甲氧西林葡萄球菌研究論文

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［摘要］目的：比較分析耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)儀器檢測與紙片擴散檢測的檢出率。方法：采用KB紙片擴散法，全自動微生物分析儀法，并以瓊脂稀釋法為標準對臨床分離的63株葡萄球菌進行檢測，比較3種方法的檢出率。結果：對63株葡萄球菌(凝固酶陽性50株，凝固酶陰性13株)3種方法檢出率分別為60.3%、57.1%、50.8%。含4%氯化鈉(NaCl)MH平板藥敏紙片擴散法和VITEK32型自動微生物鑒定系統法差異無顯著性(P＞0.05)，與瓊脂稀釋法差異無顯著性(P>0.05)，而儀器法與瓊脂稀釋法差異無顯著性(P＞0.05)。結論：KB紙片擴散法,儀器法和作為MRS檢測推薦方法的含鹽瓊脂平板稀釋法對MRS的檢出率,三者差異均無顯著性，儀器法與KB紙片擴散法均可用于臨床常規實驗室MRS的檢測。

［關鍵詞］耐甲氧西林葡萄球菌；紙片擴散法；儀器法；瓊脂稀釋法

耐甲氧西林葡萄球菌(MethicillinresistantStaphylococcus，MRS)所致院內感染已成為全球范圍內一個越來越嚴重的問題［1］，有效預防和控制其感染的關鍵是及時準確地檢出MRS，為臨床合理選擇抗生素提供依據［2］，因而快捷、準確的檢測方法對快速采取有效的感染控制措施和MRS感染流行病學調查十分重要。MRS的檢測方法有苯唑西林紙片擴散法、肉湯稀釋法、瓊脂擴散法、Etest法、儀器法及PCR技術檢測mecA基因等［3］，我們將臨床分離的63株葡萄球菌用含4%氯化鈉(NaCl)MH平板苯唑西林紙片擴散法和VITEK32型自動微生物鑒定儀法進行檢測比較，并以含6μg/ml苯唑西林的瓊脂稀釋法為標準，評價其準確性。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1菌株及其來源自2006年1月至2006年5月從江醫二附院臨床患者的痰、血、尿、膿液、前列腺液及陰道分泌物等標本，經常規分離得到63株葡萄球菌，包括凝固酶陽性葡萄球菌50株，凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)13株。另MRS陽性參考菌株ATCC(R)43300，MRS陰性金黃色葡萄球菌ATCC25923，購自衛生部臨檢中心。

1.1.2苯唑西林紙片購自北京天壇生物制品有限公司，苯唑西林標準品購自重慶藥友制藥有限公司，SDS瓊脂糖、溴化乙錠、溶菌酶、蛋白酶K為美國Sigma產品，丙烯酰胺、雙丙烯酰胺TEMED和TBE為美國Gibcobrl公司產品。

1.1.3儀器法國生物梅里埃公司生產的VITEK32型鑒定系統及配套的GPSSV葡萄球菌藥敏檢測卡。

1.2方法

1.2.1含4%NaClMH平板紙片擴散法由于苯唑西林較甲氧西林穩定、不易失活，通常用苯唑西林代替甲氧西林測定葡萄球菌。配制0.5麥氏單位菌液接種于含4%NaCl的MH平板，貼1μg/片苯唑西林藥敏紙片，35℃、24h觀察結果(CNS孵育48h)金黃色葡萄球菌(SA)抑菌圈≥13mm為敏感，11mm～12mm為中介，≤10mm為耐藥，凝固酶陰性葡萄球菌≥18mm為敏感，≤17mm為耐藥。

1.2.2瓊脂稀釋法NCCLS推薦為測定耐甲氧西林葡萄球菌的參考方法，在含4%NaCl、6μg/ml苯唑西林MH平板中點種0.5麥氏單位菌液，經35℃、24h孵育檢查瓊脂表面有無細菌生長，只要有一個菌落生長即判為MRS。

