亳菊生產(chǎn)技術(shù)論文

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1亳菊脫毒生產(chǎn)技術(shù)

1.1培養(yǎng)基準(zhǔn)備

基本培養(yǎng)基為PP，添加6-BA0.05mg/L、白砂糖20g/L、瓊脂粉4.5g/L，將各種物質(zhì)混合后定容，pH調(diào)節(jié)至6.0，分裝到350mL廣口瓶中，每瓶裝50mL，在壓力0.1MPa、溫度121℃下滅菌15min，冷卻后備用。

1.2材料采集和消毒

本試驗取尚未木質(zhì)化的亳菊莖尖作外植體。選取長2cm左右的嫩芽，去掉外邊葉片后，用洗衣粉水浸洗1～2min，然后用流水沖洗30min。在超凈工作臺上用75%酒精消毒30s，再用0.05%升汞溶液消毒10min，無菌水沖洗6次，用無菌紗布把材料表面水吸干后，置于已消毒的燒杯中備用。

1.3莖尖剝?nèi)『团囵B(yǎng)

在解剖顯微鏡下，左手拿鑷子將芽夾住，右手用解剖針逐層剝?nèi)⊥鈱尤~片，直至留1～2個葉原基。將莖尖迅速切下，接種到莖尖生長培養(yǎng)基PP+6-BA0.05mg/L+2%糖上，每瓶接種1個莖尖。為確保莖尖的成活率，整個剝?nèi)∵^程應(yīng)在較短時間內(nèi)完成。莖尖培養(yǎng)分2個過程，先置于溫度23～25℃下暗培養(yǎng)3d，再在光照強度2200～2500lux的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，光照時間12h/d。培養(yǎng)10d后，莖尖開始長大，并逐漸轉(zhuǎn)綠，30d后長成小植株，每個成活的莖尖單獨建系。

2增殖培養(yǎng)

亳菊組培苗增殖采用2種方式。第1種方式是采用芽繁芽的方式進行增殖，將啟動培養(yǎng)中獲得的小芽接種到培養(yǎng)基PP+6-BA0.1～0.5mg/L+2%糖中，在溫度23～25℃、光照強度2200～2500lux、光照時間12h/d的條件下培養(yǎng)30d，增殖比例達1∶4以上。這種增殖方法使培養(yǎng)基中的細(xì)胞分裂素含量相對較高，極易出現(xiàn)弱苗，且玻璃苗的比例較高。第2種增殖方式是通過單株切段的方式進行微扦插，將培養(yǎng)的單株切割成1cm左右的頂芽和莖段，莖段帶1～2片葉，接種到培養(yǎng)基PP+6-BA0.02mg/L+2%糖中，頂芽和莖段分開接種。頂芽接種7d后開始生長，30d后芽生長至5～6cm；莖段接種后10d左右，側(cè)芽開始生長，培養(yǎng)30～35d后，側(cè)芽生長至4～5cm，然后進行重復(fù)微扦插，平均繼代增殖比例可達1∶3.5以上。在實際生產(chǎn)中一般采取第2種增殖方式。

3生根培養(yǎng)

將頂芽或莖段接種到生根培養(yǎng)基PP+IBA0.05mg/L+2%糖中，接種后10d開始陸續(xù)長根，同時芽開始生長，培養(yǎng)30d后，長至高度4～5cm、根3～5條、根長2～3cm，生根率可達100%。

4脫毒組培苗移栽

將長好根的試管苗取出，洗掉根部的培養(yǎng)基，再移栽到裝好基質(zhì)（泥炭和珍珠巖以體積比3∶1拌勻）的50孔穴盤中。組培苗移栽至穴盤后澆透水，苗床應(yīng)搭小管棚覆膜，保持80%～90%的空氣濕度，并覆蓋防蟲網(wǎng)。7d后逐漸掀開薄膜放風(fēng)，然后澆1次透水，15d后完全除去薄膜，并視基質(zhì)的干濕程度澆水。30d左右完成組培苗的馴化過程，使成活率達90%以上。

5病毒檢測

亳菊病毒病的檢測采用田間觀察法和指示作物法。田間觀察法具有一定的缺陷，這是因為大多數(shù)病毒病癥狀為花葉、黃化、畸形，在癥狀上容易與非侵染性病害（如缺素癥、空氣污染所引起的病害等）相混淆。指示植物法是亳菊病毒檢測的基本手段，亳菊體內(nèi)的一些病毒可采用汁液接種法接種到其他草本植物（指示植物）上，然后根據(jù)指示植物的感病表現(xiàn)，研究病毒的生物屬性特征并進行種類鑒定，常見的指示植物為黃瓜、中國構(gòu)祀、千日紅等。采用本研究的脫毒種苗獲得技術(shù)生產(chǎn)的各株系種苗，均未檢測出帶病毒。

作者:陳權(quán)肖建梅孫建單位:上海孫橋現(xiàn)代溫室種子種苗有限公司上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院