硒蛋白P在結腸癌組織中的表達研究論文

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【關鍵詞】腫瘤/病理學；蛋白質類/分析；硒；免疫組織化學

【Abstract】AIM:ToinvestigatetheexpressionandsignificanceofselenoproteinPincoloncarcinomatissues.METHODS:Sampleswerederivedfrom30casesofcoloncarcinoma，and30correspondingnormalcolontissueswereusedascontrols.TheexpressionofselenoproteinPincoloncarcinomatissueswereinvestigatedbyimmuohistochemicalstain.RESULTS:TheexpressionrateofselenoproteinPincoloncarcinoma(60.0%)wassignificantlylowerthanthatoftheircontrolnormaltissues（80.0%,P<0.05).TheexpressionrateofselenoproteinPinhighandmoderatedifferentiationcases（86.7%）washigherthanthatoflowerdifferentiationtissues（33.3%,P<0.05).TheexpressionrateofselenoproteinPwas58.8%inIIIstagecases,and61.5%inIIIstagecases(P>0.05).CONCLUSION:TheexpressionwhichofselenoproteinPislowincoloncarcinomatissues,whichisrelatedwithdifferentiationlevelsofcoloncarcinoma,butnotwithTNMstageoftumor.

【Keywords】Neoplasms/pathology;proteins/analysis;selenium;immuohistochemistry

【摘要】目的：研究結腸癌組織中硒蛋白P的表達及其意義.方法：選用手術切除結腸癌組織30例，同時另取30例正常結腸組織作為對照，用免疫組化的方法觀察硒蛋白P在結腸癌組織中的表達.結果：硒蛋白P在結腸癌組織中的陽性表達率(60.0%)低于其在正常結腸組織中的表達率（80.0%），二者相差有統計學意義(P<0.05)；硒蛋白P在高、中分化病例中表達率(86.7%)高于低分化例病例中表達率(33.3%)，二者相差有統計學意義(P<0.05)；硒蛋白P在Ⅰ~Ⅱ期病例中表達率為58.8%，Ⅲ期病例中表達率為61.5%，二者相差無統計學意義(P>0.05).結論：硒蛋白P在結腸癌組織中為低表達，與腫瘤的分化程度有關，與腫瘤的TNM分期無關.

【關鍵詞】腫瘤/病理學；蛋白質類/分析；硒；免疫組織化學

硒是哺乳動物必需的一種微量元素，缺硒會導致多種病理狀態.硒蛋白是微量元素硒發揮生物學功能的主要形式.為了進一步探討硒蛋白P在腫瘤中的作用，我們利用免疫組化技術觀察該抗體在結腸癌中的表達.

1對象和方法

1.1對象結腸癌30例，為第四軍醫大學唐都醫院普通外科200310/200505手術切除標本,男17例，女13例.年齡45~79(平均61.4)歲；高分化10例，中分化5例，低分化15例；腫瘤TNM分期：I期8例，II期9例，III期13例.另取30例原發器官正常結腸組織作為對照.

兔抗人硒蛋白P多克隆抗體，由中國醫學科學院腫瘤研究所分子腫瘤學國家重點實驗室先期制備保存.免疫組化試劑盒購自北京中杉公司.

1.2方法①將組織蠟塊切片，常規脫臘：70℃烤片2h，二甲苯10min×2次.水化：PBS洗3min×2次.②30mL/LH2O2溶液室溫處理10min，雙蒸餾水洗3min×3次.③在0.01mol/L枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）92~98℃水浴中處理25min修復抗原，自然冷卻到室溫.緩沖液洗3min×2次.④分別用正常山羊血清和卵白素室溫封閉2h.⑤滴加稀釋的一抗SelP多克隆抗體（1∶50），37℃孵育4h.PBS洗3min×3次.⑥生物素結合的羊抗兔IgG二抗和ABC復合物室溫分別孵育2h.⑦滴加DAB溶液顯色，注意觀察顏色變化，及時終止，沖洗.⑧蘇木素復染，梯度乙醇脫水，封片.

combsp;以免疫組化試劑盒中的陽性片作陽性對照，以0.01mol/LPBS（pH7.4）和正常羊血清分別替代一抗和二抗作為陰性對照.陽性染色為棕黃色，定位于細胞胞質和細胞膜.染色陽性細胞數量評分：0分（全片未見著色或少于5%細胞散在著色），1分（5%~25%細胞著色），2分（25%~50%細胞呈陽性），3分（50%~75%細胞染色陽性），4分（>75%細胞染色陽性）.染色強度評分：0分（陰性），1分（弱陽性），2分（中等陽性），3分（強陽性）.染色陽性細胞數量評分與染色強度評分之積為最終染色評分標準：0分（陰性），0~4分（弱表達），4~8分（中等表達），8~12分（強表達）.

統計學處理:采用SPSS10.0統計軟件包，用非參數檢驗，兩個獨立樣本Wilcoxon檢驗進行統計學分析.P<0.05認為存在顯著性差異.

