親水性藥物脂質體管理論文

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一，前言

脂質體作為一種新型的載藥系統，今年來得到廣泛的應用和研究。評價脂質體質量的指標有外觀、粒徑分布和包封率等。其中包封率是衡量脂質體內在質量的一個重要指標。對于親脂性藥物，由于其對磷脂膜的親和性，可以在制備過程中得到很高的包封率，且不易滲漏。而親水性藥物在制備時則必須包封在脂質體囊內部或多層脂質體層間的水性介質中，除一些特殊藥物外包封率普遍不高，且易泄露。制備中為了得到更大的包封率，不得不增加囊內的容積，而這與控制脂質體在有效的粒徑范圍內又相互矛盾。以下將介紹一些用于提高親水性藥物在脂質體中的包封率的方法。

二，制備方法

1，常規方法

對于一些親水性藥物，使用常規的制備方法也可以得到滿意的包封率。胡靜等（1）用簡單的薄膜水化-機械分散法研究了硫唑嘌呤（Aza）脂質體包封率的影響因素。這些因素包括卵磷脂與膽醇摩爾比、緩沖液(PBS)pH值、水相用量及藥脂重量比。通過正交設計得到最佳處方所制得的3批硫唑嘌呤脂質體形態圓整，大小均勻，粒度范圍0.01～0.42μm，包封率均達30%以上。但在實驗中發現藥脂重量比增加時，包封率反而下降，這說明Aza的利用率在減少。

吳駿等（2）使用逆相蒸發法制備阿昔洛韋ACV脂質體，經過正交優化后，得到阿昔洛韋脂質體的平均粒徑為219.8nm，多分散系數為0.158，包封率為65%，且具有良好的穩定性。作者將卵磷脂、膽固醇、油酸和去氧膽酸鈉溶于乙醚，于室溫攪拌下滴入ACV水溶液，使形成穩定的W/O型乳劑。25℃減壓蒸去乙醚，得乳白色混懸液，通過微孔濾膜后，即得ACV脂質體。產品經離心加速實驗表現出良好的穩定性。此實驗通過選擇適當的油水體積比可使內相體積增加，提高包封率；同時加入了乳化劑可以防止脂質體的粒徑增大。

翟光喜等（3）也將表面活性劑膽酸鈉引入脂質體的處方中制備了低分子肝素的柔性納米脂質體，此類脂質體具有高度的形變性，可由于經皮給藥系統。制備方法就是簡單的將處方混合后至冰水浴中超聲處理，再通過微孔濾膜即得。經正交優化后包封率可達到33.1%。但該制劑的穩定性和儲存中的滲漏作者并沒有做進一步研究。陳鷹等（4）也研究了雙氯芬酸鈉的柔性脂質體，試驗將磷脂等脂溶性成分和膽酸鹽溶于乙醚中，藥物則溶解在磷酸緩緩沖液中，混合后減壓旋轉揮干后再超聲過濾。得到的脂質體包封率為73.12%。

侯新樸等對低包封率的水溶性藥物(如甲硝唑)進行疏水衍生化，其疏水鏈將藥物分子插入脂質體膜，包封率和穩定性都提高十多倍（5）。

在這些常規的制備方法中，首先應該對藥物的性質有充分的了解。同時工藝參數的選擇，尤其是合適的油水相比及乳化劑的用量對于水溶性藥物的包封率有很大的影響。在制備過程中采用超聲，加乳化劑的方法都可以有效地控制脂質體的粒徑。

2，三維網狀脂質體

親水性藥物在脂質體內包封的多少取決于在脂質體形成時其在囊內溶液和囊間溶液中的分配，此比率越高，包封率也越高。因此提高囊內溶液的體積可以提高藥物的包封率。M.Brandl（6）等通過提高單位體積內磷脂的濃度，以增加在內相中的體積同時又不改變脂質體的形狀和大小，從而增加藥物的包封率。它將磷脂溶解在水性介質中達到200-300mM濃度，形成一種半固體的糊狀物，再用一步高壓勻質法（7）使磷脂“強制水化”制成了“Three-dimensionalliposomenetwork”。通過電鏡觀察，發現這種糊狀物包埋了水溶性的標記藥物，而且還具有緩釋作用。所謂一步高壓勻質法就是將磷脂粉末和藥物分散在水或磷酸鹽緩沖液中，輕微振搖后在GMLab40勻質機中高壓勻質切割即得脂質體。

