剛果紅熒光光度法測定論文

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【摘要】目的采用熒光光度法測定加替沙星的含量。方法在pH6.0的Britton-Robinson(B-R)緩沖溶液中,剛果紅能與鈣黃綠素生成配合物,使鈣黃綠素熒光猝滅,加入加替沙星后,加替沙星與剛果紅可生成比鈣黃綠素-剛果紅更穩定的配合物,使鈣黃綠素游離重現熒光。結果將該方用于片劑、粉針劑和尿液中加替沙星的測定,結果與文獻報道的紫外法一致。結論所用方法簡單、快速、準確、靈敏。

【關鍵詞】鈣黃綠素;剛果紅;加替沙星

Fluorometrydeterminationofgatifloxacinwithcalcein-congored

【Abstract】ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofgatifloxacinbyfluorometry.MethodsThecomplexbetweencongored(CR)andcalceininpH6.0Britton-Robinson(B-R)buffersolutionquenchedfluorescenceofcalcein.Thecomplexofgatifloxacin-CRwasmorestablethanthatofcalcein-CR.Whengatifloxacinwasaddedintosystem,thecalceincouldbefreedanditsfluorescenceappearedagain.ResultsThismethodhadbeenappliedtothedeterminationofgatifloxacinintablet,injectionandurine,andtheresultswereveryclosetothoseobtainedbyusingUVmethodthatreported.ConclusionThismethodissimple,rapid,accurateandsensitive.

【Keywords】calcein;congored;gatifloxacin

加替沙星(gatifloxacin,AM-1155,GFLX)是新的第四代喹諾酮類抗生素藥物,具有抗菌譜廣,抗菌活性強的特點。它對革蘭陽性菌、革蘭陰性菌、厭氧菌及衣原體均具有強大的抗菌作用[1]。加替沙星的測定方法有高效液相色譜法、熒光光度法、反相離子對色譜法、高效毛細管電泳法和紫外分光光度法[2~6]等。但利用鈣黃綠素-剛果紅熒光體系來測定加替沙星含量還未見報道。本文經研究發現剛果紅能與鈣黃綠素生成沒有熒光的配合物,使鈣黃綠素熒光猝滅,加入加替沙星后,加替沙星與剛果紅反應生成比鈣黃綠素-剛果紅更穩定的配合物,游離出鈣黃綠素,釋放出熒光。以此為基礎,建立了測定加替沙星的新方法。

1實驗與方法

1.1儀器與試劑pHS-3CT型酸度計(上海大中儀器有限公司);970CRT型熒光分光光度計(上海精密儀器廠);Labtech-1000紫外-可見分光光度計(北京萊伯泰科儀器有限公司)。

加替沙星片(通化金馬藥業集團股份有限公司,批號:20080201,每片0.1g);沙星粉針劑(浙江亞太藥業股份有限公司,批號:070201,每安瓿0.2g)。

加替沙星對照品(GFLX,0.2g/L,河南省藥檢所提供)溶液:準確稱取0.0200gGFLX,加水溶解后定量轉移到100ml容量瓶中,用水定容,用時逐級稀釋。鈣黃綠素(1×10-4mol/L):準確稱取0.0175g鈣黃綠素,加少量水溶解后配制成溶液250ml。剛果紅(CR1×10-4mol/L)準確稱取0.6967gCR,加少量水溶解后配制成溶液1000ml。B-R緩沖溶液:取濃度均為0.04mol/L的硼酸,磷酸,醋酸混合溶液,用0.20mol/L的NaOH調至所需pH值。所用試劑均為分析純,水為二次重蒸水。

1.2實驗方法在10ml容量瓶中依次加入1.5mlB-R緩沖溶液(pH6.0)、0.5ml鈣黃綠素溶液、5mlCR溶液和適量GFLX溶液,用水稀釋至刻度,搖勻。在λex/λem=492nm/514nm,470~540nm之間進行熒光同步掃描。

2結果與討論

2.1體系的熒光特性在pH6.0的B-R緩沖溶液中按實驗方法對鈣黃綠素、鈣黃綠素-CR、鈣黃綠素-CR-GFLX體系進行熒光掃描,由圖1可知鈣黃綠素在500nm處有強烈熒光,加入剛果紅后熒光猝滅,再加入加替沙星,熒光強度增強。