2結果

2.1硒蛋白P在腫瘤及正常對照組織中的表達免疫組化染色結果見表1.表1硒蛋白P在腫瘤及正常對照組織中的表達陽性信號為棕褐色或棕黃色，呈彌漫狀或片狀分布.硒蛋白P染色主要定位于細胞胞質及胞膜中，細胞外間質也有部分染色，而細胞核無染色.在結腸癌中硒蛋白P表達與分化程度有關，尤其是伴黏液分泌者中低表達明顯；細胞富于黏液成分或杯狀細胞無論是正常還是腫瘤中表達均為陰性.硒蛋白P在正常對照組織中的陽性率表達高于結腸癌中的表達（圖1）.

2.2硒蛋白P在腫瘤中的表達與其分化程度及臨床分期的關系見表2.

3討論

目前硒蛋白P真正的生物學功能還不清楚，特別是與腫瘤發生的關系不甚明了.Burk等［1］認為硒蛋白P可能是自由基的清除劑.硒蛋白P可能由于其抗氧化的保護性作用，通過消除自由基，減少DNA損傷，預防突變阻止腫瘤的發生［2-3］.其他可能的機制是調節機體免疫系統，增強機體免疫系統的抗癌活力；拮抗腫瘤細胞內cGMP的增加，抑制DNA,RNA及蛋白質的合成；抑制腫瘤病變中新生血管生成［4-6］

A:結腸癌組織;B:正常結腸組織.

圖1硒蛋白P的表達ABC×200表2硒蛋白P在結腸癌組織中的表達與臨床病理學因素的關系現認為血漿中硒蛋白P水平和腫瘤的發生呈負相關，PerssonMoschos等［7］發現對應于硒蛋白P濃度的5個水平，從低到高，發生腫瘤的相對危險度分別為5.2,2.3,2.9,2.2和1.0，硒蛋白P水平最低組發生呼吸道和消化道腫瘤的概率分別是硒蛋白P高水平組的6倍和3.4倍，表明隨著硒蛋白P濃度增高，腫瘤發生的危險度降低.

Mork等［2］發現，結直腸腺瘤較鄰近正常黏膜硒蛋白PmRNA表達下降，并認為在結直腸腺瘤硒蛋白PmRNA表達下調可能是腺瘤到腺癌發展過程中的一個早期事件，這種下調使硒蛋白P表達減少，導致DNA受到氧化損傷，從而發生基因突變，引起腫瘤的發生和促進腫瘤的發展，而且硒蛋白P和同屬硒蛋白的胃腸谷胱甘肽過氧化物酶在抗氧化細胞抵抗腺瘤腺癌演變中起到互補作用.AlTaie等［3］證實在結直腸癌中其mRNA表達明顯減少或缺失，表明在結腸癌中可能存在著硒蛋白P基因的突變和轉錄異常.

本結果提示，硒蛋白P表達在結腸癌與正常組織差異顯著，表達與分化程度有關.伴黏液分泌者中低表達，細胞富于黏液成分或杯狀細胞無論是正常還是腫瘤中表達均為陰性.或許提示正常腸黏膜杯狀細胞分泌功能與硒蛋白P表達無關；同樣，其在結腸癌中的表達與腫瘤分期無關.在結腸癌硒蛋白P低表達，除了受硒營養狀況（血漿中硒蛋白P濃度）的影響，可能存在著硒蛋白P基因的突變和轉錄異常［3］，失去這一保護性因素，可能導致了腫瘤的發生.

【參考文獻】

［1］BurkRF,HillKE.Regulationofselenoproteins［J］.AnnuRevNutr,1993,13:65-81.

［2］MorkH,AlTaieOH,BahrK,etal.InversemRNAexpressionoftheselenocysteinecontainingproteinsGIGPxandSePincolorectaladenomascomparedwithadjacentnormalmucosa［J］.NutrCancer,2000,37(1):108-116.

［3］AlTaieOH,UceylerN,EubnerU,etal.ExpressionprofilingandgeneticalterationsoftheselenoproteinsGIGPxandSePPincolorectalcarcinogenesis［J］.NutrCancer,2004,48(1):6-14.

［4］GantherHE.Seleniummetabolismandmechanismsofcancerprevention［J］.AdvExpMedBiol,2001,492:119-130.

ThompsonHJ,etal.SeleniuminCancerPrevention:ClinicalIssuesandImplications［J］.CancerInvest,2001,19(5):540-553.

［6］BrownKM,ArthurJR.Selenium,selenoproteinsandhumanhealth:areview［J］.PublicHealthNutr,2001,4(2B):593-599.

［7］PerssonMoschosME,StavenowL,AkessonB,etal.SelenoproteinPinplasmainrelationtocancermorbidityinmiddleagedSwedishmen［J］.NutrCancer,2000,36(1):19-26