雙黃連粉針劑研究論文

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【摘要】目的研究雙黃連粉針劑的化學成分，為明確雙黃連粉針劑藥效、毒效的物質基礎提供依據。方法應用各種色譜方法對其化學成分進行分離，并利用各種色譜和光譜技術鑒定所分離得到的化學成分。結果從雙黃連粉針劑中分離得到6個化合物，經鑒定分別為：黃芩苷（baicalin，Ⅰ）、大黃酚（chrysophenol，Ⅱ）、綠原酸（chlorogenicacid，Ⅲ）、蘆丁（rutin，Ⅳ）、異虎耳草素（isopimpinellin，Ⅴ）和槲皮素（quercetin，Ⅵ）。結論除黃芩苷（baicalin，Ⅰ）、綠原酸（chlorogenicacid，Ⅲ）外，其它4種化合物均系從該制劑中首次分得。

【關鍵詞】雙黃連粉針劑；化學成分；分離鑒定

Abstract：ObjectiveTostudythechemicalconstituentsfromShuanglhuanglianinjection.MethodsShuanghuanglianinjectionwasmanufacturedaccordingtoChinesePharmacopoeia(2005),andseparatedwithcolumnchromatography.Structuresofthecompoundswereidentifiedbytheirphysical-chemicalcharacterandspectralanalysis.ResultsSixcompoundswereisolatedfromShuanghuanglianInjection.Theywerebaicalin(Ⅰ),chrysophenol(Ⅱ),chlorogenicacid(Ⅲ),rutin(Ⅳ),isopimpinellin(Ⅴ)andquercetin(Ⅵ).ConclusionCompoundsⅡ,Ⅳ,ⅤandⅥwereisolatedfromShuanghuanglianinjectionforthefirsttime.

Keywords：Shuanghuanglianinjection;Chemicalconstituents;Isolationandidentification

雙黃連粉針劑是由金銀花、黃芩、連翹3味中藥經提取精制而成的純中藥復方制劑，具有清熱解毒、清涼解表的功能，主要用于外感風熱引起的發熱、咳嗽以及多種上呼吸道感染病癥，已成為中醫藥治療呼吸道感染性疾病的首選藥物之一，該藥是具有抗病毒及抗細菌雙重治療作用的藥物，199212被國家中醫藥管理局指定為全國中醫醫院急診首批急診必備中成藥［1］。但隨著用藥人群的增加，其不良反應報道也日益增多，主要表現在過敏反應（包括皮膚反應、過敏性休克、血管神經性水腫等）；消化系統反應和靜脈炎及其它等［2］。導致其不良反應產生的原因有個體、制劑、用法與用量等諸多因素，本研究從制劑本身入手，對其化學成分進行分離、鑒定，探索其藥效、毒效的物質基礎。本文報道了其中6個化合物的分離和結構鑒定，其中化合物Ⅱ，Ⅳ，Ⅴ和Ⅵ為首次在該制劑中分得。

1儀器和材料

XT-4型顯微熔點測定儀(溫度計未校正)；JASCOFI/IR-480PlusFourierTransform紅外光譜儀；BRUKERDRX400型核磁共振儀；FinniganLCQAdvantageMAX質譜儀；制備型高效液相色譜儀（Gilson公司），柱層析硅膠為青島海洋化工廠產品；硅膠GF254薄層預制板、制備薄層為煙臺化學工業研究所產品；所用化學試劑均為分析純。連翹來源于河南，金銀花來源于山東，黃芩來源于河北，購于廣州市健禾藥材公司，由本室鑒定。

2方法與結果

2.1制備與分離按2005年版《中國藥典》注射用雙黃連（凍干粉）項下制法，取一定比例金銀花、連翹和黃芩共15kg。將黃芩水提，然后采用酸沉堿溶法處理，所得沉淀乙醇洗滌后干燥，備用；再將金銀花和連翹混和水提，然后采用水提醇沉法處理，濾取上清液，回收乙醇并濃縮得稠浸膏，備用。將兩部分原料混和，溶解于水，冷凍干燥，即得注射用雙黃連制劑。取自制注射用雙黃連甲醇溶液，濃縮，經反復聚酰胺（乙醇-水梯度洗脫）、硅膠柱層析（氯仿-甲醇梯度洗脫），結合制備薄層和制備液相分離得到化合物Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ和Ⅵ。

