggregationinducedbyplateletactivationwasalsoinhibitedobviously.ConclusionDragonbloodsfromChinaandabroadhavesomeeffectsonpromotingbloodcirculation,removingbloodstasisandanti-thrombosis.

Keywords:Dragonblood;clottingtime(CT);plateletaggregation

血竭(dragonblood)是珍貴的中藥傳統品種之一,主要來源于棕櫚科麒麟竭及百合龍血樹屬龍血竭,進口的血竭主要為棕櫚科麒麟血竭。國產龍血竭與進口棕櫚科的血竭相比,在化學成分上有較大差異,國產血竭對血液系統、心血管系統有較強的藥理作用[1-3]。本研究的目的是以凝血時間和抗血小板聚集反應為指標,比較不同產地血竭凝血和抗血小板聚集作用,為進一步研究國產血竭替代進口血竭在血液方面的作用機制提供理論依據。

1實驗材料

1.1藥品與試劑廣西、云南、印尼、龍王、柬龍5種產地血竭原料,購于市場,由廣東藥學院藥科學院天然藥物化學教研室呂華沖副教授鑒定,自處理:用95%乙醇索式提取,所得醇溶物干燥,按血竭醇溶物∶泊洛沙姆∶聚乙二醇4000(質量比為1∶2∶1),乙醇溶劑熔融法制備成固體分散體;地奧心血康,成都地奧制藥集團有限公司,批號060611;復方丹參片,廣州白云山和記黃埔中藥有限公司(原廣州白云山中藥廠),批號20051025;鹽酸腎上腺素注射液,北京市永康藥業有限公司1mL∶1mg,批號05100241;I型膠原蛋白,NorthingtonBiochemicalCorporation公司,1g分裝,批號35E8048。

1.2動物昆明小鼠,SPF級,雄性,體質量18~22g,購于廣東省實驗動物中心,合格證號2006A017。

1.3儀器上皿電子天平FA2104(上海精密科學儀器有限公司);鉆石牌機械秒表(上海星鉆秒表有限公司);電動玻璃勻漿機DY89-1型(寧波新之生物科技股份有限公司)。

1.4藥品、試劑的前處理與配制血竭溶液:分別稱取廣西、云南、印尼、龍王、柬龍血竭固體分散體各10g,再分別稱取廣西、印尼血竭固體分散體各5g和2.5g,共9份,分別加100mL注射用0.9%NaCl研磨均勻,即得9種不同類型和劑量的血竭溶液。

復方丹參片溶液:復方丹參片3片加20mL注射用0.9%NaCl研磨均勻,即得15mg/mL丹參混懸液;地奧心血康溶液:地奧心血康膠囊10粒加100mL注射用0.9%NaCl研磨均勻,即得甾體總皂甙10mg/mL地奧混懸液。

血小板聚集誘導劑溶液:精密稱取Ⅰ型膠原01mg,加入75mL的生理鹽水,用電動勻漿機冰浴下勻漿4h,再靜置冷藏2d,臨用前1d,加入20mL鹽酸腎上腺素注射液,搖勻,定容到100mL,冰箱4℃冷藏,避光保存備用。

2方法

2.1毛細管法測定血液凝聚時間(自改良)昆明小鼠192只,♂,按體質量分類、隨機分組,每組16只,分為NS組、陽性對照組(復方丹參片組0.3g/kg、地奧心血康膠囊組0.2g/kg)、不同產地龍血竭固體分散體組(廣西血竭組分為0.5g/kg、10g/kg、2.0g/kg低中高三組,印尼血竭組分為05g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg低中高三組,云南組20g/kg,龍王血竭組2.0g/kg,柬龍血竭組2.0g/kg);實驗設計空白對照組給予0.9%氯化鈉溶液,每天按體質量灌胃給藥1次,連續給藥7d。

末次給藥1.5h后,在17℃的空調房間內,用毛細管插入小鼠眼底靜脈叢取血,深約4~5mm,輕輕轉動,自血液流入管內按動秒表、開始計時,血液注滿后取出毛細管平放于水平臺面,每隔10s向兩側傾斜一次,觀察血液流動性,記錄出現血液不再流動的時間[4]。

2.2藥物對膠原蛋白和腎上腺素誘導血瘀模型小鼠的保護作用[5]昆明小鼠240只,♂,按體質量分類,隨機分組,每組20只,分組同2.1,每天按體質量給藥,連續給藥7d。

末次給藥1.5h后,小鼠尾靜脈注射膠原蛋白和腎上腺素的混合誘導劑,誘發動物血栓性偏癱甚至死亡,記錄注射后10min內小鼠死亡數,計算恢復率以及存活時間。小鼠10min內存活計為恢復,恢復率=每組恢復動物數/每組動物數×100%[6,7],存活時間≥10min的,統一記錄存活時間為10min。

