清腦降壓片質量標準研究論文

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【摘要】目的建立清腦降壓片的質量控制標準。方法采用薄層色譜法鑒別制劑中當歸、決明子；采用高效液相色譜法測定制劑中黃芩苷含量。結果當歸、決明子薄層圖譜斑點清晰，空白無干擾；黃芩苷在0.076～1.52mg范圍內呈線性關系，回歸方程Y=52.585X-0.2942，r=0.9999，平均回收率為100.36%。RSD為1.67%（n=9）。結論所建立的方法簡便、準確、快速、穩定、可靠，可作為該制劑的質量控制標準。

【關鍵詞】清腦降壓片；薄層色譜法；質量標準；黃芩苷

Abstract:ObjectiveToestablishthequalitystandardofQingnaoJiangyaTablet.MethodsToidentifyRadixAngelicaSinensisandSemenClssiaebyTLC.DeterminebaicalinbyHPLC.ResultsRadixAngelicaSinensisandSemenClssiaehadasharpchromatogrambyTLC.ThestandardcurveofbaicalinwasY=52.585X-0.2942，r=0.9999，linearrangewas0.076～1.52mg，averagerecoveryrateofbaicalinwas100.36%，RSDwas1.67%.ConclusionThemethodissimple，accurateandcanbeusedforthequalitycontrolofthegranules．

Keywords:QingnaoJiangya;Tablet；TLC；Qualitystandard；Baicalin

清腦降壓片的標準收載于《中國藥典》2005年版，處方由黃芩、當歸、決明子等13味中藥組成，具有平肝潛陽、清腦降壓的功效。用于肝陽上亢，血壓偏高，頭昏頭暈，失眠健忘等。目前《中國藥典》所記載的標準只對方中當歸和決明子進行薄層鑒別，尚未對其進行含量測定［1］，清腦降壓片為臨床上降血壓的常用藥，且有較大的開發前景［2］，該藥品需要更確切的質量標準對其質量進行有效的控制。黃芩為本方要藥，黃芩苷為其活性成分，具有清熱瀉火、降壓止咳等作用，用于高熱煩渴、高血壓、肺熱咳嗽等疾病，與本品的功能主治有密切關系，是本制劑的主要有效成分之一。因此，本研究運用TLC對制劑中的當歸和決明子進行定性檢測，并采用高效液相色譜法對制劑中黃芩苷進行含量測定，現報道如下。

1儀器與試藥

高效液相色譜儀∶DionexSummit(P680HPLCPump,ASI100AutomatedSampledInjector,UVD170U,STH585ColumnOven)Chromeleon數據處理系統，超聲波清洗機（SB-5200,寧波新芝科器研究所），實驗室專用超純水機(重慶利迪現代水技術設備有限公司)。

甲醇為色譜純試劑（Merck公司），水為超純水，其它試劑均為分析純。黃芩苷（批號∶110715200212）對照品均購自中國藥品生物制品檢定所。清腦降壓片(批號20041201，20041202，20041203)，由廣州中醫藥大學新藥研究開發中心提供；其它試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1薄層色譜鑒別

2.1.1當歸的薄層鑒別取本品10片，研細，加正己烷20ml，超聲處理30min，濾過，濾液濃縮至0.5ml,作為供試品溶液。另取當歸對照藥材0.1g，加正己烷10ml，同法制成對照藥材溶液。按不含當歸的處方，采用制劑工藝及上述供試品制備方法，制成缺當歸陰性樣品溶液。按照薄層色譜法（《中國藥典》2005年版Ⅰ部附錄ⅥB）試驗，吸取供試品溶液5～10μl及對照藥材溶液1μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷醋酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；缺當歸樣品溶液未見上述斑點。結果見圖1。

2.1.2決明子的薄層鑒別取本品10片，研細,稱取粉末1.5g，加甲醇10ml，浸漬1h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，再加鹽酸1ml,置水浴上加熱30min，立即冷卻，用乙醚分2次提取，20ml/次,合并乙醚液，蒸干，殘渣加氯仿1ml使溶解，作為供試品溶液。另取決明子對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。另取大黃素、大黃酚對照品，加甲醇制成每毫升各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。按不含決明子的處方，采用制劑工藝及上述供試品制備方法，制成缺決明子的陰性樣品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一以羧甲基纖維鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以正己烷醋酸乙酯甲酸(10∶1∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的黃色斑點；置氨蒸氣中熏后，斑點變為紅色。結果見圖2。

2.2黃芩苷的含量測定

2.2.1色譜條件色譜柱為KromasilC18(4.6mm×250mm，5μm)；流動相甲醇水磷酸（47∶53∶0.2）；檢測波長280nm；流速1.0ml/min；柱溫25℃。