2.2鑒定

2.2.1化合物Ⅰm.p.260～261℃。鹽酸-鎂粉反應陽性。IR（KBr）γcm-1：3380，3260，1660，1600，1572，1551，1495，1451，1407，1253，1201，1146，912。ESI-MS（m/z）：446（M）+，445（M-H）—。1H-NMR（DMSO-d6）δppm：12.58（1H，s，5-OH），8.63（1H，s，6-OH），8.07（2H，dd，J=1.8Hz，J=8.0Hz，2′、6′-H），7.60（3H，m，3′、4′、5′-H），7.05（1H，s，3-H），7.00（1H，s，8-H），5.48（1H，s，1″-H）。13C-NMR（DMSO-d6）δppm：163.5（C-2），106.1（C-3），182.5（C-4），146.8（C-5），129.1（C-6），151.3（C-7），93.8（C-8），149.2（C-9），104.7（C-10），130.8（C-1′），126.3（C-2′），129.1（C-3′），132.0（C-4′），129.1（C-5′），126.3（C-6′），100.0（C-1″），72.8（C-2″），75.3（C-3″），71.3（C-4″），75.5（C-5″），170.0（C-6″）。以上ESI-MS、1H譜和13C譜數據與文獻［3］基本一致，故確定化合物Ⅰ為黃芩苷（baicalein）。

2.2.2化合物Ⅱ黃色片狀結晶（氯仿），mp.190～192℃。IR（KBr）γcm-1：3432，1677，1606，1569，903，868，839。EI-MS（m/z）：254，226，197。1H-NMR（CDCl3）δppm：12.07（1H，s，8-OH），11.95（1H，s，1-OH），7.78（1H，d，J=7.5Hz，5-H），7.64（1H，t，J=8.2Hz，6-H），7.60（1H，brs，4-H），7.26（1H，d，J=8.6Hz，7-H），7.06(1H，s，2-H)，2.45（3H，s，-CH3）。13C-NMR（CDCl3）δppm：162.7（C-1），124.5（C-2），149.3（C-3），121.3（C-4），119.9（C-5），136.9（C-6），124.3（C-7），162.5（C-8），192.4（C-9），181.8（C-10），133.3（C-4a），133.7（C-10a），115.9（C-8a），113.8（C-9a），22.2（-CH3）。以上數據與文獻［4］數據基本一致，故鑒定化合物Ⅱ為大黃酚（chrysophenol）。

2.2.3化合物Ⅲ無色針狀結晶（甲醇）,mp.207～209℃。IR（KBr）γcm-1：3342，3500～2500，2924，1680，1633，1596，1524。EI-MS（m/z）：354，336，180，163，136。1H-NMR（CD3OD）δppm：7.55（1H，d，J=16Hz，7′-H），7.04（1H，d，J=2.0Hz，2′-H），6.95（1H，dd，J=8.4、2.0Hz，6′-H），6.77（1H，d，J=8.4Hz，5′-H），6.25（1H，d，J=16Hz，8′-H），2.12（4H，m，2，6-H），3.75（1H，dd，J=8.4、3.2Hz，4-H），4.17（1H，m，5-H），5.32（1H，m，3-H）。13C-NMR（CD3OD）δppm：177.8（COOH），169.4（C-9′），150.3（C-4′），147.8（C-7′），147.6（C-3′），128.6（C-1′），123.7（C-6′），117.2（C-5′,8′），116.0（C-2′），76.9（C-1），74.2（C-4），72.7（C-5），72.0（C-3），39.5（C-2），39.0（C-6）。上述數據經與文獻［5，6］對照，基本一致，故確定化合物Ⅲ為綠原酸（chlorogenicacid）。

