六靈解毒丸質量標準論文

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【摘要】目的建立六靈解毒丸質量標準。方法采用TLC法對牛黃進行了鑒別,用HPLC法測定華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量。采用ZorbaXC18柱，流動相為乙腈-0.5%磷酸二氫鉀溶液(35∶65)（用磷酸調PH值為3.2）,檢測波長為296nm。結果TLC色譜斑點清晰。華蟾酥毒基在0.3116～2.4928μg之間呈良好的線性關系，脂蟾毒配基在0.3096～2.4768μg之間呈良好的線性關系。華蟾酥毒基平均回收率為99.18%，RSD=1.55%。脂蟾毒配基平均回收率為103.30%，RSD=1.73%。結論所建立的方法簡便可行，重現性好，為六靈解毒丸質量控制提供了方法。

【關鍵詞】六靈解毒丸華蟾酥毒基脂蟾毒配基質量標準

QualityStandardforLiulingjieduPill

Abstract：ObjectiveToestablishaqualitystandardforLiulingjiedupill.MethodsCalculusbovisinthismedicinewasidentifiedbyTLC.CinobufaginandResibufogenininLinlingjiedupillweredeterminedbyHPLC,usingZorbaxC18columnandCH3CN∶KH2PO4：35∶65（adjustpH3.2）asthemobilephase.Thedetectivewavelengthwas296nm.ResultsTheTLCspotsdevelopedwerequiteclear.Cinobufaginandresibufogeninshowedagoodlinearrelationshipatarangeof0.3116～2.4928μgand0.3096～2.4768μg.TheaveragerecoveryofCinobufaginwas99.18%andRSDwas1.55%.TheaveragerecoveryofResibufogeninwas103.30%andRSDwas1.73%.ConclusionThemethodcanbeusedforthequalitycontrolofLiulingjiedupill.

Keywords:Liulingjiedupill；Cinobufagin；Resibufogenin；Qualitystandard

六靈解毒丸為部頒藥品標準中藥成方制劑收載品種，具有清熱解毒、消腫止痛的功效。臨床廣泛用于咽喉疾病。蟾酥為方中主要藥物，也為毒性藥材。為更好地控制藥品質量，根據國家藥品標準提高質量標準行動計劃的有關要求，增加了牛黃的薄層色譜鑒別和華蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量測定。

1儀器與試藥

AL204萬分之一電子天平(梅特勒公司)；Agilent1100高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；KQ100B型超聲波清洗器(昆山市超聲器有限公司)；華蟾酥毒基和脂蟾毒配基標準品(購于中國藥品生物制品檢定所，批號為110803200504和07189306，供含量測定)；乙腈、甲醇、磷酸為色譜純，磷酸二氫鉀為分析純。

2方法與結果

2.1牛黃的薄層鑒別［1，4］取本品約2g，研細，置10ml量瓶中，加10%冰醋酸乙醇溶液適量，充分振搖后，加10%冰醋酸乙醇溶液定容至刻度，靜置24h，取上清液作為供試品溶液。取牛黃對照藥材0.1g，同法制得對照藥材溶液。再取膽酸對照品，加10%冰醋酸乙醇溶液制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。取除牛黃外的藥材，按照樣品制備工藝制成陰性對照樣品，再取陰性對照樣品按照供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液吸取上述溶液各5μl，分別點于同一塊硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯-甲醇-冰醋酸(6∶32∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。

2.2含量測定

2.2.1色譜條件［1～3］以乙腈-0.5%磷酸二氫鉀溶液(35∶65)（用磷酸調pH值為3.2）為流動相；檢測波長296nm；理論板數按華蟾酥毒基、脂蟾毒配基峰計算應分別不低于4000。

2.2.2標準曲線的制備精密稱取華蟾酥毒基對照品適量，加甲醇制成濃度為0.1558mg/ml的對照品溶液，分別進樣2，4，8，12，16，20μl。精密稱取脂蟾毒配基對照品適量，加甲醇制成濃度為0.1548mg/ml的對照品溶液，分別進樣2，4，8，12，16，20μl。以對照品濃度為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制成工作曲線，計算得華蟾酥毒基回歸方程為：y=771x+30(r=0.9999)，脂蟾毒配基回歸方程為：y=794.6x-10.1(r=0.9999)。結果表明，華蟾酥毒基在0.3116～2.4928μg之間呈良好的線性關系，脂蟾毒配基在0.3096～2.4768μg之間呈良好的線性關系。

2.2.3供試品溶液的制備取六靈解毒丸樣品約90mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10ml，稱定重量，超聲處理50min(功率250W，頻率40kHz)，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.4精密度實驗取同一供試品溶液，分別進樣測定6次，華蟾酥毒基峰面積積分值的RSD為0.62%，脂蟾毒配基峰面積積分值的RSD為0.95%，表明儀器有很好的精密度。

2.2.5重復性實驗取同一批六靈解毒丸樣品6份，按照供試品溶液的制備方法分別處理，測定華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的平均總含量為12.0116mg/g，RSD為1.69%。結果表明重復性良好。2.2.6穩定性實驗取同一樣品溶液，分別在0，1，2，4，8，12h測定，樣品含量的RSD＝0.83%。表明樣品在12h內穩定。

2.2.7加樣回收率實驗采用加樣回收法，取已知華蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量的六靈解毒丸（華蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量分別為5.8043mg/g和6.2072mg/g）6份，每份約50mg，精密稱定，分別添加2ml華蟾酥毒基和脂蟾毒配基混合對照品溶液（濃度分別為0.1529mg/ml和0.1458mg/ml），置于10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)40min，放冷，用甲醇定容至刻度，濾過，取續濾液，分別進樣20μl，計算回收率。華蟾酥毒基平均回收率為99.18%，RSD=1.55%；脂蟾毒配基平均回收率為103.30%，RSD=1.73%。結果見表1～2。表1華蟾酥毒基回收實驗結果（略）表2脂蟾毒配基回收率實驗結果（略）

2.2.8樣品含量測定取六靈解毒丸樣品約90mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動相10ml，稱定重量，搖勻，超聲處理4min(功率250W，頻率40kHz)，放冷后，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，進樣20μl。

用上述條件測定了3批六靈解毒丸中的華蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量。結果見表3。表3樣品含量測定結果（略）

3討論

供試品溶液制備方法試驗中,對提取方法，提取溶劑、提取時間及溶劑用量進行了篩選。實驗結果表明樣品以流動相為溶劑,超聲提取時間為40min即可。

用HPLC法測定六靈解毒丸中的華蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量,方法先進,操作簡便,結果準確,可作為六靈解毒丸的質量控制方法。

【參考文獻】

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