3，將藥物引入制好的空白脂質體中

由于脂質體一般為混懸液，在儲存和運輸中難免出現滲漏，聚合等現象影響了包封率和粒徑。采用空白脂質體加藥物的方法可能可以解決這一問題。

Anye首先提出了前提脂質體（proliposome）的概念，將水溶性甘露醇分散在脂質體膜材的乙醇溶液中，揮干乙醇制的粉狀的前體脂質體，此前體脂質體是以甘露醇為主要支架，磷脂膜粘附在其上的結構。該前體脂質體易于保存。藥物則溶解在水中，臨用前與前體脂質體混合，藥物隨水分子進入脂質體內，即得含藥脂質體制劑。翟光喜等（8）將此方法用于低分子肝素，制得用于靜脈注射的脂質體制劑。測得平均包封率為37.3%。這種制劑包封率主要受甘露醇與類脂的總量和配比以及混合的時間影響。在穩定性問題解決的同時，也存在粒徑較大且不易控制等問題。還須進一步的研究加以解決。他（9）還將肝素加入少量PBS成糊狀，再加入商品化的NatipideⅡ空白脂質體，研磨后加入抗氧劑和防腐劑，加PBS稀釋后即得。藥物在研磨中被包入空白脂質體凝膠顆粒中，再加入大量的水破壞凝膠狀態，形成混懸液。試驗所的包封率在43%左右。該制備方法中，溫度對包封率又較大影響，溫度升高時，脂質體流動性變大，膜內包封的藥物易于滲漏。

鄧意輝等（10）用主動載藥法制備鹽酸小檗堿脂質體，包封率得到大大的提高：被動載藥法得到的包封率僅有13.3%，主動載藥法的包封率最高可達84.6%。他將膜材的乙醇溶液在枸櫞酸緩沖液中減壓蒸發得到空白脂質體，依次加入鹽酸小檗堿溶液和NaHCO3溶液調外水相pH值，水浴孵化即得。由于混合時內外水相不同的離子或化合物梯度，有利于特殊藥物（離子型藥物）的包封，且制劑較為穩定（放置一年無分層現象，包封率下降8%）。研究發現加藥順序、孵化時間、孵化溫度、外水相pH值等都對藥物的包封率有影響。由于采用主動載藥法制備脂質體的包封率高、滲漏小，非常適合于工業化大生產。

4，反復凍融法

親水性藥物脂質體無論是在制備還是儲存過程中都存在一個滲漏的問題，藥物分配在外水相增多，使包封率降低。反復凍融法被證明是一種有效的保護藥物不滲漏的方法。與其他方法相比，凍融法具有操作簡單，包封率高，藥物避免接觸有機溶媒等特點。張奇等（11）使用了凍融法制備氟尿嘧啶脂質體，并考察了其穩定性。作者使用對水溶性藥物包封率較高的逆向蒸發法制備了5-FU脂質體的混懸液后，置冰箱內反復凍融3次，發現藥物的包封率比凍融前明顯提高（由約25%上升到45%左右）且離心加速實驗的穩定性也比凍融前好得多。這是由于冰凍使磷脂周圍藥物濃度增高，在反復凍融過程中粒徑小的脂質體互相融合成稍大脂質體，粒徑趨于均勻化，使脂質體包封率明顯提高。但作者并沒有控制凍融后脂質體的粒徑分布。

董澤民（12）在研究賴氨匹林的鼻腔給藥脂質體時也使用了凍融法。他先將磷脂等制成空白脂質體后，把藥物和甘露醇溶于其中凍干，加入緩沖液振搖分散，再凍干即得。這樣制得的重建性脂質體的包封率為55.94%。由于制作過程無需加熱，尤其適用于對熱不穩定的水溶性藥物。

WeiLiang等（13）在研究含有ATP的免疫脂質體的制備時也使用到此方法。作者將包有ATP的PEG修飾脂質體結合上單克隆抗體2G4以增加其靶性，在結合的過程中未發現有ATP的泄漏。作者將脂質體材料和PEG溶于氯仿中旋轉揮干成膜，加入溶有ATP的緩沖液，強力蝸旋后反復凍融5次后過膜均化，再過柱分離得脂質體，再進行進一步化學修飾。制備方法在凍融后過聚碳酸酯的膜可使脂質體的離徑縮小（約200nm），且分布窄。作者認為凍融法提高包封率的機理可能是形成了某種暫時的孔洞是藥物在平衡前由外相進入了內水相中。

