普盧利沙星片物質(zhì)測(cè)量論文

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【摘要】目的采用高效液相色譜法建立普盧利沙星片有關(guān)物質(zhì)檢查及其含量測(cè)定方法。方法Diamonsil-C18柱（4.6mm×200mm，5μm），以0.01mol／L三乙胺的水溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH為2.8）-乙腈（73：27）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)278nm；流速1.0ml／min；柱溫30℃；進(jìn)樣量10μl。結(jié)果制劑中輔料對(duì)主藥測(cè)定無(wú)干擾，普盧利沙星與有關(guān)物質(zhì)完全分離。在10.0～200.0μg/ml范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。精密度（RSD=0.13%）良好。平均回收率為99.6%。結(jié)論本方法簡(jiǎn)便，迅速，準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)。

【關(guān)鍵詞】普盧利沙星；片劑；高效液相色譜法；含量測(cè)定；有關(guān)物質(zhì)

DeterminationofprulifloxacinanditsrelatedsubstancesintabletsbyHPLC

【Abstract】ObjectiveToestablishanHPLC-UVmethodforthedeterminationofprulifloxacinanditsrelatedsubstancesintablets.MethodsDiamonsil-C18column(4.6mm×200mm，5μm)wasused.Themobilephaseisconsistedof0.01mol／Ltriethylamine(pHwasadjustedto2.8usingphosphoricacid)-acetonitrile(73∶27).Theflowratewas1.0ml／minwithUVdetectionat278nm.Thecolumntemperaturewas30℃.Theinjectionvolumewas10μl.ResultsThelinearrangeforthecontentofprulifloxacinwas10.0～200.0μg/ml(r=0.99993，n=5).Therecoveriesofprulifloxacintabletswere99.6%，anditsRSDswere0.14%.ConclusionThemethodissample，efficient，accurateandspecific.

【Keywords】prulifoxacin；tablets；HPLC；contentdetermination；relatedsubstances

普盧利沙星是新的廣譜氟喹諾酮抗菌藥NM-394的前體藥物，可改善口服后的胃腸吸收程度。本品對(duì)革蘭陰性菌和陽(yáng)性菌均有效，特別是對(duì)綠膿桿菌、沙雷氏菌、腸桿菌屬等革蘭陰性菌具有較強(qiáng)的抗菌力，尤其是對(duì)綠膿桿菌的抗菌活性優(yōu)于其他所有同類藥物，也超過目前上市的其他抗生素藥物。本品毒副作用小，口服吸收好，反復(fù)給藥在體內(nèi)無(wú)蓄積性。有文獻(xiàn)報(bào)道其原料和膠囊含量的高效液相測(cè)定方法［1］，采用其方法測(cè)定本品其分離及峰形均不理想，遂在其基礎(chǔ)上略加調(diào)整制定本法，本文采用高效液相色譜法測(cè)定普盧利沙星片劑的含量及其有關(guān)物質(zhì)，方法專屬性強(qiáng)，靈敏度高，重復(fù)性好。

1儀器、試藥與實(shí)驗(yàn)樣品

高效液相色譜儀(HITACHIUV-VISDetectorL-7420，PumpL-7110)；普盧利沙星對(duì)照品（純度：99.6%，歸一化法），普盧利沙星片劑：132.1mg（批號(hào)：20050801、20050802、20050803，自制）；乙腈為色譜純，磷酸和三乙胺為分析純，水為二次蒸餾水。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1色譜條件色譜柱：Diamonsil-C18(4.6mm×200mm，5μm)；流動(dòng)相：0.01mol/L三乙胺的水溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH為2.8）-乙腈（73：27）；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)278nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量10μl。

2.2系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)取流動(dòng)相10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。取處方量輔料適量和普盧利沙星片，按“2.9”項(xiàng)下操作，記錄色譜圖。另取普盧利沙星對(duì)照品適量，精密稱定，用流動(dòng)相配成濃度約為100μg/ml的溶液，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。取普盧利沙星適量，分別進(jìn)行酸、堿、高溫（熱）、光照破壞處理后，各進(jìn)樣10μl，色譜圖見圖1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在“2.1”項(xiàng)的色譜條件下，流動(dòng)相、輔料對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，普盧利沙星經(jīng)酸、堿、高溫、光照破壞后，均有明顯的分解產(chǎn)物峰，但分解產(chǎn)物均與主峰有良好的分離度，不影響測(cè)定。色譜柱理論塔板數(shù)按普盧利沙星計(jì)算不得少于5000。