2.2酸度的影響試驗不同酸度的B-R緩沖溶液對體系的影響(見圖2)。實驗表明:pH為6.0時,鈣黃綠素和鈣黃綠素-CR的熒光最強,并且猝滅程度最大,因此選擇pH6.0的B-R緩沖溶液。

2.3緩沖溶液用量的影響試驗B-R緩沖溶液(pH6.0)不同用量時對體系的影響(見圖3)。實驗表明:用量為1.5ml時,體系的熒光強度最強,且猝滅程度最大,因此選擇pH6.0的B-R緩沖溶液1.5ml。

2.4CR用量的影響試驗CR不同用量時對體系的影響(見圖4)。實驗表明:隨著CR的逐漸增加,熒光強度逐漸降低,當用量大于4.5ml時,體系達到穩定,因此選擇CR溶液5.0ml。

2.5時間的影響考察了2h內時間對體系的影響(見圖5)。實驗表明:反應在常溫下很快完成,且在2h內保持穩定。

2.6干擾試驗對藥品輔料和尿液中常見的物質以及金屬離子進行了試驗。實驗表明:在誤差±5%范圍內,500倍的葡萄糖、糊精、可溶性淀粉、尿素、NH+4、Na+和K+不干擾測定;5倍的Mg2+、Zn2+和Fe3+不干擾測定。

2.7標準曲線與檢出限按實驗方法,在10ml容量瓶中依次加入1.5mlB-R緩沖溶液(pH=6.0)、0.5ml鈣黃綠素溶液、5mlCR溶液和適量GFLX對照品溶液,用水稀釋至刻度,搖勻,以質量濃度為橫坐標,熒光強度為縱坐標繪制工作曲線(見圖6)。實驗表明:加替沙星質量濃度在2.0~8.0mg/L范圍內與熒光強度呈良好的線性關系,其線性回歸方程為:Y=42.066+5.6866C(r=0.9991),檢出限為0.051mg/L。

3樣品的測定

3.1片劑中GTFX的測定取加替沙星樣品10片,研磨均勻,精密稱取0.177g(相當于加替沙星0.1g)加水溶解后定量轉移置1000ml容量瓶中,用蒸餾水定容,干過濾,棄去初濾液,收集續濾液得樣品溶液。按實驗方法,用工作曲線法進行測定,用文獻[6]的紫外分光光度法做對照實驗,測定結果見表1。

3.2粉針劑中GTFX的測定精密稱取0.143g(相當于加替沙星0.1g)粉針劑,加水溶解后置1000ml容量瓶中,用蒸餾水定容,干過濾,棄去初濾液,收集續濾液得樣品溶液。按實驗方法,用工作曲線法進行測定,用文獻[6]的紫外分光光度法做對照實驗,測定結果見表1。表1片劑和粉針劑中加替沙星的測定結果

3.3尿液中GTFX的測定取10ml加替沙星對照品溶液于100ml容量瓶中,用尿液定容,制成人工合成尿樣。準確量取尿樣溶液1ml于10ml容量瓶中,用甲醇定容后在離心機中離心5min(5500r/min),取上清液用工作曲線法進行測定,用文獻[6]的紫外分光光度法做對照實驗,測定結果見表2。

3.4回收率試驗在樣品溶液中加入適量的加替沙星對照品溶液,按實驗方法進行回收率試驗(見表3)。表2尿液中加替沙星的測定結果表3方法回收率試驗

【參考文獻】

1許鐵男.新喹諾酮類抗菌劑AM1155.國外醫藥·抗生素分冊,1998,19(4):302.

2鄧立東,程強,徐勤.高效液相法測定加替沙星尿藥濃度.右江民族醫學院報,2002,24(3):344-345.

3連寧,孫春燕,趙慧春.加替沙星的熒光光度法測定.分析測試學報,2002,21(1):79-81.

4徐曉衛,張崇生,潘柔和.反相離子對色譜法測定甲磺酸加替沙星注射劑的含量.安徽醫藥,2006,10(7):505-506.

5朱斌,姜受軍,胡昌勤.高效毛細管電泳法測定加替沙星含量.藥物分析雜志,2002,22(5):397-400.

6秦雪蓮,徐勤,鄧立東.紫外分光光度法測定加替沙星片的含量.西北藥學雜志,2004,19(4):154-155.