青翹提取物的抑菌活性作用探索

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摘要：目的研究青翹提取物的抑菌活性。方法以金色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念球菌為代表菌種，用K-B紙片擴(kuò)散法對(duì)青翹提取物的抑菌活性進(jìn)行研究。結(jié)果青翹不同提取物對(duì)供試菌均有一定的抑菌活性，其中醋酸乙酯提取物和正丁醇提取物具有較強(qiáng)的抑菌活性。提取物對(duì)金色葡萄球菌的抑菌活性與提取物濃度呈正比，對(duì)大腸桿菌和白色念球菌的抑菌活性與提取物濃度不呈簡單的正比關(guān)系。結(jié)論青翹不同提取物對(duì)金色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念球菌均有抑制作用。

關(guān)鍵詞：青翹；提取物；抑菌活性

連翹為木犀科(Oleaceae)連翹屬(Forsythia)植物連翹Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果實(shí)。連翹藥材商品分為“青翹”和“老翹”。果實(shí)初熟尚帶綠色時(shí)采收蒸熟，曬干，習(xí)稱“青翹”；果實(shí)熟透顏色發(fā)黃時(shí)采收，曬干，習(xí)稱“老翹”［1］。

連翹是中國臨床常用傳統(tǒng)中藥之一，又名黃花條、連殼、青翹、落翹、黃奇丹等。已有的研究報(bào)道表明，連翹種子揮發(fā)油對(duì)3種真菌有明顯的抑制作用，陜西產(chǎn)青翹、老翹和連翹葉均對(duì)大腸桿菌和金色葡萄球菌也有較好的抑制作用［2～6］，上述研究報(bào)道都沒有對(duì)連翹的提取物進(jìn)行系統(tǒng)的抑菌活性研究。本研究首次以山西道地藥材青翹作為研究對(duì)象，比較其不同極性提取物的抑菌活性，旨在為臨床應(yīng)用連翹提供理論依據(jù)。

1材料與儀器

1.1藥材青翹200806購自山西省安澤縣連翹GAP生產(chǎn)基地，植物標(biāo)本由山西省藥檢所郭文菊研究員鑒定，植物標(biāo)本現(xiàn)存于山西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心。

1.2試劑與菌株金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus、大腸桿菌Escherchiacoli、白色念珠菌Candidaalbicans，均由山西省藥品檢驗(yàn)所提供。營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，購自杭州天和微生物試劑有限公司；牛肉膏購自北京市海淀區(qū)微生物培養(yǎng)基制品廠，蛋白胨購自北京奧特博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，慶大霉素細(xì)菌藥敏試紙購自杭州天和微生物試劑有限公司，所用試劑均為分析純。

1.3儀器與設(shè)備LR4001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國Heidolph公司）；CA-111型冷卻水循環(huán)系統(tǒng)（上海愛郎儀器有限公司）；SHB-88型水循環(huán)真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；DHP-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；DSX-280B型手提式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）；BBS-DSC型潔凈工作臺(tái)(上海巴艾貝斯科技有限公司)；BS224S-L型電子分析天平（德國Sartorius公司）。

2方法

2.1青翹提取物的制備取青翹1kg，粉碎，用95%乙醇加熱至70℃回流提取4次，3h/次，減壓濃縮回收溶劑至無醇味，得總提取物320g。總提取物經(jīng)水懸浮后，用石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇依次萃取，得到的石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇萃取相及萃取后水相提取。取適量各部位浸膏及總浸膏，干燥成粉末，備用。

2.2抑菌活性分析

2.2.1藥敏紙片的制備［4］

將普通定性濾紙用打孔機(jī)打成若干圓形紙片，直徑為6mm，置于干燥潔凈的試管內(nèi)，放入壓力蒸氣滅菌器中經(jīng)121℃，20min高壓滅菌，干燥。分別取干燥后的不同待試樣品0.5，1.0，2.0mg，用合適的溶劑溶解，將濾紙片放入溶液中，反復(fù)吸取、晾干，直至將溶液吸干，備用。

2.2.2培養(yǎng)基的制備固體培養(yǎng)基：用天平準(zhǔn)確稱取36g營養(yǎng)瓊脂，加入蒸餾水1000ml，加熱并不斷攪拌，使瓊脂完全溶解。然后放入壓力蒸氣滅菌器中經(jīng)121℃，20min高壓滅菌，取出趁熱倒入經(jīng)過高壓滅菌的培養(yǎng)皿中，厚度約3～5mm,冷卻凝固后備用。

液體培養(yǎng)基［7］：用天平準(zhǔn)確稱取牛肉膏0.3g，蛋白胨1g，氯化鈉0.5g，加入蒸餾水100ml，加熱并不斷攪拌，用1%NaOH溶液調(diào)節(jié)pH7.2～7.4，然后放入壓力蒸氣滅菌器中經(jīng)121℃，20min高壓滅菌，分裝于試管中，備用。