5，使用糖保護劑防止載藥脂質體的滲漏

有研究表明，在脂膜中加入蛋白，糖等類物質，會使其穩定性提高。李曉燕等（14）探討了具有疏水鏈的糖保護劑癸烷基葡萄糖（β-DG）對于延緩脂質體滲漏的影響。實驗使用超聲法制備了水溶性藥物鹽酸氯喹的小單層脂質體，發現在制膜時加入β-DG，由于長鏈的親脂性，使其均勻的分散在雙分子層中，改變了膜的通透性，不僅提高了脂質體對藥物的包封率（上升了5%），還有效地防止了藥物泄漏（降低了一個數量級）。證明了癸烷基葡萄糖是一種有效的脂質體滲漏保護劑。但加入量不宜過多，因為過多的非脂類分子進入脂膜，會影響脂膜的穩定性，反而會使泄漏量上升。

6，其他新進展

對于親水性藥物脂質體，最新研究并不局限于傳統的脂質體制劑的研究模式，而是靈活積極地采用其他劑型的優點和方法，提高藥物的包封率和穩定性。

小分子水溶性藥物在普通的水凝膠中可以被很快的釋放出來，這是由于水凝膠中含有大量的水分（＞90%）并且有很大的孔洞，因此達不到緩釋的作用。近年來有人將此類藥物包裹在脂質體中，再分散在凝膠里，可以明顯延緩藥物的釋放，藥物穿透脂質層的過程成為限速步驟。Marija（15）等研究了5-氟脲嘧啶的凝膠脂質體（liposomegels）的制備和體外釋藥特性。作者使用脂質成膜水化的方法制備脂質體，用緩沖液洗滌后加入凍干保護劑蔗糖進行凍干，后加入到具有殼聚糖骨架結構的凝膠中即得，藥物的體外釋放受脂質的組成和水化成膜的條件影響，符合Higuchi擴散模式。與對照的5-FU水凝膠相比有明顯的緩釋作用。在制備脂質體時，作者發現由于藥物對脂相有一定的親合力，因此其包封率隨膽固醇量的下降和藥物/水相質量比的增加而增加。處方中最高的包封率可達25.4%左右。作者并沒有探討該制劑的穩定性，但根據其緩釋的特點可以推測脂質體周圍的高粘度凝膠可能對藥物的滲透有一定的保護作用。E.Ruel-Gariepy等（16）也用類似的方法制備了供體內埋植的溫度敏感型凝膠脂質體。作者用逆相蒸發法先將藥物制備成大單層脂質體，多層脂質體則用水化法制的。模型藥物CF的包封率在1-8%之間。另制備了殼聚糖和甘油磷酸（glycerophosphate）的溫度敏感性凝膠，發現殼聚糖由于不具備表面活性，不會像其他親水凝膠中高分子化合物一樣穿透脂質雙分子層而導致藥物滲漏，電鏡觀察法相脂質體在該凝膠中不會發生合并，通過磷脂酶A2可以證明脂質層的完整性。因此不會對分散在其中的脂質體的穩定性產生影響。而且作者還認為膽固醇（40mol%）通過與脂質層的相互作用降低了其通透性，且增加了穩定性，減少的藥物的滲漏。

C.Tardi等（17）采用了高壓勻質法使高濃度的磷脂分散，形成了一種半固體凝膠狀物質，其中充滿了大量的單層囊泡（SUVs），包裹在這種凝膠狀磷脂囊VPGs（vesicularphospholipidgels）中的親水性藥物具有緩釋作用。VPGs由于在與緩沖液混合后可變成粒徑均一的脂質體，且包封率高。因此作為一種中間體或前體脂質體，尤其適用于高滲透率且無法穩定保存的藥物。作為非胃腸道給藥載體，作者還進一步論證了VPGs可以用于熱壓滅菌，這是脂質體制劑無法做到的。同時，在熱壓滅菌中，由于一些小囊泡的合并和增大，包入內相得體積增大，VPG的包封率反而提高（29%-47%），這與常規脂質體在加熱后藥物會滲漏的結果相反。

三，結語

脂質體作為一種新型的藥物傳遞系統正越來越被人們重視，通過自身的性質或對其表面的修飾可以得到不同的靶相給藥或緩控釋的目的。對于不同的親水性藥物，如何能有效地提高其包封率并降低在儲存中滲漏，不僅要借鑒先進的技術和輔料。還需要根據制劑設計要求找出最合適的制備工藝。

參考文獻：

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