苜蓿總黃酮分析論文

時間:2022-02-28 05:02:00

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苜蓿總黃酮分析論文

1器材

1.1原料現蕾期紫花苜蓿〔品種為WL323〕采自于河北省保定市河北農業大學實驗基地。將苜蓿洗凈,40℃下烘干,用粉碎機在40目下粉碎成粉末。

1.2試劑與儀器乙醇、石油醚、蘆丁、實驗用水為去離子水。VIS-7220型紫外分光光度計,F2102微型植物粉碎機,SHB-IIIA循環水式多用真空泵,KQ2200DE型數控超聲波清洗器,756PC型紫外可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司),索氏提取器等。

2方法

2.1標準曲線的繪制準確配置100ml濃度為0.168mg/ml的蘆丁儲備液。準確吸取蘆丁儲備液0.00,1.00,2.00,4.00,6.00,8.00,10.00ml放入7個25ml的容量瓶中,用30%的乙醇定容到刻度,在266nm下測定吸光度并繪制標準曲線。標準曲線的線性回歸方程為Y=0.18222×C+0.05853(C:mg/ml),線性相關系數r=0.9988。

2.2單因素及正交實驗設計見表1。表1正交實驗因素水平

3結果

3.1單因素實驗結果與分析

3.1.1乙醇濃度的確定稱取1g苜蓿粉末3份,分別加入20ml的60%,70%,80%的乙醇,加熱回流提取2h,溶液冷卻后離心5min,再取0.5ml稀釋到10ml在266nm下測吸光度。測定吸光度分別為0.220,0.444,0.421。

隨乙醇濃度的增加,吸光度亦隨之增大。當濃度達到70%時,黃酮類化合物溶解度最大,吸光度最高。乙醇濃度再增加,黃酮類化合物溶解度減小,同時一些醇溶性雜質、色素、親脂性強的成分溶出量增加,這些成分與黃酮類化合物競爭同乙醇-水分子結合,從而導致黃酮化合物提取率下降。因此確定乙醇濃度為70%。

3.1.2提取方法的確定稱取1g苜蓿粉末3份,分別加入20ml70%的乙醇,分別用加熱回流萃取、索氏提取器提取、超聲萃取的方法提取2h,然后取部分溶液離心5min,再取0.5ml稀釋到10ml測吸光度。測定吸光度為0.443,0.499,0.538,因此確定提取方法為超聲提取法。

3.1.3提取時間的確定稱取1g苜蓿粉末5份,分別加入20ml70%的乙醇,用超聲萃取的方法分別提取0.5,1,1.5,2,2.5h,然后取部分溶液離心5min,再取0.5ml稀釋到10ml測吸光度。測定結果為0.321,0.385,0.531,0.527,0.520。可以確定提取時間為1.5h。

3.1.4料液比的確定稱取1g苜蓿粉末4份,按1∶10,1∶20,1∶30,1∶40(g/ml)的料液比加入70%的乙醇,用超聲提取的方法提取1.5h,然后取部分溶液離心5min,再取0.5ml稀釋到10ml測吸光度。測定結果0.512,0.537,0.602,0.497。可以確定料液比為1∶30(g/ml)。

3.1.5提取次數的確定稱取1g苜蓿粉末4份,分別加入70%的乙醇,用超聲提取法分別提取1,2,3,4次,1.5h/次,然后取部分溶液離心5min,再取0.5ml稀釋到10ml,測吸光度。測定結果0.525,0.545,0539,0.521。可以確定提取次數為兩次。

3.2正交實驗結果與分析在單因素實驗基礎上,采用L9(34)正交實驗對提取工藝條件進一步優化。結果見表2~3。

由表2和表3知,在超聲提取下,各因素對提取結果的影響大小依次為B>A>C>D,其中影響因素A、B表現為極顯著,因素C表現為顯著,因素D對結果的影響不顯著,從節省原料的角度考慮選擇60%的乙醇。所以最佳組合為A3B2C1D1。表2正交實驗設計及結果表3方差分析

3.3苜蓿中黃酮的測定準確稱取1.00g苜蓿粉末,加入30ml60%乙醇,用超聲法提取3次,1h/次。合并提取液定容到250ml。取1ml樣液,放入25ml容量瓶中,用30%的乙醇稀釋至刻度,試劑為空白參比。根據測得吸光度,利用標準曲線計算樣品中總黃酮含量為3.81%,3.75%,3.69%。

4結論

經正交實驗,確定了超聲法提取苜蓿總黃酮的最佳工藝為:60%乙醇,30∶1的液固比,提取3次,1h/次。測量結果表明苜蓿全草中含有總黃酮3.75%,苜蓿葉子中含有總黃酮4.85%。

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【摘要】目的檢測苜蓿中總黃酮的含量,并研究其提取工藝。方法通過加熱回流、索氏提取、超聲提取3種工藝比較,確定采用超聲提取。以總黃酮含量為考察指標,采用正交實驗法優化超聲提取的工藝條件。結果所考察因素中,苜蓿的提取工藝各因素影響程度為:料液比>提取次數>提取時間>乙醇濃度,最佳水平搭配為A3B2C1D1。結論苜蓿總黃酮最佳提取工藝參數為:超聲法提取,60%乙醇,30∶1的液固比,提取3次,1h/次。苜蓿全草中含有總黃酮3.75%,苜蓿葉子中含有總黃酮4.85%。

【關鍵詞】苜蓿;總黃酮;正交實驗