2.2.2線性關系考察精密稱取黃芩苷對照品3.8mg，置50ml容量瓶中，用70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每毫升中含黃芩苷76μg）。分別精密吸取對照品溶液1，2，4，8，14，20μl進行色譜測定，按上述色譜條件測定峰面積，以進樣量（Y）對峰面積（X）進行線性回歸，得標準曲線。結果顯示，進樣量在0.076～1.52mg范圍呈線性關系，回歸方程為Y=52.585X-0.2942，相關系數r=0.9999。

2.2.3專屬性考察分別精密吸取線性考察項下對照品溶液、清腦降壓片供試品溶液、清腦降壓片缺黃芩苷供試品溶液各10μl進行色譜測定。色譜圖見圖3。結果顯示，在該色譜條件下，方中其他成分與黃芩苷分離良好，其他成分對黃芩苷含量測定無干擾。

圖1清腦降壓片中當歸的TLC圖譜（略）

圖2清腦降壓片中決明子的TLC圖譜（略）

圖3清腦降壓片中黃芩苷的HPLC圖譜（略）

2.2.4提取方法的考察

提取方法的選擇：取同一批號（20041201）樣品3份各1.5g，精密稱定，各加入70%乙醇50ml，分別超聲提取30min，水浴回流3h，考察不同提取方法對提取結果的影響。結果見表1。結果顯示，由于回流提取方法的溫度較高，加熱時間長，使黃芩苷水解，影響提取效果，超聲提取方法提取的黃芩苷含量較水浴回流提取的高，而且從操作簡便角度考慮，確定提取方法為超聲提取。

提取時間的考察：取同一批號（20041201）樣品3份各1.5g，精密稱定，各加入70%乙醇50ml，超聲提取，提取時間分別為30，60，90min，后處理同供試品制備方法，考察超聲時間對提取效果的影響。結果見表2。結果顯示，樣品采用提取時間30，60，90min的各成分含量相差不大，從節省時間方面考慮，確定提取時間為30min。

表1不同提取方法試驗結果（略）

表2不同提取時間試驗結果（略）

2.2.5供試品溶液制備方法取本品10片，研細，取1.5g,精密稱定，精密加入70%乙醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液5ml，置10ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.6精密度實驗精密吸取3.2項下對照品溶液4μl重復進樣6次，測得峰面積積分值，平均值為32.24mg/g,RSD＝1.99%。

2.2.7穩定性實驗精密吸取3.5項下供試品溶液，分別在0，2，4，6，12h吸取10μl進樣，測得峰面積積分值，平均值23.40%，RSD=1.27%。

2.2.8重復性實驗取清腦降壓片樣品（批號20041202），按照3.5項下供試品溶液制備方法操作，吸取10μl進樣，重復進樣6次，測得峰面積積分值，外標法計算含量，平均值為29.19mg/g，RSD=1.50%。

2.2.9加樣回收率實驗取已知含量的同一批樣品（批號20041202）0.5g，精密穩定，精密加入一定濃度的黃芩苷對照品溶液（28mg·ml-1）0.8，1.0，1.2ml，依法制備供試品溶液，HPLC測定峰面積，外標法計算含量。結果表明，黃芩苷的平均回收率為100.36%，RSD為1.67%。結果見表3。

表3黃芩苷回收率測定結果（略）

2.2.10樣品含量測定取清腦降壓片樣品（批號20041201，20041202，20041203），按供試品溶液制備方法制備，吸取10μl進樣，測定峰面積，計算含量。結果見表4。

表4樣品含量測定結果（略）

3討論

本研究在查閱文獻的基礎上，對樣品制備中提取條件（提取方法［3］、提取時間［4］）進行考查，其中較完善的提取方法為超聲提取；一方面說明了超聲提取技術作為一項比較先進、方便的提取方法，特別適用于實驗室研究。另一方面說明了本方法的耐用性和穩定性，在長時間提取中仍然不影響黃芩苷的含量。

該藥品為薄膜衣片，其處方中黃芩、當歸、決明子是該藥品的重要組成，而《中國藥典》2005年版只對決明子做了薄層鑒別，因此，本研究在此基礎上再對當歸進行薄層鑒別，并采用HPLC對黃芩苷進行含量測定。結果顯示，該方法用于該品種有良好的檢測結果，HPLC對黃芩苷的響應值靈敏；對當歸薄層鑒別的研究成熟，實驗結果理想；最后確定的方法穩定、可行，可以為質量標準的制定提供參考。

【參考文獻】

［1］國家藥典委員會.中國藥典［S］.北京：化學工業出版社，2000：620.

［2］郭玉紅.自擬清腦降壓湯對高血壓胰島素抵抗的影響［J］.中醫藥信息，2003,1(20)：48.

［3］戚雪勇，傅海珍，戴恩達，等.HPLC法測葛根芩連微丸中黃芩苷含量［J］.江蘇大學學報（醫學版），2006,16(1)：53.

［4］陳珍蘭，黃文峰，許則省，等.HPLC測定復方銀黃片中黃芩苷的含量［J］.現代食品與藥品雜志，2006，16(1)：40.