1.2.3儀器檢測挑取待檢菌落，嚴格參照GPSSV卡說明書配制一定濃度菌懸液，置備GPSSV藥敏卡上機，用VITEK32型全自動微生物鑒定儀檢測結果。

1.2.4質量控制以金黃色葡萄球菌ATCC(R)43300為MRS陽性參考菌株，金黃色葡萄球菌ATCC25923為MRS陰性參考菌株及藥敏質控菌株與實驗菌株同時進行檢測。

2結果

3種方法對MRS的檢出率見表1。

表13種方法對MRS的檢出率（略）

對3種方法MRS檢出率進行χ2檢驗，含4%NaClMH平板藥敏紙片擴散法MRS檢出率與瓊脂稀釋法MRS檢出率差異無顯著性(χ2=1.16，P>0.05),VITEK32型儀器檢測法MRS檢出率與瓊脂稀釋法MRS檢出率差異也無顯著性(χ2=0.51，P＞0.05),同時紙片擴散法MRS檢出率與VITEK32型儀器檢測法MRS檢出率差異也無顯著性(χ2=0.13，P＞0.05)。

3討論

目前國內外雖然用以檢測MRS的方法很多，由于MRS本身對甲氧西林耐藥存在有不均一性，且甲氧西林不穩定，故常用苯唑西林代替甲氧西林來檢測MRS。由于紙片擴散法操作簡便、價格低廉，不需要特殊儀器設備，可以和普通藥敏實驗同時進行，在多種MRS檢測方法中，目前很多醫院臨床常規微生物實驗室仍在采用這種方法，從我們的實驗結果看，紙片擴散法與被NCCLS推薦為參考方法的瓊脂稀釋法對MRS檢出率差異無顯著性，因此可以用于臨床常規微生物實驗室,對MRS進行常規檢測。VITEK32型GPSSV藥敏卡方法簡單、快捷，從結果看其MRS檢出率與瓊脂稀釋法差異無顯著性，雖然其與紙片擴散法MRS檢出率也無明顯差異，但其檢測速度比紙片擴散法更快捷，可以及時給出準確的報告,節約了時間,因此評估GPSSV藥敏卡的準確性，為臨床找出一種準確而簡單、快捷的篩選MRS的方法是極有意義的，且VITEK32型微生物鑒定藥敏分析系統配套使用的GPSSV卡葡萄球菌藥敏檢測，其苯唑西林檢測孔含有4%NaCl，符合NCCLS推薦的檢測MRS的方法標準［4］，因此，儀器法GPSSV卡可用于葡萄球菌耐甲氧西林的檢測，且簡便準確、快速。所以紙片擴散法和儀器法均可用于醫院常規實驗室MRS檢測,但對有條件的實驗室建議采用儀器法，目前也出現了一些更準確可靠的方法，即對耐甲氧西林葡萄球菌進行基因層次的分型檢測，并也出現了商品化的幾種mecA基因乳膠檢測法［5］，也是目前可采用的較好的方法。

參考文獻：

［1］MulliganME.MurrayleisureKA.RibnerBS.etal.MethicillinresistantStaphylococcusaureus:aconsensusreviewofthemicrobiologyPathogenesisandepidemiologywithimplicationsforpreventionandmanagementAMJ［J］.Med1993;94:313.

［2］馬紀平，蘇建榮.耐甲氧苯青霉素葡萄球菌［J］.中華檢驗醫學雜志，1996，19：187189.

［3］趙玉坤，婁金麗，白華，等.耐甲氧西林葡萄球菌的臨床檢測［J］.中華檢驗醫學雜志，1996，19：361363.

［4］廖舫，范昕建，等.耐甲氧葡萄球菌HVR基因分型及其與耐藥性關系［J］.華西醫大學報，2001，32(2)：167171.

［5］孔海深，徐根云，等.乳膠凝集試驗快速檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌［J］.中華檢驗醫學雜志，2003，26：695696.