2.2.4化合物Ⅳ淡黃色粉末（甲醇），m.p.176～178℃。鹽酸-鎂粉反應陽性。IR（KBr）γcm-1：3423，2938，1655，1601，1506，1458，1204，910。ESI-MS（m/z）：610(M)+。1H-NMR（DMSO-d6）δppm：6.20（1H，d，J=2.0Hz，6-H），6.39（1H，d，J=2.0Hz，8-H），6.85（1H，d，J=8.8Hz，5′-H），7.56（1H，d，J=2.1Hz，2′-H）,7.54（1H，dd，J=8.8、2.1Hz，6′-H），5.35（1H，d，J=7.4Hz，1″-H），5.24（1H，s，1′″-H）。13C-NMR（DMSO-d6）δppm：156.6（C-2），133.3（C-3），177.3（C-4），161.2（C-5），98.6（C-6），164.0（C-7），93.5（C-8），156.4（C-9），104.0（C-10），121.5（C-1′），115.2（C-2′），144.7（C-3′），148.4（C-4′），116.3（C-5′），121.2（C-6′），101.2（C-1″），74.1（C-2″），76.4（C-3″），76.4（C-4″），75.9（C-5″），67.0（C-6″），100.7（C-1′″），70.5（C-2″′），70.3（C-3′″），71.8（C-4″′），68.2（C-5′″），17.7（C-6″′）。以上數據經與文獻［7，8］對照，確定化合物Ⅳ為蘆丁（rutin）。

2.2.5化合物Ⅴ淺黃色針狀結晶（丙酮），m.p.145℃～146℃。異羥污酸鐵反應陽性。IR（KBr）γcm-1：1719，1593，1483，1350，1204，1145，1072，824，755。ESI-MS（m/z）：246（M）+。1H-NMR（CDCl3）δppm：8.12（1H，d，J=9.6Hz，4-H），7.63（1H，d，J=2.4Hz，2′-H），6.99（1H，d，J=2.4Hz，3′-H），6.28（1H，d，J=9.6Hz，3-H），4.17、4.16（6H，s，5、8-OCH3）。13C-NMR（CDCl3）δppm：160.4（C-2），150.1（C-7），145.2（C-2′），144.3（C-5），143.8（C-9），139.4（C-4），128.3（C-8），114.9（C-6），113.0（C-3），107.8（C-10），105.1（C-3′），61.7、60.9（5、8-OCH3）。以上光譜數據與文獻［9，10］報道的異虎耳草素（5，8-二甲氧基補骨脂素）數據對照基本一致，故鑒定化合物Ⅴ為異虎耳草素（isopimpinellin）。

2.2.6化合物Ⅵ黃色粉末結晶（乙醇），溫度達310℃以上分解。鹽酸-鎂粉反應陽性。IR（KBr）γcm-1：3377，3296，1671，1616，1552，1514，1458，1429，1365，1212，1095，810。ESI-MS（m/z）：302（M）+，301（M-H）+。1H-NMR（DMSO-d6）δppm：12.48（1H，s，5-OH），10.73（1H，s，7-OH），9.53（1H，s，3-OH），9.29（1H，s，3′-OH），9.25（1H，s，4′-OH），7.68（1H，d，J=2.0Hz，2′-H），7.53（1H，dd，J=8.4、2.0Hz，6′-H），6.89（1H，d，J=8.4Hz，5′-H），6.40（1H，d，J=2.0Hz，8-H），6.19（1H，d，J=2.0Hz，6-H）。13C-NMR（DMSO-d6）δppm：146.8（C-2），135.7（C-3），175.8（C-4），160.7（C-5），98.1（C-6），163.8（C-7），93.3（C-8），156.1（C-9），103.0（C-10），121.9（C-1′），115.6（C-2′），145.0（C-3′），147.7（C-4′），115.1（C-5′），119.9（C-6′）。以上光譜數據與文獻［11，12］報告的槲皮素相一致，故確定化合物Ⅵ為槲皮素（quercetin）。

3討論

目前對雙黃連粉針劑化學成分的分離工作進行得不多，本文報道了其中6種成分的分離與鑒別工作，后續研究尚在進行。結合藥理、毒理實驗明確雙黃連、粉針劑的物質基礎，對其“減毒增效”，二次開發應用具有十分重要的作用。

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