2.2.3菌懸液的制備用接種環(huán)分別取各菌種一環(huán)，接種于液體培養(yǎng)基中，放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，用滅菌生理鹽水分別稀釋至1×10-5CFU/ml濃度，備用。

2.2.4藥物抑菌作用測定采用K-B紙片擴(kuò)散法［8］，用無菌移液管吸取稀釋好的菌懸液0.1ml，置于培養(yǎng)基中央，用涂布棒涂布均勻。用無菌鑷子夾取含藥濾紙片貼在培養(yǎng)基表面，以含藥量為10μg的慶大霉素細(xì)菌藥敏試紙為陽性對(duì)照。放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，觀察抑菌圈，并用十字交叉法測量抑菌圈直徑,結(jié)果以毫米(mm)表示,見表1～3。每種不同含藥量的樣品對(duì)3種菌均做3組平行對(duì)照，結(jié)果取平均值。

3結(jié)果

用青翹不同提取物，以細(xì)菌大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和霉菌白色念珠菌作為指示菌進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見表1～3。表1青翹不同提取物對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈活性，表2青翹不同提取物對(duì)大腸桿菌的抑菌圈活性，表3青翹不同提取物對(duì)白色念珠菌的抑菌圈活性（略）。

從表1看出，除氯仿提取物外，其余各提取物均對(duì)金黃色葡萄球菌均有抑制作用，其活性比較：正丁醇提取物﹥醋酸乙酯提取物﹥石油醚提取物≈95%乙醇提取物﹥水提取物。并且，隨著紙片含藥量的增加，抗菌作用增強(qiáng)。

從表2可知，青翹不同提取物對(duì)大腸桿菌均有一定抑制作用。總體來看，氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和95%乙醇提取物對(duì)大腸桿菌抗菌活性較強(qiáng)，其次為石油醚提取物。并且，石油醚提取物與95%乙醇提取物在含藥量為0.5mg時(shí)抗菌活性最強(qiáng)，氯仿提取物在含藥量為1.0mg時(shí)抗菌活性最強(qiáng)，而其它提取物含藥量為2.0mg時(shí)抗菌活性最強(qiáng)。這與文獻(xiàn)報(bào)道的連翹乙醇提取物的濃度與抑菌作用強(qiáng)弱之間并不呈簡單的正比關(guān)系［6］相一致，提示我們多種成分同時(shí)存在時(shí)可能僅存在“最適抑菌濃度”。

從表3可知，青翹不同提取物對(duì)白色念珠菌均有一定抑制作用。總體來看，醋酸乙酯提取物和正丁醇提取物對(duì)白色念珠菌的抑制作用較強(qiáng)，其次為95%乙醇提取物。所有提取物的抗菌作用受含藥量改變的影響不大，并且，紙片含藥量為0.5mg時(shí)，顯示出略強(qiáng)的抗菌活性。與青翹提取物對(duì)大腸桿菌的抑菌作用一樣，說明了濃度與抑菌作用強(qiáng)弱之間并不呈簡單的正比關(guān)系。

4討論

本研究表明，青翹不同提取物對(duì)3種菌株均表現(xiàn)了不同程度的抑菌作用，抑菌作用的順序?yàn)榻瘘S色葡萄球菌﹥大腸桿菌﹥白色念珠菌。金黃色葡萄球菌是目前引起上呼吸道感染的常見菌，這與中醫(yī)藥認(rèn)為連翹具有清熱解毒功效，以及連翹治療呼吸道感染的臨床應(yīng)用基本吻合，臨床上一些感染性疾病的最終治愈還是依賴清熱藥的抗病原體作用，因此抗菌是這類藥物的主要藥理作用［6］。對(duì)于金黃色葡萄球菌和白色念珠菌，抑菌活性成分集中于正丁醇和醋酸乙酯提取物中；而對(duì)于大腸桿菌，抑菌活性成分集中于醋酸乙酯和氯仿提取物中。這說明青翹中極性較大的成分具有較強(qiáng)的抑菌活性，是其發(fā)揮清熱解毒功效的物質(zhì)基礎(chǔ)。青翹提取物對(duì)大腸桿菌的抑菌作用研究表明，95%乙醇、石油醚與氯仿提取物濃度與抗菌作用強(qiáng)弱之間不呈正比關(guān)系，查閱相關(guān)資料［5］，推測其原因可能是青翹提取物中的某些極性小的成分提供了菌體生長所需的“營養(yǎng)物質(zhì)”，或是這些極性小的成分刺激了菌體的生長。由于中藥成分的復(fù)雜性和各種成分性質(zhì)的差異性，使藥物作用過程和機(jī)理更加復(fù)雜。因此，以往參照抗生素求最小抑菌濃度(MIC)的方法很難準(zhǔn)確地反映青翹的抑菌活性，應(yīng)該尋求它的“最適抑菌濃度”。

研究結(jié)果可以指導(dǎo)青翹中抑菌活性成分的分離純化，為更好地發(fā)揮青翹抗菌作用奠定基礎(chǔ)。

【參考文獻(xiàn)】

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