半邊旗中黃酮的提取論文

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1器材

島津LC-10A高效液相色譜儀(LC-10ATVP泵，SCL-10AVP控制器，SPD-10AVP紫外檢測器，CTO-10AVP柱溫箱)；紫外分光光度計(島津UV3101PC)；分析天平（Mettler,AE240）；旋轉蒸發儀（上海申越科學儀器公司）；四用紫外分析儀（上海顧村科學器材廠）。芹菜素和木犀草素標準品購于天津尖峰植物提取物公司，甲醇為色譜純（TEDIACompanyInc.USA），提取及精制用乙醇、氯仿、醋酸乙酯均為分析純（廣州大華試劑公司），其他化學試劑均為分析純。半邊旗植物采收于廣東湛江郊區，經廣東海洋大學楊燕君副教授鑒定為半邊旗。

2方法與結果

2.1半邊旗總黃酮的測定

2.1.1標準曲線繪制參照文獻［5］，采用紫外分光光度計法并適當調整。精密稱定干燥至恒重的蘆丁對照品2mg，加適量甲醇溶解，定容到10ml即得對照品儲備液。精密吸取0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml對照品儲備液于50ml容量瓶中，加甲醇至20ml，加入5%亞硝酸鈉溶液2ml，搖勻，放置5min，加入10%硝酸鋁溶液2ml，搖勻，放置6min，加入新配制的5%氫氧化鈉溶液20ml，用甲醇定容至50ml，用分光光度計于500nm處測定吸光度。以濃度(C)與相應的吸光度(A)進行回歸分析，得回歸方程A=0.1632C+0.0564，r=0.9976。

2.1.2樣品總黃酮的測定稱取干燥半邊旗粗粉10g，加入含溶劑的圓底燒瓶中，按表1的實驗設計進行回流提取，過濾，取濾液揮干溶劑，殘留物用甲醇溶解，定容到50ml，即得樣品溶液，用分光光度計測定500nm處的吸光度值，由標準曲線計算樣品總黃酮溶出量。

2.2半邊旗總黃酮的提取工藝考察

2.2.1篩選因素水平半邊旗總黃酮采用醇提法。經預試驗研究，提取過程中可能的影響因素包括溶劑用量（A）、乙醇濃度（B）、提取次數（C）以及提取時間（D）。以半邊旗總黃酮溶出量為考核指標，按4因素3水平進行正交實驗，因素水平見表1。表1因素水平表（略）

2.2.2正交實驗設計及結果按L9(43)正交表對半邊旗進行提取并測定總黃酮量。結果見表2～3。表2正交實驗結果及分析（略）表3最佳工藝驗證實驗（略）

由表2和表3分析結果可知，在半邊旗總黃酮的提取工藝中，各因素對提取效果的影響程度依次為B>C>A>D，且因素B（乙醇濃度）和C（提取次數）的影響具有統計意義，因此應選B2和C2，確定最優水平組合為A3B2C2D3，即溶劑為12倍量的80%乙醇回流提取2次、2h/次。

2.2.3放大的提取工藝驗證實驗稱取3份半邊旗干燥粗粉各500g，采用A3B2C2D3最佳工藝條件提取，按“

2.1.2”方法測定提取液總黃酮含量平均為1.68mg/g生藥。提取液減壓蒸去溶劑，所得浸膏60℃真空干燥72h，稱重得22.9g棕黑色固體，計算得此提取物中總黃酮質量分數為11%。

2.3半邊旗黃酮的精制半邊旗黃酮的精制采用溶劑抽提法。稱取上述粗黃酮適量，按重量比3∶2混入硅藻土，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯進行索氏抽提，分別抽提至無色，取醋酸乙酯溶液，減壓蒸干得棕黃色固體即為精制的半邊旗黃酮。

2.4半邊旗精制黃酮的測定采用峰面積歸一化法。以木犀草素和芹菜素混合溶液為對照品，以半邊旗精制黃酮為供試品，分別進樣高效液相色譜。以供試品中木犀草素與芹菜素的面積和與供試品出峰總面積的比值確定供試品中的黃酮含量。

色譜條件：色譜柱DiamonsilC18(150mm×4.6mm，5μm)；紫外檢測波長283nm；流動相為甲醇-水溶液，按照甲醇含量0～100%梯度洗脫；流速0.2ml/min；柱溫為35℃。