2.3統計學處理凝血時間數據以(±s)表示,用單因素方差分析(SAS統計軟件,version9.0),以P<0.05為差異有顯著性;每組動物恢復數進行χ2檢驗,組間差異采用兩兩組間χ2檢驗(SAS統計軟件,version9.0),以P<0.05為差異有顯著性;存活時間先進行F檢驗,檢驗方差齊性,再進行t檢驗。

3結果

3.1不同產地血竭制劑對小鼠凝血時間的影響經單因素方差分析,各給藥組與空白組比較差異均有顯著性(P<0.01);給藥組間進行比較,地奧心血康組、廣西高劑量組、印尼中劑量組和高劑量組可較明顯延長小鼠的凝血時間,印尼中劑量和高劑量組作用最強,此兩組差異無顯著性(P>0.05),其余給藥組差異無顯著性(P>0.05)。由實驗結果可知,廣西和印尼血竭的延長凝血時間作用似有濃度相關性,印尼1g/kg組為有效濃度。復方丹參片,作為臨床的常用活血化瘀藥,延長凝血時間方面的作用并不很強。地奧心血康可較明顯延長小鼠凝血時間,但與印尼組相比差異無顯著性。見表1。

表1不同產地血竭對正常昆明小鼠凝血時間的影響(略)

Tab.1EffectofDragonbloodfromdifferenthabitatsontheclottingtimeofKMmicewithcapillarytest

與空白對照組比較:*P<0.01

3.2不同產地血竭對血栓形成小鼠存活時間的影響每組恢復動物數進行χ2檢驗,χ2=24.6257,P<0.05,不同給藥組對血栓形成小鼠存活率差異有顯著性。兩兩組間χ2檢驗,P>0.05,提示廣西與印尼血竭的效果似無濃度相關性,各濃度組組間差異無顯著性;廣西和印尼的高劑量組、云南組、龍王組、柬龍組4組組間對小鼠存活率的改善作用差異無顯著性,相比較而言,廣西和印尼的低劑量組、云南組同丹參組、地奧組有較好的提高小鼠存活率的作用,龍王和柬龍組對小鼠存活率的改善作用比丹參組、地奧組差,差異有顯著性。

存活時間先進行F檢驗,組間方差齊性,給藥組與空白組經t檢驗,給藥組能明顯提高小鼠的存活時間;給藥各組對提高小鼠存活時間的作用差異無顯著性(P>0.05)。結果見表2。

表2不同產地血竭對血栓形成昆明小鼠存活時間的影響(略)

Tab.2EffectsofDragonbloodfromdifferenthabitatsonthelivingtimeofcongestivemiceinducedwithcollagenproteinandepinephrinehydrochloride

與空白對照組比較:*P<0.01

4討論

毛細管測定凝血時間法是一種經典的血液、心血管作用藥物有效性的初篩方法,具有操作簡單、無設備性要求的優點[4]。本研究在此經典方法上稍作改進,以觀察毛細管中血液流動性為凝血的觀測指標,當發生流動性減慢時,毛細管中的某一區段可能先有凝血小栓形成,采用此法比原先的經典觀察法——折斷毛細血管觀察血凝絲,可更有效地減少實驗中的人為操作誤差和環境誤差,避免毛細管中某一小段區域先發生了凝血而在折斷毛細管的過程中未觀察到,提高了實驗數據的可靠性和均一性。

膠原和腎上腺素致血瘀模型是中醫學上常用的致血小板聚集血栓栓塞模型,膠原可以激活血小板膜上磷脂酶A2,加速磷脂水解釋放花生四烯酸,花生四烯酸在環氧酶以及進一步血栓烷A2合成酶的作用下轉化為血栓素A2(TXA2),促進血小板聚集,腎上腺素兼有α受體和β受體的激動作用,其激動α受體可引起皮膚、黏膜、內臟血管收縮,其激動β受體可引起骨骼肌和心肌興奮、心率加快等作用,故膠原和腎上腺素合用具有增強致血小板聚集的協同作用。

我國的血竭長期以來主要靠進口,國產血竭為血竭資源的開發利用開辟了前景。本實驗研究表明:不同產地血竭可明顯延長正常小鼠凝血時間,血液狀態明顯比正常組顏色更鮮紅。國產血竭有與進口血竭近似的活血作用。對正常小鼠凝血時間的改變作用,不同產地血竭有差異,廣西血竭與印尼血竭延長凝血時間(CT)的作用相對最強,這與胡海燕等人的報道不同[8]。對膠原與腎上腺素合用致血栓栓塞小鼠的保護作用,不同產地血竭沒有差異,廣西和云南血竭在保護血小板致聚劑誘導血栓形成小鼠的方面的作用相對比較強。且廣西和印尼血竭作用效果似沒有濃度相關性。廣西和云南血竭作為國內主要的血竭資源,是否可以完全代替印尼血竭以及深入探討血竭的活血作用機制,還需要進一步的實驗研究。

【參考文獻】

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[8]胡海燕,黎穎,楊得坡,等.不同粒徑血竭粉末與制劑滴丸止血作用比較研究[J].中國中藥雜志,2004,29(12):1114-1143.