A-空白溶液；B-對(duì)照品溶液；C-片劑溶液；D-堿破壞；E-酸破壞；F-高熱破壞；G-光照破壞；1-普盧利沙星

2.3線性實(shí)驗(yàn)精密量取對(duì)照品約25mg，置25ml棕色量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。分別精密量取貯備液適量，以乙腈分別稀釋至濃度為10.0、20.0、40.0、80.0、120.0、160.0、200.0μg/ml的溶液，各取10μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，以濃度（C，μg/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：A=21549C+191，r=0.9999，可見在普盧利沙星10.0～200.0μg/ml范圍內(nèi)線性良好。

2.4精密度實(shí)驗(yàn)配制濃度約為100μg/ml的普盧利沙星對(duì)照品溶液，進(jìn)樣10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，RSD為0.14%。

2.5重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取20050801批樣品，按“2.9”項(xiàng)下操作平行測(cè)定6次，計(jì)算其含量分別為標(biāo)示量的100.2%、100.2%、100.1%、100.1%、100.0%、99.9%，平均值為100.1%，RSD為0.13%。

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)按“2.9”項(xiàng)下方法，取供試品溶液一份，于室溫下放置，每隔1h進(jìn)樣1次，連續(xù)進(jìn)樣6h，進(jìn)樣量為10μl，記錄峰面積，RSD=0.66%，說明樣品溶液在6h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.7回收率實(shí)驗(yàn)按處方，取高（120%）、中（100%）、低（80%）三種量的普盧利沙星對(duì)照品，分別加入處方量的輔料于同一100ml棕色量瓶中，加乙腈適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密取溶液10μl進(jìn)樣，記錄峰面積，并計(jì)算回收率，每個(gè)濃度測(cè)定3份，結(jié)果分別為98.5％、99.7％、101.6％，RSD分別為0.83%、0.89%、0.63%（n=3）。

2.8最低檢測(cè)限在選定的色譜條件下，按信噪比為3對(duì)最低檢測(cè)限進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，最小檢出量0.05μg/ml。

2.9含量測(cè)定取普盧利沙星對(duì)照品約10mg，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取本品適量(約相當(dāng)于普盧利沙星10mg)，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，用乙腈溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密吸取對(duì)照溶液和供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。3批樣品的含量分別為標(biāo)示量的99.7%、100.3%、100.0%。

2.10有關(guān)物質(zhì)測(cè)定取本品適量，加流動(dòng)相稀釋成每1ml中約含500.0μg的溶液作為供試品溶液。取供試品溶液加流動(dòng)相稀釋成每1ml中約含5.0μg的溶液作為對(duì)照溶液。精密吸取對(duì)照溶液10μl注入高效液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰高約為滿量程的20%。精密吸取供試品溶液10μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖（圖2）至主成分峰保留時(shí)間的2.5倍，用峰面積歸一化法計(jì)算雜質(zhì)含量［2］。供試品溶液中各雜質(zhì)峰面積之和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的1.0%。用自身對(duì)照法［2］計(jì)算三批樣品雜質(zhì)峰面積總和分別為0.36%、0.36%、0.33%。

3討論

3.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇對(duì)各輔料和普盧利沙星分別在200～400nm波長(zhǎng)處進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，普盧利沙星在波長(zhǎng)為278nm處有最大紫外吸收，而在此波長(zhǎng)下輔料沒有吸收，不會(huì)干擾測(cè)定，所以波長(zhǎng)選擇278nm。

3.2流動(dòng)相的選擇由于普盧利沙星具有酸性，單獨(dú)用乙腈-水作流動(dòng)相時(shí)色譜峰拖尾嚴(yán)重、峰形不好、分離效果差。加入0.01mol/L三乙胺并用磷酸調(diào)節(jié)pH值2.8后，得到明顯改善。本法能有效地控制普盧利沙星片劑的質(zhì)量，其精密度高、重復(fù)性好、快速簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

【參考文獻(xiàn)】

1封宇飛.HPLC法測(cè)定普盧利沙星膠囊的含量和有關(guān)物質(zhì).中國(guó)藥學(xué)雜志，2006，41（4）∶308.

2國(guó)家藥典委員會(huì)編．中國(guó)藥典.二部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005，124.