對照品溶液的配制：精密稱取木犀草素和芹菜素對照品各1mg，置10ml容量瓶中，加甲醇超聲溶解，定容至刻度，即為對照品溶液。

供試品溶液制備：稱取精制的半邊旗黃酮約2mg，置10ml容量瓶中，加甲醇超聲溶解，定容至刻度，即為供試品溶液。

吸取上述溶液5μl，分別進樣高效液相色譜。色譜圖見圖1～2。經峰面積歸一化法計算供試品中木犀草素與芹菜素的面積和與供試品出峰總面積的比值，計算得供試品中已知黃酮含量占84.3%。

3討論

以總黃酮溶出量為考核指標，半邊旗用乙醇提取有利于黃酮類化合物的溶出，提高溶劑乙醇的濃度，可加快半邊旗中總黃酮的溶出速度，從而使溶出量增加。但溶劑乙醇濃度過高時，黃酮物質的溶出量下降，這可能是溶劑乙醇濃度增加，反而使植物細胞脫水、皺縮，不易于溶脹破裂及總黃酮的溶出。

結合正交設計得出優選的最佳因素水平為12倍用量的80%乙醇溶劑回流提取2次，2h/次。正交統計結果表明，提取時間因素的水平對總黃酮含量影響最小，從節能、經濟考慮，樣品的提取工藝最終采用每次提取1.5h為佳。

采用最佳工藝條件放大提取半邊旗，所得提取物中總黃酮溶出量達1.68mg/g生藥，總黃酮的質量分數占11%。進一步的研究表明該提取物中還含有脂溶性色素及萜類物質，其質量分數分別占5%和78%。

半邊旗黃酮物質主要是木犀草素、芹菜素及其結合的糖苷［6］，精制后的半邊旗黃酮成分含量占84.3%，達到新藥開發的要求。有關藥理及臨床實驗的結果表明木犀草素在體內具有抗菌、抗病毒及降低血脂和膽固醇的作用［7］，芹菜素具有抗炎、降血壓、抗動脈硬化和血栓癥、抗菌、抗病毒以及抗氧化作用等多方面的生物學活性［8］。因此開展半邊旗黃酮的研究，為從該植物中開發新型中藥提供了依據，有利于天然植物資源的綜合利用。

【摘要】目的確定提取半邊旗總黃酮的最佳工藝條件，并精制以提高黃酮的含量。方法采用正交實驗法，考察溶劑用量、乙醇濃度、提取時間以及提取次數對半邊旗中總黃酮溶出量的影響，確定最佳提取條件，然后對半邊旗總黃酮進行精制，用高效液相色譜測定已知黃酮的含量。結果在所考察的因素中，對半邊旗總黃酮提取影響程度為乙醇濃度>提取次數>溶劑用量>提取時間，半邊旗總黃酮最佳提取條件為12倍用量80%乙醇回流提取2次、每次回流2h，精制后半邊旗黃酮含量達到84.3%以上。結論該工藝設計合理，操作簡單，生產成本低廉，有較高的工業生產應用價值。

【關鍵詞】半邊旗黃酮正交實驗精制

【參考文獻】

［1］謝宗萬.全國中草藥名鑒［M］.北京：人民衛生出版社,1996：53.

［2］MaurakamiT,TanakaN.Occurrence,structureandtaxonomicapplicationsoffermconstituents［J］.ProgChemOrganicNatProd,1988,54：1.

［3］張曉,崔燎，田中信壽，等.半邊旗有效成分及抗腫瘤活性研究［J］.中國藥學雜志，1997，32（1）：37.

［4］LiJH,CuiL.EffectsofantitumorcompoundsisisolatedfromPterissemipinnataLonDNAtopoisomerasesandcellcycleofHL-60cells［J］.ActaPhamacolSin,1999,20(6)：541.

［5］傅玉萍，茍占平，胡菊英，等.分光光度法測定不同時期半邊旗總黃酮含量［J］.時珍國醫國藥，2001，12（12）：1080.

［6］呂應年，吳科鋒，梁念慈，等.高效液相色譜法測定半邊旗中木犀草素的含量［J］.時珍國醫國藥，2007，18（1）：102.